粵西地區某規模化豬場緊急接種豬繁殖與呼吸綜合征基因缺失苗的抗體監測

臺凡力，陳民傭，蔣福松，黃如渠，鄧東養

（廣東省湛江農墾畜牧有限公司，廣東 湛江 524022）

豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起豬的一種繁殖障礙和呼吸道炎癥的傳染病[1]。其臨床特征為厭食、發熱、母豬繁殖障礙，懷孕期發生大批流產，產死胎和木乃伊胎；仔豬與育成豬發生嚴重呼吸道疾患及高死亡率為特征的一種傳染病。

廣東湛江地區某規模化豬場，在2014年1月份的血清學常規檢測中，發現豬繁殖與呼吸綜合征抗體水平明顯波動，懷疑有野毒在場內活動，馬上采購一批豬繁殖與呼吸綜合征基因缺失苗做緊急接種。為了了解掌握該批疫苗緊急接種后的免疫效果，以及豬群豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的變化動態，筆者從緊急接種后的第3周開始，采集血清，對豬繁殖與呼吸綜合征抗體進行監測，采集血清樣本52份。為該豬場有效控制PRRS提供了科學依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清來源 廣東湛江地區某規模化豬場共采集52份血清。

1.1.2 試劑 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒（PRRS X3 Ab），美國IDEXX公司生產。

1.1.3 儀器設備 MK3酶標儀，MK2自動洗板儀，MILLI-Q-A超純水機，單道微量移液器，多道微量移液器，渦旋混合儀。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 采取隨機抽樣的方法，每一次采血不低于5份。緊急接種前采集樣本20份，緊急接種后21 d采集有效血清6份，28 d采集有效血清7份，35 d采集有效血清6份，42 d采集有效血清樣本13份。血樣采集后及時進行常規血清分離，冷凍備檢。

1.2.2 抗體測定 取10 μL血清，利用豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒進行抗體檢測。操作程序按照試劑盒說明書進行操作，在630 nm處測定樣本以及對照的吸光度值（OD630）。只有陰性對照的平均OD630小于等于0.150，陽性對照的平均值減去陰性對照的平均值大于或等于0.150時，該檢測結果才能有效。如果被檢樣品阻斷率大于或等于40%,該樣本被判為陽性(有PRRSV抗體存在)；如果被檢測樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣本就被判為抗體陰性（無抗PRRSV抗體存在）；如果被檢測樣品的阻斷率在30%～40%之間，就應在數日后再對該動物進行重測。如果重測結果仍舊可疑，就使用血清中和試驗的方法再次進行確認。

1.2.3 離散度分析 離散度（CV）采用變異系數表示。如果被檢測豬場PRRSV抗體的離散度小于或等于40%，我們認為該豬場PRRS抗體比較整齊，免疫效果比較確實。反之，如果該場的離散度大于40%，我們認為該豬場的豬PRRSV抗體水平參差不齊，免疫效果不理想。

2 結果

由表1可見，在緊急接種前該場的豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的阻斷率均值為1.938 5。緊急接種基因缺失苗后21 d、28 d、35 d和42 d的抗體阻斷率平均值分別為2.305 6、2.050 2、1.641 7和1.301 0。在緊急接種前該場的豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的離散度為99.83%。緊急接種基因缺失苗后21 d、28 d、35 d和42 d的抗體離散度分別為66.20%、57.00%、78.90%和86.59%。

3 分析與討論

3.1 結果分析

由表1可見，該規模化豬場在2014年1月份監測的血清樣本中，雖然總體抗體阻斷率平均值1.938 5還算理想，但是出現很多極端值。有4份血清的阻斷率大于3，其中編號為7號的血清高達5.6，編號為16號的血清高達7.6。在實際生產中，現有的診斷試劑盒還不能區分野毒和疫苗毒所產生的抗體，但我們一般認為現有的疫苗干預所能產生的抗體阻斷率一般都小于3.0。因此當樣品的阻斷率超過3.0時，我們都判為野毒感染。因此我們懷疑該場目前有PRRS野毒感染。同時有4份血清的抗體阻斷率小于0.3，就是說這4份血清沒有PRRS抗體。這和阻斷率高達7.6的血清相比，形成強烈的反差，進一步驗證該場遭受了PRRS野毒感染。緊急接種21 d后，抗體阻斷率平均值上升，平均值為2.305 6，接種后28 d，抗體阻斷率平均值開始下降,平均值為2.050 2，隨后的3周，勻速下降，到第42天的時候，抗體阻斷率下降到1.301 0。這說明在緊急接種PRRS基因缺失苗后，該疫苗起到了有效的干預作用，使得PRRS抗體產生了明顯變化。這也說明該豬場這次緊急接種PRRS基因缺失苗起到了緊急接種的作用，達到了預期效果

表1 豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監測結果

該規模化豬場在2014年1月份對PRRS進行抗體監測時，PRRS抗體離散度為99.83%，高于40%，說明這一時期該豬場的PRRSV抗體水平參差不齊，免疫效果不理想。緊急接種PRRS基因缺失苗后，到28 d的時候下降到57.00%。這說明在緊急接種PRRS基因缺失苗后，該疫苗起到了有效的干預作用。在緊急接種35 d后，抗體離散度又開始上升，到42 d的時候，離散度又重新上升到86.59%，這反映這次緊急接種，隨著時間的推移，對豬PRRS野毒感染的干預作用在減小。因此建議，就針對PRRS,針對這個型號的PRRS基因缺失苗，最好在緊急接種42 d后，重新接種一次，以確保緊急接種的效果。

綜上所述，結合PRRS阻斷率平均值的變化和抗體離散度的變化，我們認為該場緊急接種的PRRS基因缺失苗，有效地干預了該場PRRS抗體的變化。可以判斷該豬場這次緊急接種PRRS基因缺失苗起到了緊急接種的作用，達到了預期效果。

3.2 討論

3.2.1 抗體變化和臨床表現 筆者通過和該場獸醫人員的溝通了解到，該場在緊急接種PRRS基因缺失苗前，產房仔豬開始腹瀉，久治不愈。但并沒有出現典型的PRRS臨床癥狀，即：豬群出現厭食、發熱、母豬繁殖障礙，懷孕期發生大批流產，產死胎和木乃伊胎；仔豬與育成豬發生嚴重呼吸道疾患及高死亡率。緊急接種1個月后，產房仔豬拉稀現象逐步消失，生產恢復正常。這和筆者監測到的抗體變化成正相關，在緊急接種前，該場的豬群PRRS的阻斷率出現很大的波動，出現一些極高和極低的阻斷率，并且離散度高達99.83%。雖然臨床沒有出現典型的PRRS臨床癥狀，但是由于PRRSV對免疫系統有一定的破壞力，致使臨床仔豬拉稀，變得很難治愈。豬群PRRS抗體阻斷率在緊急接種21 d后上升到2.305 6，抗體離散度下降到66.20%，說明已經有效干預PRRS野毒感染。所以在緊急接種后1個月左右，產房仔豬拉稀問題，得到了有效的控制，生產逐步穩定。雖然在42 d后，抗體離散度重新回升，但是抗體阻斷率還是一直處于下降狀態，所以生產非常穩定。這似乎說明，該場雖然遭受了PRRS野毒感染，但是由于接種及時，接種的疫苗效果確實，該場并沒有暴發PRRS。

3.2.2 抗體依賴性增強作用 PRRS感染有一個很重要的特點是抗體依賴性增強作用，即無論在體內或者體外的試驗條件下，PRRSV抗體的存在可介導和加強感染，而不是保護。該規模化豬場在2014年1月份抗體監測的時候，雖然抗體水平總體不錯，但是臨床還是出現仔豬腹瀉的問題，緊急接種PRRS基因缺失苗后，PRRS抗體阻斷率整體雖然下降，但是臨床的生產卻非常穩定。PRRS感染的這一特點，剛好解釋了這一現象。因此單單通過血清抗體水平來評估PRRS病毒疫苗的免疫效果不科學，但可以通過監測PRRS病毒 N蛋白抗體水平的變化狀態來監測群體中PRRSV的活躍程度。

3.2.3 監測方法 目前臨床上監測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的多采用間接酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的方法。國內外很多生物制品廠家都生產檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的試劑盒，質量參差不齊。錢歡，唐利對市場一些常見的試劑盒做了對比試驗，發現美國IDXX公司生產的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒重復性和一致性比較高，適用于發病診斷和疫病預警[2]。馬超峰，孫何云等也對市場一些常見的試劑盒做了對比試驗，最后的實驗結果是美國IDXX公司生產的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒具有較高的敏感性和特異性，可以作為PRRS檢測的首選試劑[3]。IDEXX豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒，是用重組的PRRSV抗原包被的微量反應板，利用ELISA原理來檢驗豬血清或血漿中的PRRSV抗體。該試劑盒具有較高的重現性、敏感性和特異性，檢測結果可靠。所以筆者認為對廣東湛江地區該規模化豬場的檢測結果比較可靠。

3.2.4 疫苗選擇 目前市場上PRRS疫苗的生產廠家比較多，生產規格也很多。PRRS疫苗免疫后能不能真正地，有效地干預到豬體對PRRS病毒的免疫，筆者通過過去幾年對湛江地區PRRS免疫抗體的檢測發現，不同規格、不同廠家的疫苗所產生的免疫效果相差甚遠。因此筆者建議，大家一定要慎重選擇疫苗。同時筆者還發現，目前湛江地區的規模化豬場在設計PRRS免疫程序的時候，大多都是根據經驗，或者專家教授的推薦來設計的，有的很多年都沒有變過。目前疫苗的生產工藝不斷在改進，疫苗免疫效果不斷在進步，因而我們的免疫程序一定也要做出相應的調整。所以筆者建議，有條件的豬場最好借助實驗室檢測手段，根據抗體的消長規律，來選擇適合自己豬場的PRRS疫苗，來完善適合自己豬場的免疫程序。

[1] 宣長和,馬春全,陳志寶，等.豬病學[M]. 第3版.北京:中國農業大學出版社，2010：146-172.

[2] 錢歡，唐利.3種檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的ELISA試劑盒 的比較[J].豬業科學， 2012， 29（10）：42-44.

[3] 馬超鋒，孫何云，張軼，等.幾種檢測豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體ELSA診斷試劑盒的對比試驗 [J].豬業科學，2013，30（9）：82-83.