貞茯菌膠囊對酒精性肝損傷模型小鼠的保護作用Δ

薛承斌，晏 瓊，韓定獻（.華中科技大學醫院，武漢 430074；.華中科技大學化學系藥物研究所，武漢 430074）

由于酗酒而產生的酒精性肝損傷現已成為一種常見、多發癥，嚴重影響人們的健康[1]。又因很多肝臟疾病的病因或發病機制迄今尚未完全明了，臨床尚無特效藥物治療酒精性肝損傷，其損傷又呈不可逆性[2]，因此早期預防顯得尤為重要，而中醫藥對本病的治療有著明顯的優勢。本課題組從具有護肝作用的原料女貞子、茯苓以及香菇多糖入手，對近年來國內相關文獻進行檢索和分析，再根據中醫藥有關理論進行產品組方，采取科學的生產工藝加工得到貞茯菌膠囊。本研究旨在探討貞茯菌膠囊對酒精性肝損傷模型小鼠的輔助保護功能。

1 材料

1.1 儀器

7020型全自動生化分析儀檢測（日本日立公司）；XDS-200D型光學顯微鏡（上海蔡康光學儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

貞茯菌膠囊（華中科技大學藥物研究所，批號：20111201）；丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 動物

SPF級KM小鼠60只，♀，體質量（20±2）g，由湖北省實驗動物研究中心提供[實驗動物使用許可證號：SYXK（鄂）2008-0014]。實驗室溫度20～26 ℃，濕度40%～70%。

2 方法

2.1 復制模型與分組、給藥

60只KM小鼠隨機均分為5組，即正常對照（等容生理鹽水）組、模型（等容生理鹽水）組與貞茯菌膠囊高、中、低劑量（0.45、0.30、0.15 g/kg）組，ig給藥，每天1次，連續30 d。末次給藥后一次性ig 50%乙醇14 ml/kg以復制小鼠酒精性肝損傷模型[3]。

2.2 貞茯菌膠囊對模型小鼠體質量的影響

分別于ig貞茯菌膠囊0、1、2、3、4周后稱定小鼠體質量。

2.3 貞茯菌膠囊對模型小鼠肝勻漿MDA、GSH、甘油三酯（TG）水平的影響

模型復制成功后禁食16 h，頸椎脫臼處死小鼠，取0.5 g小鼠肝臟，制備肝勻漿后按試劑盒方法測定MDA、GSH水平，自動生化分析儀測定TG水平。

2.4 貞茯菌膠囊對模型小鼠肝臟形態學的影響

將小鼠肝臟從肝左葉中部作橫切面取材，固定、脫水、浸蠟、包埋、切片、油紅O染色，觀察脂滴在肝臟的分布、范圍和面積，分別記錄每個視野中的各種病變所占視野的面積，累計所觀察視野的病變總分：肝細胞內脂滴散在、稀少，0分；含脂滴的肝細胞不超過1/4，1分；含脂滴的肝細胞不超過1/2，且超過1/4，2分；含脂滴的肝細胞不超過3/4，且超過1/2，3分；肝組織幾乎被脂滴替代，4分。

2.5 統計學方法

3 結果

3.1 貞茯菌膠囊對模型小鼠體質量的影響

各組小鼠體質量無明顯改變，差異均無統計學意義（P＞0.05）。貞茯菌膠囊對模型小鼠體質量的影響見表1。

表1 貞茯菌膠囊對模型小鼠體質量的影響（）Tab 1 Effects of Zhenfujun capsule on body weight of model mice（）

表1 貞茯菌膠囊對模型小鼠體質量的影響（）Tab 1 Effects of Zhenfujun capsule on body weight of model mice（）

3.2 貞茯菌膠囊對模型小鼠肝勻漿MDA、GSH與TG含量的影響

與正常對照組比較，模型組小鼠肝勻漿MDA、TG含量增加，GSH含量減少，差異有統計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，貞茯菌膠囊高、中劑量組小鼠肝勻漿MDA水平降低，GSH水平升高；貞茯菌膠囊高、中、低劑量組小鼠肝勻漿TG水平降低，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。貞茯菌膠囊對模型小鼠肝勻漿MDA、GSH和TG含量的影響見表2。

表2 貞茯菌膠囊對模型小鼠MDA、GSH、TG含量的影響（）Tab 2 Effects of Zhenfujun capsule on the content of MDA，GSH and TG of model mice（）

表2 貞茯菌膠囊對模型小鼠MDA、GSH、TG含量的影響（）Tab 2 Effects of Zhenfujun capsule on the content of MDA，GSH and TG of model mice（）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

3.3 貞茯菌膠囊對小鼠肝臟形態學的影響

正常對照組病變總分為（0.23±0.44）分，模型組病變總分為（3.60±0.45）分，貞茯菌膠囊高、中、低劑量組病變總分分別為（3.22±0.42）、（3.08±0.67）、（3.33±0.72）分。與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織細胞內被染為紅色大脂滴，且分布范圍廣，肝細胞脂肪變性明顯，證明小鼠酒精性肝損傷模型復制成功；與模型組比較，貞茯菌膠囊高、中、低劑量組小鼠肝組織細胞紅色脂滴分布范圍變小，說明脂肪變性情況有所改善，其中以中劑量組效果最好，紅色脂滴分布范圍明顯減小，表明貞茯菌膠囊具有逆轉肝細胞脂肪變性和修復肝臟細胞的作用。小鼠肝臟形態學見圖1。

4 討論

過量酗酒導致的酒精性肝損傷已逐漸成為全球性公共衛生問題。自由基和脂質過氧化損傷是酒精性肝損傷的一個重要發病機制[3]。乙醇進入體循環后在肝臟中代謝會產生自由基與活性氧，引發氧化應激反應，氧自由基使脂質過氧化，導致肝中還原型谷胱甘肽減少和過氧化脂質增多，誘發肝臟組織損傷[4-5]。

貞茯菌膠囊的主要成分女貞子具有護肝、降血糖、降血脂、抗炎、抗衰老抗癌等藥理作用[6]。齊墩果酸是女貞子提取物的主要成分，它對肝臟的保護作用主要歸因于其抗氧化、抗炎作用以及對藥物代謝酶的影響[7]；其化學結構存在活性基團，可阻止或減少MDA的生成，活潑的雙鍵易與自由基發生加成反應[3]，減輕自由基對肝臟的損害。

茯苓是藥食兩用真菌，為中藥“四君八珍”之一，現代醫學研究證實，茯苓具有抗腫瘤、增強免疫功能、保肝等多種藥理作用[8]。有研究表明，茯苓提取物可促進實驗性肝硬變動物肝臟膠原蛋白降解，使肝內纖維組織重吸收[9]。

圖1 小鼠肝臟形態學（油紅O染色，400×）A.正常對照組；B.模型組；C.貞茯菌膠囊低劑量組；D.貞茯菌膠囊中劑量組；E.貞茯菌膠囊高劑量組Fig 1 Morphology of liver tissue in mice（oil red O stain，400×）A.normal control group；B.model group；C.Zhenfujun capsule low-dose group；D.Zhenfujun capsule medium-dose group；E.Zhenfujun capsule high-dose group

香菇多糖是香菇的重要功效成分，具有一定清除羥基自由基、清除超氧陰離子自由基的能力，可以減少小鼠肝勻漿MDA生成[10]，增加小鼠肝勻漿細胞色素P450[11]，有利于調節體內某些活性物質的代謝，從而對肝起到保護作用。

由本研究可知，與模型組比較，貞茯菌膠囊高、中劑量組小鼠肝勻漿MDA水平降低，GSH水平升高，貞茯菌膠囊高、中、低劑量組小鼠肝勻漿TG水平降低。肝臟病理學檢查結果顯示，貞茯菌膠囊高、中劑量組小鼠肝臟損傷程度輕于模型組，肝細胞脂肪變性程度減輕。以上結果說明貞茯菌膠囊可能能清除肝臟中產生的自由基、降低過氧化脂質，并能在一定程度上減輕肝細胞的脂肪變性程度，對酒精性肝損傷具有輔助保護作用。

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[5]李南珠.乙醇在肝臟中的代謝與乙醇性肝損傷[J].中國現代醫藥雜志，2008，10（3）：128.

[6]黃婉，楊耀芳.女貞子及其有效成分的藥理及臨床研究進展[J].現代中西醫結合雜志，2003，12（7）：772.

[7]周志勇，袁丁.齊墩果酸藥理作用研究進展[J].中國醫院藥學雜志，2008，28（23）：2 031.

[8]王海峰.茯苓的現代研究進展[J].社區醫學雜志，2011，9（12）：44.

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