復方一枝蒿片體內外抗菌作用研究

蘇愷琪等

【摘要】 目的：研究復方一枝蒿片的體內外抗菌作用。方法：采用體內和體外抗菌實臉，研究復方一枝蒿片的抗菌作用。結果：復方一枝蒿片在體外能夠明顯地抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌，同時對乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用，對大腸桿菌（Escherichia coli）無抑制和殺滅作用；在體內能夠顯著降低變形桿菌感染小鼠的死亡率，但對大腸桿菌感染小鼠的死亡率沒有顯著作用。結論： 復方一枝蒿片在體內、外均具有良好的抗菌作用。

【關鍵詞】 復方一枝蒿片； 抗菌作用； 體內、外實驗

復方一枝蒿片為江蘇黃河藥業股份有限公司研制、生產的新型中草藥成品，其主要成分為一枝蒿、板藍根和大青葉，按照維醫理論，其具有清除“乃孜來”，解毒利咽，用于“乃孜來”所致的感冒、發燒、咽喉腫痛的功效；在中醫學中其具有解表祛風、涼血解毒的療效。常用于邪毒所致的感冒發燒、咽喉腫痛、病毒性感冒見上述證候者。相對于復方一枝蒿顆粒，該產品能夠克服顆粒劑用輔料用量大、服用需用開水沖服、口味不佳等缺點。為了進一步開發復方一枝蒿片，筆者對其在抗菌方面的藥效作用進行了研究，以期為復方一枝蒿片的臨床應用進一步提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 紫外分光光度計（UV-2201）：日本島津公司；臺式高速冷凍離心機（5417R）：艾本德中國有限公司（Eppendorf China Limited）；電子分析天平（AG-204）：瑞士Mettler Toledo公司；電熱恒溫培養箱（DNP-9082）：上海精宏實驗設備有限公司；潔凈工作臺（SW-CJ）：上海屹明凈化設備有限公司。

1.1.2 試藥 地塞米松（湖北潛江制藥股份有限公司）；MH肉湯培養基和MH瓊脂培養基（上海微晶生物技術有限公司）；雙黃連口服液（河南福森藥業有限公司）；復方一枝蒿片（江蘇黃河藥業股份有限公司，實驗前用滅菌蒸餾水溶解配成所需濃度）；MH血清肉湯培養基和MH血瓊脂平板培養基（分別為肉湯加滅活小牛血清，瓊脂培養基加脫纖維羊血）由本室制備。

1.1.3 動物及菌種 Balb/c小鼠300只，雌雄兼半，6～7周齡，購自上海斯萊克動物公司；金黃色葡萄球菌ATCC 25923；大腸桿菌 ATCC 58922由江蘇省藥品檢驗所提供；肺炎鏈球菌 ATCC 49619；乙型溶血性鏈球菌ATCC 6305。

1.2 方法

1.2.1 體外抗菌實驗 采用試管法測最低抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）研究復方一枝蒿片的體外抗菌研究[1-3]。

1.2.1.1 試驗菌準備 取復蘇的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大腸桿菌（Escherichia coli）MH肉湯24 h培養物分別接種至MH肉湯，37 ℃ 孵育6 h；取復蘇的肺炎鏈球菌（Pseudomonas aureginosa）和乙型溶血性鏈球菌（Streptococcus hemolytic-β）MH血清肉湯 24 h培養物分別接種至MH血清肉湯，37 ℃，6 h；分別取上述4種菌6 h培養液，用麥氏比濁法調至109/mL，再作100倍稀釋至107/mL，將107/mL定為工作濃度。通過傾注平板作菌落計數，最終確定每1 mL液體培養基中加入0.1 mL菌液。

1.2.1.2 復方一枝蒿水溶液制備 取復方一枝蒿片5 g加15 mL滅菌蒸餾水中，通過超聲處理，使復方一枝蒿片充分溶解，用1 % NaOH調至pH 7.0，用0.5 μm濾器濾過除菌，呈棕黃色透明液體。

1.2.1.3 抗菌實驗 復方一枝蒿水溶液1 mL，金黃色葡萄球菌和大腸桿菌用MH肉湯，乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌用MH血清肉湯分別作倍比稀釋至第10管，第11管為菌液對照，第12管為MH肉湯無菌對照。1～10管藥液稀釋度分別為1：2，1：4～1：1024，共4排。每排1～11管分別加入4種試驗菌液0.1 mL，第12管不加菌液，為MH肉湯無菌對照，37 ℃，24 h，觀察結果。

2 結果

MH肉湯結果顯示金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌感染的肉湯都有一定程度的變澄清，復方一枝蒿片對、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用，見表1。MH平板結果見表2。

3 討論

上述研究顯示，復方一枝蒿片劑能夠明顯抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌，對乙型溶血性鏈球菌有一定的抑制和殺滅作用，而對大腸桿菌無作用。同為上呼吸道感染常見病原菌的金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌都可以被復方一枝蒿片所抑制和殺滅，這可以解釋臨床上常用復方一枝蒿片治療咽炎、喉炎和氣管炎等上呼吸道感染的原因。上述三種病原菌均為革蘭陽性球菌，而大腸桿菌屬于革蘭陰性菌，而革蘭陽性球菌和革蘭陰性菌具有不同的細胞壁結構[6]，復方一枝蒿片對前述各菌抑制和殺滅作用的確切作用機制是否與其阻止細胞壁合成有關[7]，還有待于進一步研究。復方一枝蒿片對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護作用不顯著，但是高劑量的復方一枝蒿片能使變形桿菌感染小鼠的死亡率顯著下降，表明復方一枝蒿片對感染的小鼠具有明顯的保護作用。綜上所述，一枝蒿片具有良好的抗菌作用，但其作用機制未知，有待于進一步研究。

參考文獻

[1] 劉錫光.現代診斷微生物學[M]. 北京：人民衛生出版社， 2002：688-703.

[2] 張炳華，王亞男，張彥瓊.復方一枝蒿顆粒劑的體外抗菌作用[J].中國現代醫學雜志， 2005， 15（13）： 1968-1969.

[3] 黃慶，方蕓.復方荔枝草顆粒體內外抗菌消炎作用研究[J].中國藥房， 2008， 19（9）： 657-658.

[4] 徐叔云，卞如滾，陳修. 藥理實驗方法學[M]. 第3 版. 北京： 人民衛生出版社，2003 ：1657-1666.

[5] 常翠，董淳，楊宏圖，等.清喉口含片動物體內、外抑菌實驗研究[J].中國藥房，2006，17（5）：336.

[6] 沈關心.微生物學與免疫學[M].第5版. 北京：人民衛生出版社， 2003：127.

[7] 周正任， 李凡.醫學微生物學[M].第6版.北京：人民衛生出版社， 2003： 7- 9.

（收稿日期：2013-08-29） （本文編輯：陳丹云）

【摘要】 目的：研究復方一枝蒿片的體內外抗菌作用。方法：采用體內和體外抗菌實臉，研究復方一枝蒿片的抗菌作用。結果：復方一枝蒿片在體外能夠明顯地抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌，同時對乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用，對大腸桿菌（Escherichia coli）無抑制和殺滅作用；在體內能夠顯著降低變形桿菌感染小鼠的死亡率，但對大腸桿菌感染小鼠的死亡率沒有顯著作用。結論： 復方一枝蒿片在體內、外均具有良好的抗菌作用。

【關鍵詞】 復方一枝蒿片； 抗菌作用； 體內、外實驗

復方一枝蒿片為江蘇黃河藥業股份有限公司研制、生產的新型中草藥成品，其主要成分為一枝蒿、板藍根和大青葉，按照維醫理論，其具有清除“乃孜來”，解毒利咽，用于“乃孜來”所致的感冒、發燒、咽喉腫痛的功效；在中醫學中其具有解表祛風、涼血解毒的療效。常用于邪毒所致的感冒發燒、咽喉腫痛、病毒性感冒見上述證候者。相對于復方一枝蒿顆粒，該產品能夠克服顆粒劑用輔料用量大、服用需用開水沖服、口味不佳等缺點。為了進一步開發復方一枝蒿片，筆者對其在抗菌方面的藥效作用進行了研究，以期為復方一枝蒿片的臨床應用進一步提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 紫外分光光度計（UV-2201）：日本島津公司；臺式高速冷凍離心機（5417R）：艾本德中國有限公司（Eppendorf China Limited）；電子分析天平（AG-204）：瑞士Mettler Toledo公司；電熱恒溫培養箱（DNP-9082）：上海精宏實驗設備有限公司；潔凈工作臺（SW-CJ）：上海屹明凈化設備有限公司。

1.1.2 試藥 地塞米松（湖北潛江制藥股份有限公司）；MH肉湯培養基和MH瓊脂培養基（上海微晶生物技術有限公司）；雙黃連口服液（河南福森藥業有限公司）；復方一枝蒿片（江蘇黃河藥業股份有限公司，實驗前用滅菌蒸餾水溶解配成所需濃度）；MH血清肉湯培養基和MH血瓊脂平板培養基（分別為肉湯加滅活小牛血清，瓊脂培養基加脫纖維羊血）由本室制備。

1.1.3 動物及菌種 Balb/c小鼠300只，雌雄兼半，6～7周齡，購自上海斯萊克動物公司；金黃色葡萄球菌ATCC 25923；大腸桿菌 ATCC 58922由江蘇省藥品檢驗所提供；肺炎鏈球菌 ATCC 49619；乙型溶血性鏈球菌ATCC 6305。

1.2 方法

1.2.1 體外抗菌實驗 采用試管法測最低抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）研究復方一枝蒿片的體外抗菌研究[1-3]。

1.2.1.1 試驗菌準備 取復蘇的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大腸桿菌（Escherichia coli）MH肉湯24 h培養物分別接種至MH肉湯，37 ℃ 孵育6 h；取復蘇的肺炎鏈球菌（Pseudomonas aureginosa）和乙型溶血性鏈球菌（Streptococcus hemolytic-β）MH血清肉湯 24 h培養物分別接種至MH血清肉湯，37 ℃，6 h；分別取上述4種菌6 h培養液，用麥氏比濁法調至109/mL，再作100倍稀釋至107/mL，將107/mL定為工作濃度。通過傾注平板作菌落計數，最終確定每1 mL液體培養基中加入0.1 mL菌液。

1.2.1.2 復方一枝蒿水溶液制備 取復方一枝蒿片5 g加15 mL滅菌蒸餾水中，通過超聲處理，使復方一枝蒿片充分溶解，用1 % NaOH調至pH 7.0，用0.5 μm濾器濾過除菌，呈棕黃色透明液體。

1.2.1.3 抗菌實驗 復方一枝蒿水溶液1 mL，金黃色葡萄球菌和大腸桿菌用MH肉湯，乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌用MH血清肉湯分別作倍比稀釋至第10管，第11管為菌液對照，第12管為MH肉湯無菌對照。1～10管藥液稀釋度分別為1：2，1：4～1：1024，共4排。每排1～11管分別加入4種試驗菌液0.1 mL，第12管不加菌液，為MH肉湯無菌對照，37 ℃，24 h，觀察結果。

2 結果

MH肉湯結果顯示金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌感染的肉湯都有一定程度的變澄清，復方一枝蒿片對、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用，見表1。MH平板結果見表2。

3 討論

上述研究顯示，復方一枝蒿片劑能夠明顯抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌，對乙型溶血性鏈球菌有一定的抑制和殺滅作用，而對大腸桿菌無作用。同為上呼吸道感染常見病原菌的金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌都可以被復方一枝蒿片所抑制和殺滅，這可以解釋臨床上常用復方一枝蒿片治療咽炎、喉炎和氣管炎等上呼吸道感染的原因。上述三種病原菌均為革蘭陽性球菌，而大腸桿菌屬于革蘭陰性菌，而革蘭陽性球菌和革蘭陰性菌具有不同的細胞壁結構[6]，復方一枝蒿片對前述各菌抑制和殺滅作用的確切作用機制是否與其阻止細胞壁合成有關[7]，還有待于進一步研究。復方一枝蒿片對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護作用不顯著，但是高劑量的復方一枝蒿片能使變形桿菌感染小鼠的死亡率顯著下降，表明復方一枝蒿片對感染的小鼠具有明顯的保護作用。綜上所述，一枝蒿片具有良好的抗菌作用，但其作用機制未知，有待于進一步研究。

參考文獻

[1] 劉錫光.現代診斷微生物學[M]. 北京：人民衛生出版社， 2002：688-703.

[2] 張炳華，王亞男，張彥瓊.復方一枝蒿顆粒劑的體外抗菌作用[J].中國現代醫學雜志， 2005， 15（13）： 1968-1969.

[3] 黃慶，方蕓.復方荔枝草顆粒體內外抗菌消炎作用研究[J].中國藥房， 2008， 19（9）： 657-658.

[4] 徐叔云，卞如滾，陳修. 藥理實驗方法學[M]. 第3 版. 北京： 人民衛生出版社，2003 ：1657-1666.

[5] 常翠，董淳，楊宏圖，等.清喉口含片動物體內、外抑菌實驗研究[J].中國藥房，2006，17（5）：336.

[6] 沈關心.微生物學與免疫學[M].第5版. 北京：人民衛生出版社， 2003：127.

[7] 周正任， 李凡.醫學微生物學[M].第6版.北京：人民衛生出版社， 2003： 7- 9.

（收稿日期：2013-08-29） （本文編輯：陳丹云）

【摘要】 目的：研究復方一枝蒿片的體內外抗菌作用。方法：采用體內和體外抗菌實臉，研究復方一枝蒿片的抗菌作用。結果：復方一枝蒿片在體外能夠明顯地抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌，同時對乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用，對大腸桿菌（Escherichia coli）無抑制和殺滅作用；在體內能夠顯著降低變形桿菌感染小鼠的死亡率，但對大腸桿菌感染小鼠的死亡率沒有顯著作用。結論： 復方一枝蒿片在體內、外均具有良好的抗菌作用。

【關鍵詞】 復方一枝蒿片； 抗菌作用； 體內、外實驗

復方一枝蒿片為江蘇黃河藥業股份有限公司研制、生產的新型中草藥成品，其主要成分為一枝蒿、板藍根和大青葉，按照維醫理論，其具有清除“乃孜來”，解毒利咽，用于“乃孜來”所致的感冒、發燒、咽喉腫痛的功效；在中醫學中其具有解表祛風、涼血解毒的療效。常用于邪毒所致的感冒發燒、咽喉腫痛、病毒性感冒見上述證候者。相對于復方一枝蒿顆粒，該產品能夠克服顆粒劑用輔料用量大、服用需用開水沖服、口味不佳等缺點。為了進一步開發復方一枝蒿片，筆者對其在抗菌方面的藥效作用進行了研究，以期為復方一枝蒿片的臨床應用進一步提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 紫外分光光度計（UV-2201）：日本島津公司；臺式高速冷凍離心機（5417R）：艾本德中國有限公司（Eppendorf China Limited）；電子分析天平（AG-204）：瑞士Mettler Toledo公司；電熱恒溫培養箱（DNP-9082）：上海精宏實驗設備有限公司；潔凈工作臺（SW-CJ）：上海屹明凈化設備有限公司。

1.1.2 試藥 地塞米松（湖北潛江制藥股份有限公司）；MH肉湯培養基和MH瓊脂培養基（上海微晶生物技術有限公司）；雙黃連口服液（河南福森藥業有限公司）；復方一枝蒿片（江蘇黃河藥業股份有限公司，實驗前用滅菌蒸餾水溶解配成所需濃度）；MH血清肉湯培養基和MH血瓊脂平板培養基（分別為肉湯加滅活小牛血清，瓊脂培養基加脫纖維羊血）由本室制備。

1.1.3 動物及菌種 Balb/c小鼠300只，雌雄兼半，6～7周齡，購自上海斯萊克動物公司；金黃色葡萄球菌ATCC 25923；大腸桿菌 ATCC 58922由江蘇省藥品檢驗所提供；肺炎鏈球菌 ATCC 49619；乙型溶血性鏈球菌ATCC 6305。

1.2 方法

1.2.1 體外抗菌實驗 采用試管法測最低抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）研究復方一枝蒿片的體外抗菌研究[1-3]。

1.2.1.1 試驗菌準備 取復蘇的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大腸桿菌（Escherichia coli）MH肉湯24 h培養物分別接種至MH肉湯，37 ℃ 孵育6 h；取復蘇的肺炎鏈球菌（Pseudomonas aureginosa）和乙型溶血性鏈球菌（Streptococcus hemolytic-β）MH血清肉湯 24 h培養物分別接種至MH血清肉湯，37 ℃，6 h；分別取上述4種菌6 h培養液，用麥氏比濁法調至109/mL，再作100倍稀釋至107/mL，將107/mL定為工作濃度。通過傾注平板作菌落計數，最終確定每1 mL液體培養基中加入0.1 mL菌液。

1.2.1.2 復方一枝蒿水溶液制備 取復方一枝蒿片5 g加15 mL滅菌蒸餾水中，通過超聲處理，使復方一枝蒿片充分溶解，用1 % NaOH調至pH 7.0，用0.5 μm濾器濾過除菌，呈棕黃色透明液體。

1.2.1.3 抗菌實驗 復方一枝蒿水溶液1 mL，金黃色葡萄球菌和大腸桿菌用MH肉湯，乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌用MH血清肉湯分別作倍比稀釋至第10管，第11管為菌液對照，第12管為MH肉湯無菌對照。1～10管藥液稀釋度分別為1：2，1：4～1：1024，共4排。每排1～11管分別加入4種試驗菌液0.1 mL，第12管不加菌液，為MH肉湯無菌對照，37 ℃，24 h，觀察結果。

2 結果

MH肉湯結果顯示金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌感染的肉湯都有一定程度的變澄清，復方一枝蒿片對、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用，見表1。MH平板結果見表2。

3 討論

上述研究顯示，復方一枝蒿片劑能夠明顯抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌，對乙型溶血性鏈球菌有一定的抑制和殺滅作用，而對大腸桿菌無作用。同為上呼吸道感染常見病原菌的金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌都可以被復方一枝蒿片所抑制和殺滅，這可以解釋臨床上常用復方一枝蒿片治療咽炎、喉炎和氣管炎等上呼吸道感染的原因。上述三種病原菌均為革蘭陽性球菌，而大腸桿菌屬于革蘭陰性菌，而革蘭陽性球菌和革蘭陰性菌具有不同的細胞壁結構[6]，復方一枝蒿片對前述各菌抑制和殺滅作用的確切作用機制是否與其阻止細胞壁合成有關[7]，還有待于進一步研究。復方一枝蒿片對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護作用不顯著，但是高劑量的復方一枝蒿片能使變形桿菌感染小鼠的死亡率顯著下降，表明復方一枝蒿片對感染的小鼠具有明顯的保護作用。綜上所述，一枝蒿片具有良好的抗菌作用，但其作用機制未知，有待于進一步研究。

參考文獻

[1] 劉錫光.現代診斷微生物學[M]. 北京：人民衛生出版社， 2002：688-703.

[2] 張炳華，王亞男，張彥瓊.復方一枝蒿顆粒劑的體外抗菌作用[J].中國現代醫學雜志， 2005， 15（13）： 1968-1969.

[3] 黃慶，方蕓.復方荔枝草顆粒體內外抗菌消炎作用研究[J].中國藥房， 2008， 19（9）： 657-658.

[4] 徐叔云，卞如滾，陳修. 藥理實驗方法學[M]. 第3 版. 北京： 人民衛生出版社，2003 ：1657-1666.

[5] 常翠，董淳，楊宏圖，等.清喉口含片動物體內、外抑菌實驗研究[J].中國藥房，2006，17（5）：336.

[6] 沈關心.微生物學與免疫學[M].第5版. 北京：人民衛生出版社， 2003：127.

[7] 周正任， 李凡.醫學微生物學[M].第6版.北京：人民衛生出版社， 2003： 7- 9.

（收稿日期：2013-08-29） （本文編輯：陳丹云）