HPLC法測(cè)定舒心糖漿中阿魏酸的含量

張美娟

摘 要：目的：采用高效液相色譜法測(cè)定舒心糖漿中阿魏酸的含量。方法：采用美國Waters公司C18 色譜柱（3.9mm×150mm，5μm）；甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為321nm。結(jié)果：阿魏酸在40～320μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.3%。結(jié)論：所建立的方法分離效果好，靈敏、準(zhǔn)確、簡便，適宜舒心糖漿中阿魏酸的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：舒心糖漿；阿魏酸；高效液相色譜法

舒心糖漿方劑出自《傷寒論》，由黨參、黃芪、紅花、當(dāng)歸、川芎、三棱、蒲黃組成。舒心糖漿具有補(bǔ)益心氣、活血化瘀、改善心功能的功效。舒心糖漿常用于冠心病、心絞痛、胸痛胸悶、氣短、乏力等。當(dāng)歸別名為干歸、馬尾當(dāng)歸、秦哪、馬尾歸、當(dāng)歸身、涵歸尾、土當(dāng)歸等。當(dāng)歸具有補(bǔ)血、活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效。當(dāng)歸常用于癥瘕結(jié)聚、崩漏、虛寒腹痛、肌膚麻木、腸燥便難等癥。川芎具有活血行氣，祛風(fēng)止痛的功效，常用于月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后瘀滯腥痛、胸脅疼痛、頭痛眩暈、跌打損傷等。阿魏酸為川芎和當(dāng)歸的主要成分。阿魏酸化學(xué)名稱為4-羥基-3-甲氧基肉桂酸，異名咖啡酸-3-甲基醚，3-O-甲基咖啡酸。阿魏酸主要檢測(cè)法有薄層洗脫比色法、薄層顯色掃描法、直接掃描法及高效液相法[1-8]。本文用高效液相法對(duì)舒心糖漿中的阿魏酸進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試劑

SCQ-1000B數(shù)控加熱超聲波清洗機(jī)（上海聲彥超聲儀器有限公司）； WP-UP-Ⅲ-20精密型實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司 ）；CC-100分析型色譜柱溫箱（成都納杰科技有限公司）； LC-810液相色譜儀；（北京北分興宇儀器有限公司）；320 XT 電子分析天平（ 上海精科天美貿(mào)易有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下：色譜柱為美國Waters公司C18色譜柱（3.9mm×150mm，5μm）；甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為321nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 提取方法確定

將藥液通過大孔樹脂，分別采用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脫，結(jié)果表明采用70%乙醇洗脫效果最好，所以選擇70%乙醇洗脫。

2.3 供試品溶液的制備

將藥液通過大孔樹脂，采用10倍柱體積70%乙醇洗脫，減壓回收乙醇，殘?jiān)眉状既芙獠⑾♂屩?5毫升，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對(duì)照品約1mg，置50mL容量瓶中，用流動(dòng)相超聲波振蕩溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含阿魏酸20μg）。

2.5 陰性干擾試驗(yàn)

取蒲黃以布袋包好，同黨參、黃芪、三梭加水煎煮二次，第一次 2小時(shí)，第二次煎煮 1.5小時(shí)后，再加入紅花煎煮30分鐘，合并濾液，濾過，濾液濃縮至適量，加入蔗糖650g和防腐劑適量，煮沸使溶解，濾過，加水至1000ml，攪勻，即得陰性制劑。將陰性制劑通過大孔樹脂采用10倍柱體積70%乙醇洗脫，減壓回收乙醇，殘?jiān)眉状既芙獠⑾♂屩?5毫升，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，按色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明：在選定條件下測(cè)得的陰性液吸收曲線在與阿魏酸相同保留時(shí)間處不存在吸收峰，說明此方法具有較強(qiáng)的專屬性。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為40、80、160、200、240、280、320μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，阿魏酸對(duì)照品在40～320μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.81%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別取同批次舒心糖漿樣品6份，分別制備成供試品溶液，按色譜條件測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值。結(jié)果RSD值為0.52%，表明此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)性測(cè)定，阿魏酸峰面積積分值的RSD為0.66%。結(jié)果表明供試品溶液中阿魏酸至少在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分別精密添加一定量的阿魏酸對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.3%，RSD為0.62%。

2.11 耐用性試驗(yàn)

用依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u ）、奧泰公司C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）測(cè)定同一樣品，峰形及柱效均良好。表明不同的色譜柱測(cè)定時(shí)，色譜行為無顯著性差異。

2.12 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定舒心糖漿三批樣品中阿魏酸的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為25μg·mL-1、23μg·mL-1、26μg·mL-1。

3 結(jié)束語

分別考察0.02 mol/L醋酸銨-0.1%酸酸水溶液-乙腈（20∶60：20），甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70），甲醇-水-三乙胺（75：25：0.1）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動(dòng)相。本方法是一種簡便、準(zhǔn)確、安全的測(cè)定舒心糖漿含量的方法。舒心糖漿中阿魏酸的含量不少于20 μg·mL-1。

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