一種含腐殖酸水溶肥料的經口急性毒性評價

吳爭，丁晟，夏芝璐

(江西省疾病預防控制中心，江西南昌330029)

·實驗研究·

一種含腐殖酸水溶肥料的經口急性毒性評價

吳爭，丁晟，夏芝璐

(江西省疾病預防控制中心，江西南昌330029)

目的對一種新型含腐殖酸水溶肥料進行小鼠經口急性毒性實驗，為評價其安全性提供實驗依據。方法按照《食品安全性毒理學評價程序和方法》(GB15193-2003)進行毒性試驗和安全性評價。結果該受試物對雄性小鼠經口LD50為2.71g/kg BW，對雌性小鼠經口LD50為3.69g/kg BW。結論該受試物屬低毒。

腐殖酸；水溶肥料；經口急性毒性

含腐殖酸[1]水溶肥料[2]是以適合植物生長所需比例的礦物源腐殖酸，添加適量氮、磷、鉀大量元素或銅、鐵、錳、鋅、鉬微量元素而制成的液體或固體水溶肥料，溶解速度快，易被作物吸收，具有改良土壤[3]、使化肥增效、刺激作物生長并增強作物抗逆性以及減輕土壤重金屬污染等作用。本實驗采用小鼠灌胃來觀察受試物口服后的急性反應，以霍恩氏(Horn)法[4]計算LD50，為初步評價受試物的安全性提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 受試物含腐殖酸水溶性肥料由江西某生物工程有限公司提供，呈深棕色粉末樣固體。

1.2 實驗動物選用SPF級ICR小鼠，體重18～22g。由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。實驗動物生產許可證號：SCXK(湘)2011-0003。

1.3 儀器和試劑電子天平、注射器、灌胃針頭。

1.4 預實驗方法根據參考文獻[6]，小鼠口服LD50＞5g/kg BW，將樣品配制成10g/kg BW、5g/kg BW兩個濃度的受試藥液，分別灌喂10只小鼠，雌雄各半，灌胃體積按0.2ml/10g；一次性給予，觀察小鼠24h內中毒情況。根據動物中毒癥狀和死亡情況確定正式實驗的劑量系列。

1.5 正式實驗方法[5]將小鼠隨機分為4個劑量組，每組10只，雌雄各半，按霍恩氏(Horn)法選擇：10g、4.64g、2.15g、1g/kg BW劑量系列。小鼠實驗前隔夜禁止食，按劑量一次性灌胃給予后觀察14d內小鼠中毒情況和死亡個數，求得LD50及95%可信限，并進行毒性分析。

1.6 觀察指標

1.6.1 一般觀察指標每天觀察動物的外觀體征，行為活動，攝食及大小便等。

1.6.2 中毒癥狀中毒的發生、發展過程、中毒體征及大體解剖。

1.6.3 死亡數量和死亡時間計數灌胃后14d內各組小鼠的死亡個數和死亡時間。

2 結果

2.1 中毒表現及大體解剖觀察染毒后1h，10g/kg BW、5g/kg BW組動物出現煩躁不安、豎毛，進而懶動、萎靡不振、匍伏，至染毒后4h出現呼吸因難、抽搐、肛周污穢；這兩組動物死亡均發生在染毒后24h～第3d內，僅1只雌鼠存活；2.15g/kg BW組動物在染毒初期均出現行動遲緩、軟癱體征，至染毒后第4d動物中毒癥狀有所緩解，染毒一周后癥狀消失，恢復正常。1g/kg BW組動物染毒后未出現明顯中毒癥狀，觀察期內未發生死亡。對死亡動物進行尸檢，解剖后肉眼觀察，胃黏膜有明顯出血、肺臟和腎臟均有淤血等病理變化。

2.2 死亡情況和毒性分級各劑量組動物死亡數見表1。

表1 急性經口毒性試驗結果

3 討論

腐殖酸主要是動植物遺骸經過微生物的分解和轉化，以及地球化學的一系列過程而形成的分子量大小不一的脂肪芳香族羥基羧酸的混合物，可應用于農林牧、化工、環保等各個領域，特別是當下提倡生態農業建設、無公害農業生產、更使“腐殖酸”備受推崇。肥料雖然施用于作物，但有無毒性和副作用與人體健康息息相關，因而在肥料進入市場前必須進行安全性評價。

根據急性毒性分級標準，本次急性經口毒性實驗的受試物屬低毒物。此結果與參考文獻中受試物的小鼠口服LD50＞5g/kg BW相比，有較大差異。主要原因可能是參考文獻中受試物是成分較為單一的腐殖酸，而本次試驗的受試物則是成分相對復雜的肥料成品。有研究人員發現由于生產原料中游離腐殖酸含量不高，提取步驟繁瑣[7]、復雜，提取方法也有多種；有的提取方法雖然腐殖酸產出率較高，但提取過程常用到有毒的化學物，提取出的腐殖酸含有大量有毒雜質，在后期合成肥料時導致產品毒性增加。本次實驗結果提示生產廠家應提高安全生產意識，在產品生產、儲存、運輸各環節加強管理，防止有毒物質外泄，避免污染環境；同時希望生產廠家在以后生產過程中改進工藝，降低產品毒性。

雖然動物實驗顯示接觸高濃度受試物才會出現中毒反應，但人類與動物之間對毒物的反應存在物種差異，相同物種的不同性別、不同個體對毒物的反應也都存在差異，如表1所示，因此生產工人及產品使用者在操作時應做好個人防護工作[8，9]，避免吸入有毒粉塵或氣溶膠；若出現不良反應需及時就醫。

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Assessment on the acute oral toxicity of a water soluble fertilizers containing humic acids

WU Zheng,DING Sheng,XIA Zhilu.Jiangxi Provincial Center for Disease Control and Prevention,Nanchang 330029,China

Objective To study the acute oral toxicity of a water soluble fertilizers containing humic acids in rats,and provide experimental evidence for its safety.Methods Toxicity test and safety evaluation were carried out according to the Procedures and methods for toxicological assessment of food(GB15193-2003).Results LD50 of the sample on acute oral toxicity test in male rats was 2.71g/kg BW,in female rats was 3.69g/kg BW.Conclusion This sample was classified as low toxicity substance.

Humic acids;Water soluble fertilizers;Acute oral toxicity

R-332

A

1674-1129(2014)06-0686-02DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.012

2014-07-31；

2014-08-27)

吳爭，1978年出生，男，本科，學士，主管技師，研究方向為營養與食品安全、毒理學實驗與動物實驗。