糖尿病患者血清MLCK水平與其它糖尿病指標相關性研究

劉宓，潘衛，李興

(1、貴陽醫學院附屬貴州省腫瘤醫院檢驗科，貴州貴陽550004；2、貴陽醫學院檢驗系，貴州貴陽550004)

·論著·

糖尿病患者血清MLCK水平與其它糖尿病指標相關性研究

劉宓1，潘衛2，李興2

(1、貴陽醫學院附屬貴州省腫瘤醫院檢驗科，貴州貴陽550004；2、貴陽醫學院檢驗系，貴州貴陽550004)

目的探討糖尿病患者血清非骨骼肌型肌球蛋白輕鏈激酶(nskMLCK)和常用糖尿病檢測指標的關系，以及nskMLCK在糖尿病時的可能作用。方法檢測144例糖尿病患者血清nskMLCK、空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、維生素D3(VD3)以及空腹血清C肽水平，采用Spearman等級相關分析各指標與血清nskMLCK的相關性；同時分析包括高血壓、高血脂等因素對血清nskMLCK的影響。結果與糖尿病相關檢測指標進行相關性分析顯示，血清nskMLCK水平與BMI、FPG、HbA1c及VD3之間無相關性，與空腹C肽水平呈負相關(r=－0.187)；分析其它可能影響血清nskMLCK水平的因素表明，血清nskMLCK的水平受代謝綜合征和病程的影響(P=0.045和0.011)，單獨高血壓、高血脂、白內障及性別與血清nskMLCK水平無關。結論糖尿病時，患者血清nskMLCK與空腹C肽的負相關提示血清nskMLCK可能參與了胰島素水平的調節，在糖尿病的發生發展中起到重要的作用。

糖尿病；肌球蛋白輕錠激酶；空腹C肽

肌球蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kianse，MLCK)是激活肌球蛋白輕鏈(MLC)磷酸化的重要激酶，在細胞黏附、細胞運動和遷移、細胞凋亡等一系列機體的生理活動中起著重要的作用[1]。除了參與正常的生理活動，MLCK的表達異常與許多疾病如自發性高血壓[2]、急性肺損傷[3]、腸炎性疾病[4]、哮喘[5]、腫瘤細胞的侵襲轉移以及細胞凋亡[6，7]、動脈粥樣硬化[8]、心肌肥大[9]等的發生相關。

本課題組前期研究發現，糖尿病時MLCK水平明顯升高[10]，因此本研究擬通過分析MLCK與一些常用的糖尿病檢測指標進行比較，探討MLCK與糖尿病的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象2012年1月至9月貴陽醫學院收治的糖尿病患者144例，均符合2010年中國糖尿病指南的診斷標準；其中男性76例，女性68例；平均年齡63.04±2.5歲。同時收集條件匹配的131例健康人做為對照，男性61例，女例70例，平均年齡60.35±3.7歲。

1.2 樣本收集和檢測所有研究對象于早晨空腹抽取抗凝全血(EDTA-K2抗凝)和靜脈血，離心取血漿和血清樣本，檢測糖化血紅蛋白(glycohemoglobin,HbA1c)、空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、維生素D3(Vitamin D3,VD3)和空腹C肽。未能立即檢測的血清樣本保存在-80℃低溫冰箱中，檢測前取出復溶至常溫。

1.3 主要試劑及儀器nskMLCK試劑(Santa Cruz Biotechnoloty，Inc)，FPG試劑和HbA1c試劑(SIEMENS診斷)，VD3和空腹C肽試劑(羅氏診斷)；酶標儀(TECAN infinite F50)，全自動生化分析儀(SIMENS公司ADVIA2400 Chemistry System)，全自動糖化血紅蛋白分析儀(SIMENS公司DCA Vantage Analyzer)，全自動化學發光免疫分析儀(羅氏公司E170)。

1.4 實驗方法雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測各樣本血清nskMLCK水平，常規化學法檢測FPG，電化學發光免疫分析法檢測C肽和VD3，POCT免疫測定法檢測HbA1c。分析前采用各項目配套定標品和室內質控品同時檢測，當室內質控結果在控后方進行研究樣本的檢測。

1.5 數據統計采用SPSS13.0進行數據統計，由于血清nskMLCK呈非正態分布，因此采用Spearman等級相關進行數據分析，P＜0.05差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 糖尿病患者血清nskMLCK水平與對照組相比，糖尿病組血清nskMLCK水平明顯高于對照(P= 0.009)，差異具有統計學意義。見表1。

表1 糖尿病時血清nskMLCK的表達水平(中位數，P25-P75)

2.2 血清nskMLCK與糖尿病相關檢測指標的關系采用Spearman等級相關分析糖尿病時nskMLCK與各指標之間的相關性(結果見表2)。結果顯示，血清nskMLCK水平與BMI、FPG、HbA1c及VD3無相關性，與空腹C肽水平呈負相關(r=－0.187)，差異具有統計學意義(P=0.030)。

2.3 可能影響糖尿病組血清nskMLCK水平的因素分析采用多個獨立樣本比較的秩和檢驗分析顯示，代謝綜合征(P=0.045)和病程(P=0.011)與血清nskMLCK的水平相關，單獨高血壓、高血脂(P= 0.61)、白內障(P=0.602)及性別(P=0.055)與血清nskMLCK水平無關。

3 討論

研究采用Spearman等級相關對各指標間的關系分析后發現，血清nskMLCK水平與FPG濃度變化無相關性，與HbA1c也無相關性。本課題組前期的動物研究顯示，9周時組織MLCK水平升高呈現統計學差異，至12周時糖尿病大鼠血清MLCK水平明顯高于6周和9周的大鼠，差異具有統計學意義。表明隨著疾病的進展，糖尿病大鼠MLCK水平在逐漸升高。由于FPG代表患者抽血時的血糖濃度，而HbA1c代表患者2～3月前的血糖水平，因此推測血清nskMLCK的水平升高與血糖濃度有關，但其水平的變化與血糖濃度的變化無關。也就是說，當患者血糖水平持續維持在高濃度時可能會誘導機體MLCK的表達增強，但MLCK水平的變化并不受血糖水平變化的影響，其水平的變化可能由多種機制進行調控，這還需在我們在進一步的研究中加以分析。另外由于糖尿病是一種慢性疾病，大多數研究對象已經接受了較長時間的降糖治療，因此，我們的研究結果也可能會受到療程、療效等因素的影響。

表2 糖尿病組血清nskMLCK與各指標的相關性

除與空腹血糖濃度和HbA1C無關外，血清nskMLCK水平與BMI和VD3水平也無相關性，與空腹C肽水平具有負相關(P=0.030)。C肽是由胰島素裂解產生的一段含有31個氨基酸的多肽。糖尿病患者由于胰島素水平明顯不足，因此C肽水平也相應降低。以前人們認為C肽是無生物活性的肽段，但近年來的研究顯示C肽與糖尿病多種并發癥相關。對1型糖尿患者在使用胰島素控制血糖的情況下增加使用C肽，可提高患者腎血流量，降低腎小球的濾過率及尿白蛋白排泄率，降低其高灌注、高濾過[11]。還可防止TNF誘導的近端腎小管上皮細胞的凋亡[12]。Kernell等[13]發現，1型糖尿病患者的空腹C肽水平與視網膜屏障功能存在負相關。通過糖尿病大鼠模型的研究顯示，在糖尿病早期單獨應用C肽可以減少出現前色素膜，視網膜周圍血流灌注增加。另有研究顯示，C肽對糖尿病多發性神經病變有冶療效果[14]。本研究發現血清nskMLCK與空腹C肽水平呈負相關，提示MLCK還可能參與胰島素水平的變化，進而在糖尿病病變中發揮作用。

為了解可能影響血清MLCK水平的因素，我們還分析了高血壓、高血脂、白內障、代謝綜合征以及患者年齡、病程、性別對血清nskMLCK的影響情況。其中血清nskMLCK的水平受代謝綜合征和病程的影響，而與單獨高血壓、高血脂、白內障及性別無關。該研究結果顯示，血清nskMLCK水平不受空腹血糖濃度、血壓、血脂和性別等的影響，可能是獨立的用于糖尿病及微血管并發癥的一個指標，糖尿病患者患有代謝綜合征及糖尿病病程是影響血清nskMLCK水平的因素。

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Study of correlation between the levels of serum MLCKs and other indicators of diabetes

LIU Mi,PAN Wei,LI Xing.Department of Clinical Laboratory,the Affiliated Cancer Hospital of Guiyang Medical College，Guiyang 550004,China

Objective To investigate the correlation between serum non-skeletal muscle myosin light chain kinase(nskMLCK) and other indicators of diabetes,and the possible role of nskMLCK in diabetes.Methods The levels of serum skMLCK，fasting plasma glucose(FPG),glycohemoglobin(HbA1c),Vitamin D3(VD3),and fasting serum C peptide were detected in 144 patients with diabetes.The relationships between serum nskMLCK and other indicators of diabetes were analyzed by Spearman＇s rank correlation analysis,and the influences of hypertension,hyperlipidemia and other factors on the level of serum nskMLCK were also analyzed.Results The results showed that serum nskMLCK had no correlation with BMI,FPG,HbA1cand VD3,but had negative correlation with fasting C peptide(r=-0.187).Analysis of other factors acting on the levels of serum nskMLCK showed that metabolic syndrome and disease duration could effect the levels of serum nskMLCK(P=0.045 and 0.011,respectively).Hypertension,hyperlipidemia,cataract and gender was unrelated to the levels of serum nskMLCK.Conclusion The negative correlation with fasting C peptide indicates that serum nskMLCK might play an important role in diabetes.

Diabetes mellitus;Myosin light kinase;Fasting C peptide

R587.1,R446.62

A

1674-1129(2014)06-0674-03DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.008

2014-08-15；

2014-10-01)

貴陽市科技計劃項目（編號：201310320）；貴州省優秀科技教育人才省長專項資金項目（編號：黔省專合字201240）。

劉宓，女，1975年4月生，副主任技師，碩士研究生，主要研究方向為糖尿病的蛋白質組學

李興，男，教授，博士研究生，碩士生導師，主要從事糖尿病蛋白質組學研究。