Folin-Ciocalteus法測定馬鈴薯中的總多酚

李靜，聶繼云，毋永龍

（中國農業科學院果樹研究所，遼寧興城125199）

Folin-Ciocalteus法測定馬鈴薯中的總多酚

李靜，聶繼云*，毋永龍

（中國農業科學院果樹研究所，遼寧興城125199）

本文建立了紫外分光光度計法準確測定馬鈴薯中的總多酚。對影響Folin-Ciocalteus法測定馬鈴薯中總多酚含量的主要因素進行了研究，確定了在1.0 mL樣品提取液或標液中依次加入5.0 mL水、1.0 mL顯色劑和3.0 mL 7.5%碳酸鈉溶液，搖勻，顯色2 h后在765 nm測定吸光度的最佳檢測條件，并對馬鈴薯樣品進行了測定，精密度為7.7%，回收率為100%～108%。本方法適用于常規實驗室馬鈴薯總多酚的測定。

馬鈴薯；總多酚；Folin-Ciocalteus法

馬鈴薯的多酚含量較高，在加工過程中，馬鈴薯中含有的多酚類物質與多酚氧化酶（PPO）作用氧化成醌，在進一步縮合成黑色素，引起褐變，影響制品的風味和營養[1,2]，因此在加工和育種中需要對多酚含量進行測定和監控。常用的植物中多酚測定方法有皮粉法、高錳酸鉀滴定法、酒石酸亞鐵螯合法、香草醛法、正丁醇-鹽酸法、Folin-酚法、鐵氰化鉀分光光度法（PB法）和液相色譜法等[3-10]。測定蔬菜中總多酚常采用Folin－酚法，包括Folin-Denis法（即FD法）和Folin-Ciocalteus法（即FC法），FC法是FD法的改進方法，它是在FD試劑中加入鋰鹽，克服了FD試劑的不穩定性，較之更為靈敏[7,8]。雖已用于馬鈴薯中總多酚的測定[9,10]，但未見對其最佳測定的條件篩選，不利于馬鈴薯中總多酚的準確測定。本試驗對用Folin-Ciocalteus法測定馬鈴薯中總多酚含量的測定條件進行了研究，篩選了最佳測定條件，獲得了很好的精密度和準確度，為馬鈴薯中總多酚的準確測定提供了一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 馬鈴薯樣品

市售馬鈴薯，洗凈晾干，取可食部分切碎，液氮冷凍研磨，-80℃冷凍備用。

1.1.2 試劑

鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰、磷酸、鹽酸、溴水和乙醇為分析純。一水合沒食子酸標樣，Sigma－Aldrich公司。水為蒸餾水。

1.1.3 試劑的配制

FC顯色劑：稱取50 g±0.01 g鎢酸鈉(Na2WO4· 2H2O)，12.5 g±0.01 g鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)，用350 mL蒸餾水溶于1 000 mL回流瓶中，加入25 mL磷酸(H3PO4≥85%)及50 mL濃鹽酸，充分混勻，小火加熱回流2 h，再加入75 g硫酸鋰，25 mL蒸餾水，0.5 mL溴水，然后開口繼續沸騰15 min，冷卻后定容500 mL，過濾，置于棕色瓶中，用時加入1倍蒸餾水。

7.5 %碳酸鈉溶液：稱取37.5 g±0.01 g無水碳酸鈉（Na2CO3）溶于250 mL溫水中，混勻，冷卻，稀釋至500 mL。室溫下至多保持1個月。

一水合沒食子酸標準溶液：準確稱取0.110 g± 0.001 g一水合沒食子酸，用70%乙醇溶液溶解并定容到100 mL容量瓶中，此溶液一水合沒食子酸濃度為1 000 mg/L；用5 mL分度吸管從此標準溶液吸取0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL到100 mL容量瓶中，用70%乙醇定稀釋到刻度線，即相當于0.0,10,20,30, 40,50 μg/mL的一水合沒食子酸標準溶液。

1.1.4 主要儀器

紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）、天平（日本島津）、冷凍研磨機（美國SPEX）、恒溫水浴鍋。

1.2 試驗方法

1.2.1 馬鈴薯中總多酚的提取

取馬鈴薯可食部分，液氮冷凍后，用冷凍研磨機研磨成粉末狀，稱取樣品粉末5 g，精確到0.01 g，用40 mL 70%乙醇溶液洗入50 mL棕色離心管中，30℃超聲30 min，9 000 r/min離心5 min，上清液倒入100 mL容量瓶中，殘渣再用70%乙醇溶液35 mL重復提取1次，合并2次上清液，用70%乙醇溶液定容，備用。

1.2.2 標準曲線的制作

用分度吸管從0.0，10，20，30，40，50 μg/ mL的一水合沒食子酸標準溶液系列中吸取1.0 mL，分別加5 mL水，1 mL FC顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，顯色，此時相當于0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μg/mL的一水合沒食子酸。放置2 h后，在765 nm波長下測定標準系列溶液的吸光度，繪制標準曲線（圖1）。

圖1 沒食子酸標準曲線Figure 1Standard curve of gallic acid

1.2.3 樣品的測定

吸取1.0 mL樣品溶液，分別加入5.0 mL水，1 mL FC顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，顯色，放置2 h后，在765 nm波長下測定樣品的吸光度，根據標準曲線分別求出樣品中總多酚的濃度。

2 結果與分析

2.1 顯色波長的選擇

對5.0 mg/L沒食子酸和馬鈴薯樣品提取液在相同條件下顯色，顯色后分別進行光譜掃描（圖2），從圖2可見，樣品提取物和沒食子酸標準品具有相同的光譜圖，說明，樣品提取液同標準品是一類物質。樣品提取物和沒食子酸標準品顯色后的在765 nm處有最大吸收峰，因此選擇測定波長為765 nm。

圖2 沒食子酸和馬鈴薯樣品光譜掃描圖Figure 2Scan of gallic acid solutionand extraction of potato

2.2 顯色時間的選擇

對5.0 mg/L沒食子酸標樣和馬鈴薯樣品提取液顯色后進行時間掃描（圖3），從圖3可見，標樣及樣品提取液在顯色初期吸光度變化較大，而在2 h（120 min）后顯色較穩定，因此選擇2 h后比色，測定，減小誤差。

2.3 方法回收率試驗

對馬鈴薯進行2個不同梯度的添加，每個梯度平行測定5次，回收率在100%～108%范圍內（表1），說明此方法具有較好的準確性。

2.4 馬鈴薯中總多酚含量的測定

圖3 沒食子酸和馬鈴薯顯色穩定性Figure 3Standing time of coloring by FC method ingallic acid solution and potato

表1 馬鈴薯的添加回收率Table 1Result of recovery experimentation in potatoes

對馬鈴薯進行平行測定，各9次，平行測定結果的相對標準偏差為7.7%（表2），說明該方法測定結果具有較好的精密度。

3 討論

利用紫外可見分光光度計Folin－酚顯色法測定馬鈴薯中總多酚時，測定的最佳波長和顯色時間往往影響檢測的靈敏度和測定的穩定性。本文通過對馬鈴薯提取液和標準品提取液的波長掃描篩選出馬鈴薯的最佳檢測波長為765 nm與周勝男和陸寧[9]測定馬鈴薯中總多酚時選擇的測定波長相同，而同曹艷萍等[10]檢測波長779 nm有所不同。本試驗通過馬鈴薯樣品提取液和標準品顯色后的穩定性監測，顯色穩定時間為2 h以上，這與周勝男和陸寧[9]以及曹艷萍等[10]選擇的顯色1 h后測定均有所不同。

通過對Folin－Ciocalteus顯色法測定馬鈴薯中總多酚測定條件的摸索，確定馬鈴薯中總多酚的測定最佳測定條件為使用70%乙醇提取馬鈴薯中的總多酚，吸取1.0 mL樣品提取溶液，分別加入5.0 mL水，1 mL FC顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，顯色，放置2 h后，在765 nm波長下測定，此方法準確，回收率為100%～108%；精密度高，變異系數僅為7.7%，完全適用于馬鈴薯中總多酚的測定。

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Determination of Total Polyphenols in Potato Using Folin-Ciocalteus Method

LI Jing,NIE Jiyun＊,WU Yonglong
(Institute of Pomology,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Xingcheng,Liaoning 125199,China)

An improved UV spectrophotometry method was developed for analysis of total polyphenols in potato. Folin-Ciocalteus method for total polyphenols determination in potato was studied.After a series of optimization experiments, thebestdeterminationprocedureofFolin-Ciocalteusmethodwasputforward,thatis,5.0mLwater,1.0mLcolorationreagent, and 3.0 mL7.5%sodium carbonate solution were added orderly into 1.0 mLextraction of sample or standard gallic acid,then blended,andmeasuredat765nmaftercolorationfor2h.Underthisprocedure,relativestandarddeviationofthemethodwas 7.7%,and average recovery rate was 100%-108%.This method is applicable to conventional laboratory determination of total polyphenolsinpotato.

potato;total polyphenols;Folin-Ciocalteus

S532

B

1672－3635（2014）01-0027-03

2013-07-10

農業行業標準研究項目(2013300）。

李靜（1972-），女，副研究員，從事食品品質與營養檢測及標準研究。

聶繼云，研究員，博士，主要從事果品品質和風險評估研究，E-mail:jiyunnie@163.com。