UPLC法測定氨芐西林有關物質

魏長峰，李平原，宋玉平，姜小平

（齊魯制藥有限公司，山東濟南250100）

UPLC法測定氨芐西林有關物質

魏長峰，李平原，宋玉平，姜小平

（齊魯制藥有限公司，山東濟南250100）

目的建立超高效液相色譜檢測氨芐西林有關物質的方法。方法采用Acquity UPLC HSSC18色譜柱，以含有冰醋酸、磷酸二氫鉀水溶液和乙腈的不同比例的混合液為流動相進行梯度洗脫，流速為0.5 mL·min－1，檢測波長為254 nm，柱溫為35℃，進樣量為5μL。結果氨芐西林在0.272 1～32.652μg·mL－1范圍內r≥0.999 9；該方法專屬性，重復性，耐用性，溶液穩定性良好。各組分間相互無干擾，與HPLC具有同等的檢測能力。結論該方法專屬性強，靈敏度高，效率較高，可作為氨芐西林有關物質的檢測有效方法。

氨芐西林；超高效液相色譜；有關物質

氨芐西林為藥典［1］收載的廣譜半合成青霉素，應用范圍較廣，有關物質檢測方法為HPLC法，收錄于《中國藥典》2010年版，其檢測方法存在平衡時間較長，檢測效率偏低的缺點。超高效液相色譜法［2，3］（UPLC）為近幾年推出并逐漸推廣使用的一種方法，較常規的液相色譜法（HPLC）具有高速、高分離度和高靈敏度的特點。基于UPLC的優點，本文對氨芐西林有關物質在UPLC的測試進行摸索，以提高工作效率，降低實驗成本［4，5］。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Waters Acquity UPLC色譜系統，Empower工作站，Waters 2695色譜系統。

1.2 試劑 氨芐西林對照品（EP－4.0）；頭孢拉定對照品（批號：130427－200306）；供試品（市售，批號：10817055、10817056、10817057）；乙腈（分析純，Merck公司，批號：I599130130）；磷酸二氫鉀（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20110913）；冰醋酸（分析純，天津富宇精細化工有限公司，批號：101127）；蒸餾水（自制）。

2 實驗方法

2.1 超高效液相色譜條件 超高效液相色譜儀：Waters Acquity UPLC；檢測器：TUV檢測器；波長：254 nm；柱溫：35℃；色譜柱：Waters HSS T3 C18柱（2.1 mm×50 mm，1.8μm）；流速：0.5 mL·min－1；流動相A：取0.5 mL冰醋酸、50 mL 0.2 mol·L－1磷酸二氫鉀和50 mL乙腈混合后，用水稀釋至1 000 mL；流動相B：取0.5mL冰醋酸、50mL 0.2mol·L－1磷酸二氫鉀和400 mL乙腈混合后，用水稀釋至1 000 mL，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

2.2 高效液相色譜條件 參照《中國藥典》2010年版（二部）［1］。

2.3 溶液的制備 有關物質分辨液：取頭孢拉定對照品約2.0 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液5 mL和5mL有關物度對照品溶液混合，作為分辨液。

有關物質對照品溶液：取無水氨芐西林對照品約27.0 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置100 mL容量瓶中，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，作為有關物質對照品溶液。

有關物質供試品溶液（臨用現配）：取氨芐西林供試品約31.0 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻。

3 實驗結果

3.1 系統適用性試驗結果 分別采用UPLC和HPLC對氨芐西林系統適用性溶液進行進樣檢測，氨芐西林峰與頭孢拉定峰均能很好的分離，分離度均大于3.0，結果見圖1。

圖1 氨芐西林系統適用性溶液UPLC圖譜與HPLC圖譜

3.2 系統精密度試驗結果 取有關物質對照品溶液，按上述色譜條件試驗，重復進樣6次，氨芐西林保留時間和峰面積的RSD分別為0.4和0.1%。

3.3 專屬性試驗結果 取一定量的氨芐西林分別進行酸、堿、氧化、高溫、光照破壞實驗，同時取氨芐西林各起始物料、氨芐西林粗品按照上述色譜條件進行實驗，結果表明各起始物料峰與氨芐西林峰均能有效分離，破壞降解后各雜質峰均能與主峰有效分離，不會干擾樣品的檢測。

3.4 檢測限 取稀釋劑作為空白溶液按上述條件進行檢測，計算儀器的基線平均噪聲。

稱取無水氨芐西林對照品27.21 mg，置50 mL容量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻。用流動相A逐步稀釋至氨芐西林峰的峰高為基線噪聲的3倍作為檢測限溶液，計算出氨芐西林的檢測限為0.068μg·mL－1。

3.5 定量限 根據檢測限項下的計算的結果對氨芐西林對照品溶液進行定量稀釋，按上述色譜條件進行檢測，記錄色譜圖，是氨芐西林峰的峰高為基線噪聲的10～15倍，計算定量限為0.272 1μg·mL－1。

3.6 線性范圍 在預先設定的LOQ～雜質限度的120%濃度范圍內，分別配制LOQ、限度40%、限度80%、限度點、限度的120%5個濃度的溶液。按上述色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖，以峰面積對濃度作曲線，計算回歸方程與回歸系數。線性回歸方程為：Y＝571.983 8X－16.829 7，r＝0.999 99。

3.7 重復性 氨芐西林（批號：10817057），稱取6份，按上述色譜條件分別進行實驗，進行有關物質的檢測。單個雜質6次的平均值為0.20%，RSD＝0%；總雜質6次的平均值為0.50%，RSD＝2.0%。

3.8 穩定性 取氨芐西林（批號：10817057）供試品一份，分別在0、1、2、4、6、8、10 h進行有關物質的檢測，隨著放置時間的延長，總雜質在逐漸增大，建議該樣品應臨用新制，在8 h內進行檢測，結果見表2。

表2 供試品穩定性檢測結果

3.9 耐用性 取專屬性項下各溶液，配制混合溶液，針對以上色譜條件，在其他條件不變的情況下，分別將流速改變±0.1 mL·min－1，柱溫改變±5℃，梯度比例改變±3%，更換同類型的其他色譜柱，對混合溶液進行實驗，結果表明，改變以上比例，氨芐西林峰與相鄰雜質峰均能達到有效分離。

4 樣品檢測

取氨芐西林樣品3批，分別按照上述色譜條件和《中國藥典》2010年版色譜條件進行有關物質的檢測，計算雜質含量，結果如表3。

Determ ination of related substances of ampicillin by UPLC

WEIChang-feng，LIPing-yuan，SONG Yu-ping，JIANG Xiao-ping
（Qilu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Jinan 250100，China）

ObjectiveTo develop a UPLCmethod for the determination of related substances of ampicillin.MethodsA gradientmethod using an Acquity UPLC HSSC18column and detection at 254 nm was developed，takingmixture of acetic acid and potassium dihydrogen phosphate solution and acetonitrile as mobile phase，at the flow rate of 0.5 mL· min－1.Column temperaturewas35℃，and injection volumewas5μL.ResultsThe linear ranges of ampicillin was0.272 1～32.652μg·mL－1（r≥0.999 9）.Thismethod had fine specificity，repeatability，robustness.And the solution was stable.There was no interference between the components.This method had the same detectability with HPLC method.ConclusionThismethod had good specificity，sensitivity，and efficiency.It can be used to detect related substances of ampicillin.

Ampicillin；UPLC；Related substances

R927.1

：A

2095－5375（2014）03－0148－003

魏長峰，男，研究方向：藥物分析，E－mail：changfeng.wei＠qilu－pharna.com