寧夏枸杞菜中總黃酮和蘆丁含量的動態變化研究

張玉璽，馬紅軍，何 薇

（1. 銀川能源學院 石油化工系， 寧夏 銀川 750105； 2. 銀川能源學院 生物工程系， 寧夏 銀川 750105; 3. 寧夏食品檢測中心, 寧夏 銀川 750004）

寧夏枸杞菜中總黃酮和蘆丁含量的動態變化研究

張玉璽1，馬紅軍2，何 薇3

（1. 銀川能源學院 石油化工系， 寧夏 銀川 750105； 2. 銀川能源學院 生物工程系， 寧夏 銀川 750105; 3. 寧夏食品檢測中心, 寧夏 銀川 750004）

考察不同生長期枸杞菜中總黃酮和蘆丁的含量，以確定枸杞菜的最佳采收期。采用紫外分光光度法測定總黃酮的含量，高效液相色譜法測定蘆丁的含量。不同月份總黃酮和蘆丁的含量具有顯著的差異, 5月和10月總黃酮和蘆丁含量均較高。枸杞菜最佳采收期為春季5月下旬或秋季10月下旬。

枸杞菜；總黃酮；蘆丁；動態變化

枸杞作為寧夏的特產，以其品質優良、富含多種藥性成分和營養成分而名冠全國[1]。枸杞菜即枸杞的嫩梢、嫩葉，有報道表明[2]，其黃酮含量較高；黃酮類成分具有明顯的抗氧化和抗自由基過氧化的作用[3-5]。因此研究及控制枸杞葉中的黃酮類化合物對枸杞葉的基礎研究和開發應用具有非常重要的意義。本文對不同采收期（5-10月）枸杞菜中總黃酮和蘆丁含量進行測定，并確定了枸杞菜的最佳采收期, 為枸杞菜的最佳采收期提供了理論依據。

1 儀器與試劑

Agilent 1100 高效液相色譜儀， TU-1901紫外分光光度計；AE-240型電子分析天平。蘆丁對照品購買與中國食品藥檢定研究院；甲醇和磷酸為色譜純；乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉為分析純；水為超純水；枸杞菜（寧杞菜Ⅰ號；采摘后在陰涼處陰干）由寧夏農林科學院枸杞研究中心提供。

2 測定方法

2.1 總黃酮的測定[6]

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品適量，加 70% 的乙醇制成約0.2 mg/mL的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備

精密稱取枸杞葉細粉約0.5 g，置碘稱瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，稱定重量，回流提取1 h，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液即得。

2.1.3 標準曲線的制備

精密吸取對照品溶液 (0.211 mg/mL) 0.1、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL置于10 mL量瓶中，分別加水使成2.0 mL，各加5% NaNO2溶液0.4 mL，搖勻，放置6 min，加10%A13NO3溶液0.4 mL，搖勻，放置6 min，加4% NaOH溶液1 mL，加水至刻度，搖勻，放置15 min，同法制備空白，測定波長509 nm，計算 ，得回歸方程 Y=0.0112X-0.0221，r= 0.9989，蘆丁在0.0211～0.4220 mg/mL 范圍內呈良好的線性關系。

2.1.4 波長的選擇

分別取對照品溶液和供試品溶液適量依法顯色，于200～600 nm波長范圍掃描，結果顯示均在509 nm波長處有最大吸收，因此選擇測定波長為509 nm。

2.1.5 樣品的測定

精密量取供試品溶液1.0 mL依法顯色后測定吸收度，按回歸方程求得總黃酮含量。

2.2 蘆丁的測定[7]

2.2.1 色譜條件

色譜柱為C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇(A)－0.5%的磷酸溶液(B)梯度洗脫，0～5 min，A:30→40；5～10 min，A:40→50；10～20 min，A:50→60；檢測波長為358 nm；流速為1.0 mL·min－1；進樣量為10 μL。

2.2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備

同上述“總黃酮測定”項下的方法。

3 結 果

利用本文建立的方法對寧夏不同采收期（5-10月）枸杞菜中總黃酮和蘆丁含量進行累積動態分析，結果見表1，顯示枸杞菜最佳采收期為春季5月下旬或秋季10月下旬。

表1 不同采收期總黃酮和蘆丁含量的累計動態( n = 3)Table 1 Total flavonoids and rutin contents in wolfberry at different harvesting time ( n = 3)

4 討 論

4.1 提取方法的考察

精密稱取枸杞葉粗粉1.0 g，共18份，分別采用超聲提取、回流提取、煮沸提取三種提取方式，以70%的乙醇為提取溶劑，提取時間均為60 min，提取后，分別測定提取液中總黃酮和蘆丁的含量。結果以回流提取的方式，提取液中總黃酮和蘆丁的含量最高。

4.2 提取條件的優選：

枸杞葉中黃酮類物質的提取會受到提取溶濟，提取時間，提取次數等因素的影響，已確定提取方式為回流提取，我們選擇了提取溶劑（60%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、熱水），提取時間（45、60、90、120 min），提取次數（1、2、3次）3個因素進行了比較，結果表明：1.0 g枸杞葉樣品，加入70%乙醇100 mL，加熱回流提取60 min，提取液中總黃酮和蘆丁的含量最高。

4.3 空白試劑的確定

由于枸杞葉不同濃度乙醇的提取液葉綠素比較深，為了考察葉綠素在總黃酮的顯色條件下是否顯色或對顯色有影響，考察了通過索氏提取器用石油醚脫色，結果通過石油醚脫色后的枸杞葉（石油醚提取后，用70%的乙醇提取時，顏色還為較深的綠色）和未脫色的枸杞葉的總黃酮的含量一致（5.90%），說明樣品提取時不用脫色處理；石油醚的提取物（顯黃綠色）用70%的乙醇溶解過濾后，用測定總黃酮的方法顯色處理后淡黃色消失變為無色，說明石油醚的提取物對總黃酮的測定沒有影響；提取液的綠色在加入5%的亞硝酸鈉和10%的硝酸鋁后顏色變為了黃色，當加入4%的氫氧化鈉后顏色變為了水紅色。由上面的結論可確定用試劑空白，而不用自身空白。

［1］賀曉慧，賈孟輝，俞維，等.寧夏枸杞葉基礎研究述要及應用開發的前景[J].時珍國醫國藥，2007，18（5）:1111-1112.

［2］李國莉，黃元慶.寧夏枸杞不同組分黃酮含量分析[J]. 寧夏醫學院學報，1995，17（2）：114－115.

［3］肖崇厚. 中藥化學[M]. 上海：上海科學技術出版社，1996: 265．

［4］張穎，張立睦，周紅英，等．不同產地枸杞子中黃酮含量的測定[J]中國中醫藥科技，2004，11(2)：102-103．

［5］黃元慶，譚安民，沈 泳，等.枸杞黃酮類化合物清除氧自由基及對小鼠 L1210癌細胞能量代謝的抑制作用[J]. 衛生研究，1998，27（2）：109-111.

［6］李銘芳，李淑芳，汪小強，阮紅強. 枸杞中總黃酮的分析方法及提取工藝研究[J] 天津農業科學, 2011，17(1)：46-50.

［7］張蘆燕,賀凱,馬玲,安巍,王英華. HPLC法測定枸杞葉中蘆丁的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（5）：858-860.

Study on Dynamic Changes of Total Flavonoids and Rutin Contents in Ningxia Wolfberry Dish

ZHANG Yu-xi1, MA Hong-jun2, HE Wei3
(1. Institute of Petrochemical Technology, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 2. Department of Bioengineering, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 3. Yinchuan Food Testing Center, Ningxia Yinchuan 750004, China)

Total flavonoids and rutin contents in wolfberry at different growth stages were detected in order to determine the optimum harvest of the wolfberry. UV spectrophotometry was used to determine total flavonoids content, rutin content was determined by HPLC. The results show that flavonoids and rutin contents in wolfberry at different growth stages have significant difference, flavonoids and rutin contents in wolfberry in May and October are high. So the best harvest of wolfberry should be in late May and in late October.

Wolfberry; Total flavonoids; Rutin; Dynamic changes

O 657

A

1671-0460（2014）12-2509-02

2014-09-17

張玉璽（1977-），女，寧夏銀川人，講師，2002年畢業于寧夏大學化學工程與工藝專業，研究方向：化學工程與工藝。E-mail：zyx771120@163.com。