群體反應性抗體特殊檢測結果的探討

聶益軍，張瓊

(1、南昌大學第一附屬醫院檢驗科，江西南昌330006；2、江西省人民醫院，江西南昌330006)

·檢驗與臨床·

群體反應性抗體特殊檢測結果的探討

聶益軍1，張瓊2

(1、南昌大學第一附屬醫院檢驗科，江西南昌330006；2、江西省人民醫院，江西南昌330006)

目的通過對群體反應性抗體(panel reaction antibodies，PRA)特殊結果的探討，了解PRA抗體產生及移植排斥反應的免疫學基礎理論。方法采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，監測腎移植受者外周血人類白細胞抗原(HLA)-IgG抗體的水平及其特異性變化。結果無傳統致敏因素受者156例中3例產生PRA抗體，百分比為1.92%；產生PRA抗體再次復查者68例中15例PRA抗體特異性發生改變，百分比為22.06%；再次移植受者15例中3例未產生PRA抗體，百分比為20%。結論(1)除妊娠、輸血、移植外，感染也可導致機體產生PRA抗體；(2)PRA抗體的產生是一個復雜的機體免疫反應；(3)除PRA抗體外，其它因素(如MICA抗體、次要組織相容性抗體等)也可導致排斥反應的發生。

群體反應性抗體；腎移植；排斥反應

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.029

腎移植是晚期腎功能衰竭的有效替代治療方法,腎移植的成功與否在很大程度上受到群體反應性抗體(PRA)介導的急慢性排斥反應的影響。腎移植受者在受到同種抗原人類白細胞抗原(HLA)免疫致敏后,外周血中容易產生PRA，其中HLA-IgG抗體是引起超急性排斥反應的關鍵因素,并且與急性排斥反應、慢性排斥反應和移植物功能延遲(DGF)等密切相關[1]。由于PRA具有在移植前預測排斥反應和移植后預警移植物喪失的重要作用，因此目前PRA檢測已被列入腎移植組織配型的常規項目并予以監測。在江西省人民醫院移植中心監測的受體中，筆者發現有3種特殊檢測結果有待討論并進行解釋。現將其報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料2012年11月至2013年10月期間擬接受腎移植的受者287例，其中男156例,女121例,年齡16～64歲，平均42.6歲。選取的受者為經江西省人民醫院確診為尿毒癥或腎功能衰竭患者(排除腫瘤、結核史及神經系統病史)，同時與受者簽訂試驗知情同意書。第一種特殊情況為無傳統致敏因素而產生了PRA抗體。這些無傳統致敏因素(即無輸血、妊娠或移植史)受者156例，其中男94例,女62例,年齡16～62歲，平均41.2歲。第二種特殊情況為已產生PRA抗體再次復查者，其抗體特異性可發生改變。已產生PRA抗體再次復查者68例，其中男45例，女23例，年齡23～64歲，平均45.8歲。第三種特殊情況為再次移植受者未產生PRA抗體。再次移植受者15例，其中男9例，女6例，年齡為38～62歲，平均48.5歲。

1.2 HLA-IgG抗體的監測

1.2.1 試劑美國One Lambda公司提供的Lambda抗原板(LAT1240)。

1.2.2 HLA-IgG抗體檢測方法采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA),監測腎移植受者外周血HLA-IgG抗體的水平及其特異性變化[2]。具體步驟如下：(1)用200μl蒸餾水溶解對照血清，徹底溶解后,加抗體稀釋液1800μl配成1∶10的稀釋液。(2)用300μl抗體稀釋液稀釋待測150μl血清。(3)在包被了HLA抗原的Tarasaki微孔板第一行中加入10μl稀釋的陽性對照血清，2～6行加入第一人份受檢血清，7～11行加入第二人份的受檢血清，37℃孵育1h。(4)用緩沖液洗滌2次。(5)按1∶100的比例取酶聯抗體10μl和抗體稀釋液990μl混勻，每孔中加入10μl稀釋的酶聯抗人IgG抗體，37℃孵育1h。(6)甩干血清，緩沖液洗滌。(7)分別取底物A和B各500μl混勻，每孔加入10μl底物液，37℃避光孵育10～15min。(8)應用美國One Lambda公司專用軟件(HLA fusion1.3.1)分析患者血清中HLA抗體水平及其特異性。

1.3 統計學分析采用SPSS16.0統計學軟件進行數據處理，計數資料之間采用u檢驗，分別將三種特殊情況下的兩類人群(即產生新的PRA抗體人群百分比與不產生新的PRA抗體人群百分比)進行對比分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 無傳統致敏因素受者156例中3例產生PRA抗體，百分比為1.92%；153例未產生PRA抗體，百分比為98.08%。見表1。

2.2 產生PRA抗體再次復查者見表1。68例中15例PRA抗體特異性發生改變，百分比為22.06%；53例PRA抗體特異性未發生改變，百分比為77.94%。見表1。

2.3 再次移植受者15例中3人未產生PRA抗體，百分比為20%；12例產生PRA抗體，百分比為80%。結果見表1。

表1 群體反應性抗體特殊檢測結果(%)

3 討論

腎移植是晚期腎功能衰竭的有效替代治療方法，但移植排斥反應的發生仍然嚴重困擾著臨床移植。根據美國UNOS近期對57303例腎移植的數據分析，影響腎移植存活率的前五個因素為：移植手術與相關維護、供者死亡原因、HLA配型、PRA百分比、供者年齡。五個因素中移植手術與相關維護、HLA配型、PRA百分比涉及到較多的技術問題，所以PRA檢測對提高腎移植的存活率具有重要的臨床應用價值[3，4]。PRA是指腎移植受者體內存在的抗HLA抗體。反復輸血、妊娠、移植失敗等情況均使受者體內出現PRA抗體,導致患者預致敏情況[5]。資料表明,腎移植受者體內的抗HLA抗體水平的高低，可反映患者的預致敏程度,對移植物的術后效果影響非常明顯。術前檢測患者體內PRA水平,能夠幫助外科醫生合理選擇供、受者和移植時機,有效提高移植物的生存率及有效率。

在大多數文獻中均有報道，通過妊娠、輸血、移植可造成免疫系統接觸另一個體的同種抗原，導致免疫系統激活從而產生PRA抗體[5]。從結果2.1 中筆者發現在沒有上述原因的病人也會出現PRA抗體，這些抗體的產生可能與感染的微生物發生交叉反應有關。這些感染的微生物可能在分子水平上與HLA抗原結構相似，導致機體產生PRA抗體。移植抗原作為外源性抗原刺激免疫系統,產生移植抗原的特異性免疫應答,是移植排斥反應的物質基礎。在恰當外在干預下,甚至可“誘騙”受體免疫系統,產生針對移植抗原的特異性免疫耐受[6，7]。

機體在受到致敏原的刺激下產生PRA抗體是一個復雜的機體免疫反應，其機理至今尚未完全闡明，但可以肯定的是機體所產生的PRA抗體是一種多克隆抗體。迄今為止,我們所談的HLA抗體都是通過特殊群體細胞或抗原檢測出來的，并且許多研究所用的細胞并非直接來自供者。發生腎移植排斥的患者所擁有抗體的特異性，并不同于被動免疫所獲得的抗體特異性。根據Ceppellini等研究發現,雖然通過挑選受體和供體以期獲得單價特異性血清，然而免疫或致敏常常產生額外的抗體特異性，其原因尚不清楚[8]。雖然一些患者可以通過治療調節抗體的產生，降低了抗體水平，但對另一部分患者經過治療后依然保持抗體高滴度與寬特異性，許多年后抗體水平仍然沒有降低。目前還不太了解抗體水平下降的調節因素。上述理論在一定程度上解釋了結果2.2(有些患者PRA抗體發生了改變)。從等待移植患者體內剔除抗體，經過治療后PRA抗體陰性的病例也逐漸增多，但也并不總是成功[9]。目前越來越多中心在腎移植治療中采用不同剔除抗體的方法，常采用的方法有免疫抑制劑、血漿置換、免疫吸附和靜脈注射免疫球蛋白等方法[10]。

從結果2.3中筆者發現移植排斥反應后也可能PRA陰性。再次移植患者未檢出PRA抗體有兩種可能，一是患者體內確實未產生抗體，二是患者體內的PRA抗體是我們暫時不能檢測到的HLA抗體。腎移植排斥反應的發生有免疫性和非免疫性因素，其中非免疫性因素包括移植手術和相關維護、供者年齡和死亡原因等；免疫性因素主要有HLA抗體(即PRA)的影響,同時影響移植物的抗體也可能是針對非HLA抗原的抗體。在發生排斥的腎移植患者血清中發現的MICA抗體(抗人類主要組織相容性復合體I類相關鏈A抗原抗體),引起了人們的關注，因這些抗體是在內皮細胞而非淋巴細胞上檢測到的。在排斥同種異體移植物的患者體內，抗體也有針對上皮細胞、單核細胞和內皮細胞系的[11]。次要組織相容性位點并不是HLA。研究顯示，HLA匹配的器官移植患者中還是有出現排斥反應、腎功延遲、移植腎切除的一部分患者,由此可以證實除HLA外還有一些另外的免疫因素參與了排斥反應。MICA屬于HLA-Ⅰ類分子,組成、表達和產物與HLA-Ⅰ類不大相同,有不同的基因等位,多態性不如經典的HLA基因數量多但其表達水平很高,而針對次要組織相容性位點的抗體還未被發現。抗體是體液免疫理論中關鍵的激發因素，但抗體是怎樣通過一系列活動來產生損害尚待查明。

綜上所述，PRA抗體檢測在腎臟移植中具有無可替代的作用，但PRA抗體的產生受多種因素的調節。在實際工作中，應根據患者的病情及臨床治療等因素綜合考慮才能更好地對PRA結果進行合理的解釋或理解。

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R446.62，R392.4

A

1674-1129(2014)06-0728-02

2014-07-18；

2014-09-25)