茶籽多糖的提純、理化特征和生物活性研究進展

王明樂，房婉萍，黎星輝

（南京農業大學茶葉科學研究所，江蘇 南京 210095）

在我國山茶科山茶屬植物（茶葉、山茶、油茶、茶梅）的種子習慣上統稱為“茶籽”[1-2]。茶籽中含有脂肪、蛋白質、多糖、皂素、咖啡堿、茶多酚、粗纖維和無機元素等多種有效成分，其中茶籽多糖（tea seed polysaccharides，TSPS）含量較高，達20%左右[3]。研究表明，植物多糖具有調節免疫系統、降血壓、降血脂、抗腫瘤、抗感染、治療艾滋病等多種生物活性[4-8]；多糖糖鏈在控制細胞分裂、分化，調節細胞生長和衰老等方面也起著決定性的作用[9]。

現今，茶多糖（tea polysaccharide，TPS）作為一種幾乎無毒副作用的天然提取物已經引起了相關研究者的重視；國內外對茶葉多糖（tea leaves polysaccharide，TLPS）的理化性質、分離純化方法和生理活性的研究報道較為全面，而對茶籽多糖研究的綜合性報道則少之又少[10-16]。本文對近年來茶籽多糖的研究進展進行回顧，旨在為進一步開發利用茶籽多糖提供參考。

1 茶籽多糖的提純

1.1 茶籽多糖的提取方法

多糖的提取方法有水提法[17-19]、酸堿提取法[20]、有機溶劑提取法[21]、超臨界CO2法[22]、酶法[23-24]、超聲波輔助提取法[25-26]和微波輔助提取法[27-28]。已有的研究[29]表明，多糖熱穩定差，高溫、過酸或偏堿的條件均會使其部分降解。因此，多糖的提取應避免在高溫和強酸強堿中進行，否則極易使多糖中的糖苷鍵斷裂而發生構象變化，甚至失去生物活性。

各提取法中，由于酸提法和堿提法對實驗條件要求較高，加之操作不便，因此這兩種方法并不經常使用。而采用乙醇沉淀，不但選擇性好、滲透性強、浸出率高，而且安全環保，現在茶籽多糖的提取中應用較多。田洪舟等[30]以茶籽餅粕為原料，研究了料液比、提取溫度和時間對提取的茶籽多糖的含量和純度的影響，經單因素試驗和正交試驗得出茶籽多糖的較佳提取條件為料液比1∶12（m/V）、乙醇體積分數55%、提取溫度55 ℃、提取時間3.0 h，其得率和純度分別達6.92%和78.74%。胡平平等[31]以油茶餅粕為原料，脫脂后提取茶皂素，并利用乙醇沉淀提取茶籽多糖，經正交試驗得出提取茶籽多糖的較佳工藝參數為：溫度70 ℃、料液比1∶30（m/V）、提取時間4 h，多糖在此條件下的提取率為5.88%。此方法采用先提取茶皂素后提取多糖的綜合提取工藝，排除了提取多糖的后續處理過程中茶皂素的干擾，在一定程度上簡化了提取工藝。

黃威等[32]以油茶籽浸出粕為原料，采用甲醇浸提法，在單因素試驗的基礎上，通過正交試驗發現：料液比為1∶10（m/V）、甲醇體積分數為85%、提取溫度65 ℃、浸提時間3 h為較佳的工藝參數；此條件下茶籽多糖的提取率達到3.84%，純度為89.7%。雖然使用甲醇提取所得茶籽多糖純度較高，但由于甲醇的毒性較強，一般不建議采用。

杜立春等[33]采用低沸點醇（無水乙醇或無水甲醇或甲醇和乙醇的混合物）為溶劑回流提取已脫脂油茶餅粕中的茶皂素和茶多糖，回收溶劑得浸膏，然后使用無水正丁醇提取浸膏中的茶籽多糖，最終分離得到純度大于95%的白色茶多糖，顯著高于一般茶多糖提取方法。該方法工藝簡單、環保，生產與設備成本低，易于大工業生產。

隨著我國科學技術的進步，越來越多的新裝備也開始應用到茶籽多糖的提取中。微波輔助提取具有高效性、高頻性、選擇性和波動性等特點，該法副產物少，產率高，提取時間短。微波的熱效應可以穿透到介質內部，迅速破壞細胞壁，使提取物快速分離出來[34]。張忠等[35]以茶籽為原料，采用微波輔助提取法發現：浸提功率400 W、固液比1∶30（m/V）、pH 5.0、浸提時間30 s為較合適的提取條件。王瑾等[36]也采用此方法，以冷榨油茶籽餅為原料，與水提取法進行比較，得出料液比1∶5（m/V）、微波功率600 W、提取時間9 min、pH 6.0為較佳的提取條件；然后采用6%的三氯乙酸法脫除蛋白質，30%的雙氧水脫色，最終經醇沉、濃縮干燥后得到淡黃色多糖晶體。經比較，該方法與傳統熱水浸提方法相比能極大的提高茶籽多糖的得率。

基于超聲波技術發展起來的超聲波輔助提取法是近年來經常采用的樣品前處理方法，空化效應是其主要動力，有助于加速待測物中有效成分進入溶劑，縮短體系達到平衡的時間[37]。張忠[38]、譚搏[39]等分別以茶籽和茶籽餅粕為原料，經超聲波輔助提取茶籽多糖時發現，在試驗條件范圍內，對茶籽多糖浸出率的影響順序為固液比＞溫度＞功率＞時間，固液比1∶40（m/V）、溫度60 ℃、浸提功率400 W、浸提時間5 min為較佳的工藝參數。

以超臨界CO2作為溶劑，無毒、無害，不會造成被萃取物的污染，解決了有機溶劑萃取方法中溶劑殘留等問題，工藝簡單，只需控制溫度、壓力等主要參數即可達到提取混合物中不同組分的目的；CO2價廉易得，萃取溶劑可以循環使用，生產成本較低[40-41]。李博等[42]以茶籽餅粕為原料，采用響應面法優化超臨界CO2提取茶籽多糖工藝，運用小星點設計考察萃取時間（30～150 min）、壓力（15～45 MPa）、溫度（40～80 ℃）及夾帶劑乙醇水溶液體積分數（50%～90%）四因素對茶籽多糖得率的影響，簡化模型后在各因素設定范圍內得到較佳提取條件：萃取時間150 min、壓力45 MPa、溫度60 ℃、夾帶劑乙醇體積分數65%。該條件下萃取后多糖實際得率為13.23%，較傳統的超臨界CO2萃取法有一定的優越性。有人認為，食品工業中使用超臨界流體萃取技術是最有前途的領域之一。

1.2 茶籽多糖純化

經過上述方法提取得到的茶籽粗多糖往往混雜著蛋白質、色素、低聚糖等雜質，必須經過進一步的分離純化才能得到純度較高的茶籽多糖。茶籽多糖的分離純化步驟，如圖1所示。

圖1 茶籽多糖的純化步驟Fig.1 Flowchart for the purification of TSPS

1.2.1 脫蛋白

常用的粗多糖脫蛋白方法有Sevag法、三氟三氯乙烷法和三氯醋酸法。其中，Sevag法是脫蛋白的經典方法，利用蛋白質在氯仿等有機溶劑中變性的特點將其除去。該方法在避免多糖降解上效果較好，但是效率不高，如能加入一些蛋白質水解酶，再用Sevag法效果更佳。三氟三氯乙烷與多糖混合后攪拌、離心得上清液，連續幾次即得無蛋白質的多糖溶液，此法效率高，但三氟三氯乙烷沸點較低，易揮發，不宜大量應用。三氯醋酸對蛋白質的脫除效果較好，但此法反應劇烈，會引起某些多糖的降解，得率降低。

傳統的植物多糖提取液脫蛋白方法逐漸呈現出劣勢，近年來陸續出現了一些新的脫蛋白的方法，如醋酸鉛法[43]、氯化鈉法[44]、蛋白酶法[45]、氯化鈣法[46]、氫氧化鈉法[47]、陰離子交換樹脂法[48]、鹽酸法[49]、徑向流動色譜法[50]和鞣酸法[51]，這為除去多糖中的蛋白質提供了更為廣闊的前景。然而，這些新方法也有一定的不足，因此人們更傾向于選擇多方法聯用以彌補各方法單獨使用時的不足。孫柘等[52]采用蛋白酶-三氯醋酸-正丁醇聯用法對粒毛盤菌YM281胞外多糖脫蛋白，并經均勻設計優化該方法的脫蛋白條件，得出較佳的工藝參數為粒毛盤菌YM281多糖溶液20 mL、木瓜蛋白酶溶液11 mL、溫度42.2 ℃、pH 4.0、酶解時間3.5 h；除去變性蛋白后再用三氯醋酸和正丁醇法脫蛋白2次即可；在該條件下，蛋白脫除率達72.3%，而多糖損失率僅為2.93%。趙鵬等[53]采用酶法結合Sevag法并與三氯乙酸法、Sevag法和酶法單獨使用的脫蛋白效果對比發現，前者最為理想，且較佳的工藝條件為：酶用量2.0%、酶解溫度75 ℃、酶解時間2 h、pH 7.0；結合3次Sevag法操作。此條件下，蛋白脫除率達83.72%，多糖保留率80.25%。該法可大大減少Sevag法的使用次數，蛋白脫除率高且條件溫和，應用前景廣闊。

1.2.2 色素的去除

色素按其溶解性的不同可分為：脂溶性色素、水溶性色素和其他色素。脂溶性色素的去除可以經石油醚或乙醚回流脫脂去除，在回流脫脂的過程中一些脂溶性色素也會被除去；水溶性色素在用熱水浸提多糖時溶解在水中，在用乙醇沉淀多糖時色素就留在上清液中[54]。以上兩種色素在多糖純化時較易去除，而和多糖結合的其他色素則較難去除，這也是現階段多糖回收效率低下的主要原因。

常用的脫色方法有柱層析法、活性炭法、過氧化氫法、聚酰胺法和Al2O3法等。由于植物材料、實驗條件等的差異，脫色方法不盡相同。對于植物來源的多糖，所含色素多是負性離子，用活性炭等脫色效果不如用Al2O3層析柱法；如果多糖的色素結合，可用H2O2脫色。過氧化氫法和活性炭法由于簡單易行而被廣泛使用。對于茶籽多糖而言，由于其色素含量較低，因此，是否進行脫色處理可視需要而定。

1.2.3 低聚糖等小分子雜質的去除

用透析法將多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1～3 d。可以用陰陽離子交換樹脂混合床，但只能除去離子，不能除去非極性小分子雜質。目前，使用連續透析儀是一種較為方便的實驗方法[55]。

此外，超濾技術是利用膜的篩分性質，以膜兩側的壓力差為推動力將高分子溶質與小分子溶質依據其相對分子質量的差別進行分離。因其操作條件溫和、分離環境密閉、生產效率高、實用性強而在果汁、發酵工程、釀造和茶飲料等食品工業生產中得到廣泛應用[56]。

1.2.4 應用實例

陶俊等[57]采用Sevag法對油茶籽多糖粗提物進行脫蛋白，然后采用適合于各種酸性、中性多糖和黏多糖的DEAE-纖維素層析來除去油茶籽多糖中的雜質，最后經SephadexG-100柱層析、透析、濃縮和冷凍干燥得油茶籽多糖精品。由于多糖類物質在強堿條件下會發生異構化和分解反應，因此只能選用弱堿性或極陰性的離子交換劑來吸附茶籽多糖。郭艷紅[58]在實驗中采用離子交換纖維素DEAE-52對茶籽多糖進行分離純化；然后又使用凝膠色譜進一步純化得到單一多糖。

王瑾[59]對比了Sevag法和三氯乙酸法脫蛋白效果并從蛋白殘留量和糖得率兩方面判定三氯乙酸法脫除效果較好。而Sevag法雖是經典的脫蛋白方法，但操作過程復雜且樣品損失較大，消耗能量較多。此外，該實驗還對比了活性炭脫色和過氧化氫脫色，雖然活性炭脫色簡便易行，是大部分多糖脫色的首選方法；但是實驗發現油茶籽多糖可能為糖蛋白，由于活性炭對多糖的物理吸附作用，會造成多糖的部分損失，導致脫色效果不理想，因而選擇過氧化氫法脫色。由于過氧化氫是一種氧化脫色劑，能將多糖提取液脫至無色，但色素物質還是會殘留在溶液中，而過量的過氧化氫需要充分的透析除去，否則會對后續的凝膠柱層析中的凝膠造成損害。

2 茶籽多糖的理化性質

研究發現，茶籽多糖是黏度適中、非淀粉、非酚類物質、不含還原糖和氨基酸的淡黃色粉狀晶體；茶籽多糖溶于熱水，不易溶解于冷水，不溶于高體積分數的乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇等有機溶劑；對雙縮脲試劑和茚三酮溶液均無顏色反應而遇蒽酮-硫酸試劑或其他糖的顯色劑（如苯酚-硫酸）都能發生相應的特征顏色反應；熱穩定性較差，高溫易降解[57,59]。

3 茶籽多糖的結構分析

多糖的結構可分為一級結構和高級結構。多糖的一級結構可簡要描述為單糖的連接方式，既包括單糖的組成又包括各單糖間的連接方式。多糖經分離純化并驗證后即可進行一級結構的分析。多糖的一級結構分析方法很多，主要分為三類：化學分析法、物理分析法和生物分析法。目前，化學法在研究中的應用比較成熟，如水解法（包括完全水解法和部分酸水解法）、過碘酸氧化和Smith降解、甲基化反應、順序降解法等；物理方法主要借助紙色譜、高效凝膠色譜、紅外光譜法、核磁共振波譜法、氣相色譜法、質譜法和毛細管電泳法等各種分析儀器來完成；生物法主要是利用特異性糖苷酶的酶法分析，利用酶的專一性強的特點用不同酶和放射性標記的方法來分析糖鏈結構和糖苷鍵的類型[60]。由于茶籽多糖是極其復雜的化合物，因此，在實際應用中通常是物理、化學多方法結合使用。近些年的研究雖已對茶籽多糖的一級結構有所認識，但其精確的內部構造還不是很清楚，這主要是因為其一級結構本身非常復雜，再加上糖殘基上可以連接硫酸基團、乙酯基團、磷酸基團和甲基化基團，這更加劇了多糖一級結構的復雜性[57]。

表1 茶籽多糖的結構特點Table 1 Structure features of TSPS

多糖的高級結構是指在一級結構的基礎上，各側鏈通過非共價鍵相互結合作用而形成的復雜結構。常用的多糖高級結構測定方法有：核磁共振、X射線衍射法、圓二色譜法、原子力顯微鏡法、電子顯微鏡、掃描隧道顯微鏡。

統觀近年茶籽多糖方面的研究，主要集中在提取、純化、一級結構分析和生物活性方面，而對其高級結構的研究較少。除了由于茶籽多糖本身結構的復雜性外，方法不完善也阻礙了對其高級結構的進一步探索。現已從茶籽中陸續分離得到多種多糖，其結構特點見表1。

4 茶籽多糖的生物活性

大量藥理和臨床實驗證明，從天然產物中分離出的多糖與免疫功能的調節、細胞與細胞的識別、細胞間物質的傳輸、癌癥的診斷與治療等都有密切關系[61-63]。對于茶籽多糖而言，經過實驗得到證實的功能則少之又少，且主要集中在促進生長和抗氧化兩方面，這也為其他功能的發掘提供了廣闊的空間。

4.1 促進生長的作用

王瑾[59]和袁鐘宇[64]等的實驗結果表明，茶籽多糖能夠促進肉雞生長，并推測其對肉雞生產性能的影響可能與多糖促進RNA、DNA和蛋白質的合成，清除自由基，激活免疫系統活性的特征有關。李學軍等[65]在生長豬日糧中添加茶籽多糖除也發現了類似的結果：豬的生長性能得到改善。

4.2 抗氧化性

張忠等[38]研究發現，提取方法對茶籽多糖的抗氧化性也有影響；超聲波輔助提取對茶籽多糖清除·OH的能力影響不顯著，而對茶籽多糖清除O2－·的能力有較好的增強作用，其原因是超聲波輔助提取茶籽多糖能夠縮短浸提時間，避免了茶籽多糖在水中長時間受熱，從而使得茶籽多糖清除O2－·的能力增強。李學軍等[65]的研究還發現，茶籽多糖能通過提高生長豬體內抗氧化酶的活力，抑制脂質過氧化反應從而增強生長豬機體的抗氧化能力。

胡平平[31]使用了4種不同的體外抗氧化體系（DPPH自由基體系、·體系、·OH體系和還原力測定）對油茶餅粕多糖的抗氧化活性進行了研究。結果發現油茶餅粕多糖具有較好的清除DPPH自由基、、·OH和一定的還原力，其IC50分別為9.449、0.989、3.5 mg/mL。然而，四體系中油茶餅粕多糖的抗氧化能力均低于等質量濃度的VC。此外，黃威[66]和Wang Yunfeng[10]等也證明了茶籽多糖具有一定的抗氧化活性。

4.3 其他功能

Wei Xinlin等[67]通過體外培養K562人類白血病細胞發現：與對照組相比，在0.5～400 μg/mL范圍內茶籽多糖能夠顯著抑制K562人類白血病細胞的生長，50 μg/mL時其抑制率最高，達（38.43±2.22）%；免疫活性研究表明：茶籽多糖能有效促進小鼠脾臟淋巴細胞的增殖。這表明茶籽多糖可作為天然的抗癌藥物。

5 結 語

目前，茶籽多糖的結構研究還處在研究其一級結構中單糖的組成階段。就多糖一級結構與其生物活性的關系而言，一方面多糖的組成和糖苷鍵類型對其生物活性有一定影響，另一方面是多糖中的一些官能團（如硫酸酯化多糖）對活性的影響。茶籽多糖的高級結構與其生物活性的關系至今尚不十分清楚，但同蛋白質和核酸一樣，立體構型是決定多糖生物活性的決定因素之一；同時，多糖的分子質量、取代基、溶解度、黏度甚至給藥劑量、途徑等也都影響其生物活性。茶籽原料、提取方法的不同，提取的茶籽多糖組成成分并不完全形同，其功能也會有所差異。

其次，研究者對于茶籽多糖生理活性上的研究很少，且主要集中在促進生長和抗氧化活性方面，而對其他生理活性探索較少；然而，茶籽多糖和茶葉多糖具有類似的結構特征，其潛在的生理活性價值有助于為茶籽資源的開發利用提供新的途徑。研究茶籽多糖的體內抗氧化實驗以及抗腫瘤、提高機體免疫力等方面的生物活性實驗，探討茶籽多糖的各種活性機理，研究其構效關系等需要我們進一步去完成。

最后，茶籽多糖作為一種功能性食品或飼料添加劑的開發尚處于起步階段，具有廣闊的市場前景，可大力發展其作為一類新型的保健食品、藥品原料和功能性食品添加劑。

[1]周素梅, 王強.我國茶籽資源的開發利用及前景分析[J].中國食物與營養, 2004(3): 15-18.

[2]劉仲華.茶葉籽高效綜合開發利用途徑[J].農業機械, 2012(3): 22-23.

[3]郭華.高檔茶籽油的提取及茶籽綜合利用技術研究[D].長沙: 湖南農業大學, 2007.

[4]TANG Xinhui, YAN Lifang, GAO Jing, et al.Antitumor and immunomodulatory activity of polysaccharides from the root ofLimonium sinenseKuntze[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2012, 51(5): 1134-1139.

[5]劉春蘭, 周宜君, 劉海青, 等.植物多糖的生物活性及其應用前景[J].中央民族大學學報: 自然科學版, 2004(2): 159-162.

[6]程新星, 孫黔云, 楊娟, 等.九種黔產植物多糖的體外免疫調節活性研究[J].貴州師范大學學報: 自然科學版, 2012(4): 5-8.

[7]歐陽健明, 彭花.植物多糖對細胞氧化損傷的保護和修復作用[J].暨南大學學報: 自然科學與醫學版, 2012(5): 516-523.

[8]張麗嬌, 蘇志剛, 佟巨慧, 等.植物多糖對多種腫瘤細胞抑制作用的研究進展[J].廣東農業科學, 2011(17): 117-120.

[9]吳謀成.功能性食品研究與應用[M].北京: 化學工業出版社, 2003:27-28.

[10]WANG Yuanfeng, MAO Fangfang, WEI Xinlin.Characterization and antioxidant activities of polysaccharides from leaves, fl owers and seeds of green tea[J].Carbohydrate Polymers, 2012, 88(1): 146-153.

[11]CHEN Haixia, ZHANG Min, QU Zhishuang, et al.Compositional analysis and preliminary toxicological evaluation of a tea polysaccharide conjugate[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2007, 55(6): 2256-2260.

[12]CHEN Haixia, WANG Zhaoshuai, LU Xueming, et al.Isolation and chemical characterisation of a polysaccharide from green tea(Camellia sinensisL.)[J].Journal of the Science of Food and Agriculture, 2008,88: 2523-2528.

[13]YANG Jianjun, CHEN Bin, GU Yan.Pharmacological evaluation of tea polysaccharides with antioxidant activity in gastric cancer mice[J].Carbohydrate Polymers, 2012, 90(2): 943-947.

[14]CHEN Haixia, WANG Zhaoshuai, QU Zhishuang, et al.Physicochemical characterization and antioxidant activity of a polysaccharide isolated from oolong tea[J].European Food Research and Technology, 2009, 229: 629-635.

[15]CHEN Haixia, QU Zhishuang, FU Lingling, et al.Physicochemical properties and antioxidant capacity of 3 polysaccharides from green tea, oolong tea, and black tea[J].Journal of Food Science, 2009, 74(6):469-474.

[16]NIE Shaoping, XIE Mingyong.A review on the isolation and structure of tea polysaccharides and their bioactivities[J].Food Hydrocolloids,2011, 25(2): 144-149.

[17]盧金珍, 孫金龍, 任俊, 等.綠茶茶多糖提取工藝優化研究[J].現代農業科技, 2012, 28(7): 335-336; 339.

[18]金婷, 譚勝兵.水法提取普洱茶茶多糖條件優化[J].安徽農業科學,2012(12): 7382-7384.

[19]趙麗平, 肖穎, 董翠.信陽綠茶中茶多糖提取工藝研究[J].江蘇農業科學, 2012(10): 245-246.

[20]陳小強, 周瑛, 葉陽, 等.堿溶性茶多糖的提取及其分析[J].應用化學, 2008(12): 1496-1498.

[21]謝愛澤, 鄒登峰, 章艷, 等.丙酮沉淀法提取金花茶多糖的研究[J].安徽農業科學, 2011(25): 15268-15269.

[22]陳明, 熊琳媛, 袁城.茶葉中多糖提取技術進展及超臨界萃取探討[J].安徽農業科學, 2011(8): 4770-4771.

[23]劉育玲, 姚開, 賈冬英, 等.茶多糖酶法提取的優化條件及其對葡萄糖激酶活性的影響[J].食品科技, 2010, 35(2): 134-137.

[24]李星科, 彭星星, 李素云, 等.酶法提取信陽紅茶多糖的工藝研究[J].食品工業科技, 2012, 33(20): 168-170; 175.

[25]許子競, 廖敏富, 陳海燕, 等.金花茶葉多糖超聲波輔助提取工藝優化和含量測定[J].食品科學, 2010, 31(4): 53-58.

[26]王曉琴, 余嵐嵐.超聲波技術提取烏龍茶多糖工藝及其降血糖活性研究[J].中國農學通報, 2010(20): 102-105.

[27]李鶴, 馬力, 張詩靜, 等.微波輔助萃取提取茶葉中茶多糖的工藝研究[J].生命科學儀器, 2010(4): 50-53.

[28]陳義勇, 竇祥龍, 黃友如, 等.響應面法優化超聲-微波協同輔助提取茶多糖工藝[J].食品科學, 2012, 33(4): 100-103.

[29]崔宏春, 余繼忠, 黃海濤, 等.茶多糖的提取及分離純化研究進展[J].茶葉, 2011, 37(2): 67-71.

[30]田洪舟, 裘愛泳, 史小華.茶籽多糖提取工藝的研究[J].中國油脂,2004, 29(6): 27-29; 44.

[31]胡平平, 李加興, 李忠海, 等.油茶餅粕茶皂素與多糖綜合提取工藝[J].食品科技, 2012, 37(2): 196-200; 204.

[32]黃威, 胡建華.油茶籽浸出粕提取茶籽多糖的工藝研究[J].中國食品工業, 2011, 32(2): 45-46.

[33]杜立春, 陳建民, 吳蓓莉.從茶油粑分離茶皂素與茶多糖的方法: 中國, CN101070334[P].2007-11-14.

[34]吳世容.黃酮類化合物的提取分離及定量構效關系研究[D].重慶:重慶大學, 2005.

[35]張忠, 李靜, 花旭斌, 等.微波輔助提取茶籽多糖工藝條件的研究[J].四川食品與發酵, 2007, 43(1): 23-25.

[36]王瑾, 周建平.油茶籽多糖微波輔助提取及純化[J].中國油脂, 2009,34(4): 50-53.

[37]谷勛剛.超聲波輔助提取新技術及其分析應用研究[D].合肥: 中國科學技術大學, 2007.

[38]張忠, 李靜, 李正濤, 等.超聲波輔助提取茶籽多糖工藝條件的研究[J].安徽農學通報, 2007, 13(10): 49-50; 99.

[39]譚搏.茶籽餅中茶皂素的提取純化與茶籽多糖的提取[D].長沙: 中南林業科技大學, 2009.

[40]項昭保, 霍丹群, 任紹光.一種提取中草藥化學成分的新方法: 超臨界流體萃取技術[J].自然雜志, 2002, 24(2): 103-106.

[41]孫愛友, 賈士儒, 楊揚.超臨界流體技術在生物工程中的應用[J].天津輕工業學院學報, 2001(4): 14-16; 27.

[42]李博, 屠幼英, 梅鑫, 等.響應面法優化超臨界CO2提取茶籽多糖的工藝研究[J].高校化學工程學報, 2010, 24(5): 897-902.

[43]高美風, 俞婷婷.黃芪多糖中脫蛋白方法的研究[J].中華中醫藥學刊, 2008(3): 614-615.

[44]黃純, 馬馳, 宋慧智, 等.亮菌多糖提取中脫蛋白和脫色方法比較[J].藥學與臨床研究, 2007, 15(1): 45-46.

[45]張斌, 張璐, 李沙沙, 等.甘蔗渣多糖脫蛋白方法研究[J].遼寧中醫藥大學學報, 2012, 14(10): 101-102.

[46]鞏麗虹, 李孟全, 徐紅納, 等.咳爾康口服液中多糖脫蛋白方法研究[J].安徽醫藥, 2010, 14(6): 635-636.

[47]蔡彬新, 吳成業, 劉淑集.海地瓜多糖提取條件的優化和脫蛋白的研究[J].食品工業科技, 2009, 30(10): 194-196; 199.

[48]張坤, 吳皓, 王令充, 等.四角蛤蜊多糖脫蛋白方法比較[J].食品科學, 2011, 32(8): 50-53.

[49]董英, 張艷芳, 孫艷輝.水飛薊粗多糖脫蛋白方法的比較[J].食品科學, 2007, 28(12): 82-84.

[50]姜慧燕, 孫培龍, 邵平.徑向流色譜脫除靈芝多糖中蛋白質和色素的工藝優化[J].食品與發酵工業, 2011, 37(3): 84-89.

[51]鄭曉翠, 蘇瑛, 唐詠, 等.淫羊藿多糖的提取及其蛋白的脫除[J].華西藥學雜志, 2009, 24(2): 155-157.

[52]孫柘, 邱濤, 袁如月, 等.粒毛盤菌多糖脫蛋白方法及其條件優化[J].浙江大學學報: 農業與生命科學版, 2012, 38(4): 519-523.

[53]趙鵬, 張麗華, 李小蓉, 等.二色補血草多糖脫蛋白工藝研究[J].醫藥導報, 2011, 30(10): 1328-1332.

[54]付學鵬, 楊曉杰.植物多糖脫色技術的研究[J].食品研究與開發,2007, 28(11): 166-169.

[55]許克勇.大蒜油逆流超臨界CO2萃取及大蒜多糖提取技術研究[D].楊凌: 西北農林科技大學, 2005.

[56]王熊, 郭宏, 劉宗林.膜分離技術在食品工業中的應用[J].食品科學,2000, 21(12): 178-180.

[57]陶俊, 文漢.油茶籽多糖分離純化和結構分析[J].食品工業科技,2011, 32(6): 132-135.

[58]郭艷紅.從茶籽中提取茶籽油、茶皂素和茶籽多糖研究[D].上海:上海師范大學, 2009.

[59]王瑾.水溶性油茶籽多糖的提取、分離純化及功能性研究[D].長沙: 湖南農業大學, 2009.

[60]TERMAN A, BRUNK U.The effect of Polbax extract on lipofuscin accumulation in cultured neonatal rat cardiac myocytes[J].Phytotherapy Research, 2002, 16(2): 180-182.

[61]HSIEH Y S Y, CHIEN C, LIAO S K S, et al.Structure and bioactivity of the polysaccharides in medicinal plantDendrobium huoshanense[J].Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2008, 16(11): 6054-6068.

[62]YANG Jianhong, DU Yumin.Chemical modification, characterization and bioactivity of Chinese lacquer polysaccharides from lac treeRhus verniciferaagainst leukopenia induced by cyclophosphamide[J].Carbohydrate Polymers, 2003, 52(4): 405-410.

[63]HOKPUTSA S, HARDING S E, INNGJERDINGEN K, et al.Bioactive polysaccharides from the stems of the Thai medicinal plantAcanthus ebracteatus: their chemical and physical features[J].Carbohydrate Research, 2004, 339(4): 753-762.

[64]袁鐘宇, 張石蕊, 賀喜, 等.茶籽多糖及茶皂素對肉雞生長性能和腸道微生物的影響[J].中國畜牧雜志, 2010, 46(7): 28-31.

[65]李學軍, 朱良.茶籽多糖對生長豬生長性能及抗氧化能力的影響[J].飼料廣角, 2010(14): 29-30.

[66]黃威.油茶籽脫殼冷榨浸出粕提取茶籽多糖的研究[D].武漢: 武漢工業學院, 2011.

[67]WEI Xinlin, MAO Fangfang, CAI Xuan, et al.Composition and bioactivity of polysaccharides from tea seeds obtained by water extraction[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2011,49(4): 587-590.