毛細管氣相色譜法測定奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜原料藥中的甲苯殘留量

劉慧穎，滕懷鳳（遼寧省藥品檢驗檢測院，沈陽 110023）

奮乃靜（Perphenazine）和鹽酸氟奮乃靜（Fluphenazine hydrochloride）均為吩噻嗪類抗精神病藥物中較為經典的品種，可用于治療精神分裂癥及其他精神躁狂癥[1-2]。相關文獻及生產企業提供的資料顯示，二者的合成工藝較為相似，即均以N-（2-羥乙基）哌嗪和1，3-溴氯丙烷為起始原料，在甲苯溶劑中合成為1-（3-氯丙基）-4-（2-羥乙基）哌嗪，進而再以甲苯為反應溶劑，分別與1-（3-氯丙基）-4-（2-羥乙基）哌嗪和2-三氟甲基吩噻嗪結合而成[3-4]。這兩種原料藥在合成過程中均使用了大量的甲苯，其屬于第二類限制使用的溶劑[5-7]。為保障用藥安全和控制產品質量，需要對兩種原料藥中甲苯殘留量進行測定，但目前尚無相關文獻報道。鑒于此，本研究建立了一種同時測定奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜原料藥中甲苯殘留量的方法。

1 材料

1.1 儀器

GC-2010 Puls 氣相色譜儀，配備氫火焰離子化檢測器（FID）等（日本島津公司）；XP205電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

奮乃靜（批號：20120401、20120402、20120403）、鹽酸氟奮乃靜（批號：20120301、20120302、20120303）原料藥均由遼寧省某制藥公司提供；甲苯（分析純）、異辛烷（分析純）、二甲亞砜（DMSO，色譜純）、二甲基甲酰胺（DMF，色譜純）均來源于國藥集團化學試劑有限公司；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

毛細管柱：HP-5（0.53 mm×30 m，2.65 μm）；檢測器：FID；柱溫：50 ℃；進樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：250 ℃；載氣：N2，流速：4 ml/min；氫氣流速：50 ml/min；空氣流速：400 ml/min；進樣量：1 μl；分流比：10 ∶1。在上述色譜條件下，甲苯與異辛烷的理論板數均大于10 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備溶液的制備 稱取甲苯約89 mg，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加DMSO定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 內標溶液的制備 稱取異辛烷約89 mg，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加DMSO定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密量取對照品貯備溶液和內標溶液各1 ml，置于10 ml 量瓶中，加DMSO 定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 未加入內標的供試品溶液的制備 分別稱取奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜各約1 g，精密稱定，分別置于10 ml 量瓶中，加DMSO溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.5 供試品溶液的制備 分別稱取奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜各約1 g，精密稱定，分別置于10 ml量瓶中，精密加入內標溶液1 ml，加DMSO溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.6 空白溶劑的制備 取試驗用DMSO，直接測定。

2.3 專屬性試驗

取“2.2”項下空白溶劑、未加入內標的供試品溶液、對照品溶液、供試品溶液各適量，分別按照“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜，詳見圖1。由圖1 可見，DMSO 在異辛烷和甲苯出峰位置均無干擾，且供試品中雜質峰對測定亦無干擾，同時甲苯與異辛烷峰能完全分離。

2.4 線性關系考察

精密稱取甲苯0.092 66 g，置于100 ml 量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液，備用。分別精密量取上述溶液0.1、0.5、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 ml，置10 ml 量瓶中，精密加入內標溶液1 ml，加DMSO 定容至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。以甲苯的質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標，甲苯與內標峰面積的比值（y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程y＝0.014 1x－0.006 6（r＝0.999 4，n＝7）。結果表明，甲苯檢測質量濃度在9.266～111.192 μg/ml范圍內同甲苯與內標峰面積的比值呈良好的線性關系。

圖1 毛細管氣相色譜圖A.空白溶劑；B.未加入內標的奮乃靜供試品溶液；C.未加入內標的鹽酸氟奮乃靜供試品溶液；D.對照品溶液；E.奮乃靜供試品溶液；F.鹽酸氟奮乃靜供試品溶液；a.異辛烷；b.甲苯Fig 1 Capillary GCA.blank solvent；B.perphenazine solution without internal standard；C.perphenazine hydrochloride solution without internal standard；D.substance control；E.perphenazine solution；F.perphenazine hydrochloride solution；a.isooctane；b.methylbenzene

2.5 檢測限和定量限考察

取“2.4”項下對照品貯備溶液適量，不斷稀釋，至信噪比約為3 ∶1 和10 ∶1 時，分別得甲苯的檢測限和定量限為0.593 μg/ml和1.464 μg/ml。

2.6 精密度試驗

取“2.2.3”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續進樣5 次，測定。結果，甲苯與內標峰面積的比值的RSD＝1.22%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩定性試驗

分別稱取“2.9”項下奮乃靜（批號：20120401）、鹽酸氟奮乃靜（批號：20120301）原料藥的中濃度供試品溶液適量，于放置0、1、2、4、8 h時分別進樣，測定。結果，奮乃靜、鹽酸氟奮乃靜原料藥樣品中甲苯與內標峰面積的比值的RSD 分別為1.42%、1.39%，表明供試品溶液放置8 h內的穩定性良好。

2.8 重復性試驗

分別精密稱取奮乃靜（批號：20120401）、鹽酸氟奮乃靜（批號：20120301）原料藥各約1 g，共6份，精密稱定，按“2.2.5”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算含量。結果，鹽酸氟奮乃靜原料藥樣品中均未檢出甲苯，奮乃靜原料藥樣品中甲苯含量的RSD＝5.79%，表明本方法的重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

分別精密稱取奮乃靜（批號：20120401）、鹽酸氟奮乃靜（批號：20120301）原料藥各約1 g，共9 份。分別置于10 ml 量瓶中，精密加入內標溶液1 ml，3份一組。分別精密加入“2.2.1”項下對照品貯備溶液0.8、1.0、1.2 ml，加DMSO適量使溶解并定容至刻度，搖勻，得低、中、高濃度的供試品溶液各3份，按“2.1”項下色譜條件進樣測定并計算回收率，結果詳見表1、表2。

表1 奮乃靜加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests of perphenazine（n＝9）

表2 鹽酸氟奮乃靜加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests of perphenazine hydrochloride（n＝9）

2.10 樣品中甲苯殘留量的測定

取奮乃靜、鹽酸氟奮乃靜兩種原料藥各3 批樣品，按“2.2.5”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣測定和計算含量。結果，3批鹽酸氟奮乃靜原料藥樣品中均未檢出甲苯；3 批奮乃靜原料藥樣品中甲苯的平均殘留量為0.001%，遠低于《中國藥典》2010 年版附錄ⅧP 溶劑測定法中規定的限度0.089%，詳見表3。

表3 奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜原料藥樣品中甲苯殘留量的測定結果（n＝3）Tab 3 Determination of residual methylbenzene in perphenazine and perphenazine hydrochloride（n＝3）

3 討論

3.1 溶劑的選擇

本試驗分別考察了兩種原料藥樣品在水、DMF 和DMSO中的溶解情況。結果，樣品在水和DMF中不能完全溶解，故最終選擇了同時對兩種原料藥樣品具有很好的溶解性又不干擾甲苯測定的DMSO 作為溶劑。在樣品測定結束后，可將柱溫升高至200 ℃，以使DMSO盡快出峰流出。

3.2 毛細管柱的選擇

甲苯為弱極性物質，故本試驗考查了兩種原料藥樣品在DB-1、DB-1301 和HP-5 極性不同的3 種毛細管柱中的色譜行為。結果，甲苯及內標物異辛烷在前兩種毛細管柱中的測定會受樣品雜質峰的干擾，故最終選擇弱極性的HP-5毛細管柱進行分析。

3.3 內標物的確定

本試驗所選擇的內標法較外標法定量更準確，適合微量組分的測定。在選擇內標物時，考察了異辛烷、正庚烷、正己醇、苯甲醇等與甲苯結構相似的物質。參考《中國藥典》2010年版（二部）附錄ⅧP殘留溶劑測定法中各物質的相對保留時間，縮小考察試驗范圍為出峰時間與甲苯接近的異辛烷和正庚烷，結果發現異辛烷出峰時間適宜，且不受兩種原料藥樣品雜質峰的干擾，故最終選擇異辛烷為內標物。

3.4 毛細管色譜條件的優化

甲苯沸點較高，頂空條件下檢測靈敏度較低，故采用直接進樣法測定。當改變進樣口溫度（190、200 ℃）、柱流量（3、4、5 ml/min）、分流比（10∶1和15∶1）、柱溫（50、60 ℃）、檢測器溫度（230、250 ℃）等色譜條件時，均不影響兩種原料藥樣品中甲苯殘留量的測定。此外，又分別用HP-5（30 m×0.53 mm，2.65 μm）、DB-5MS（30 m×0.53 mm，1.5 μm）和DIKMA CP-SIL 8CB（30 m×0.53 mm，5 μm）3 種色譜柱進行測定，計算兩種原料藥樣品中甲苯的殘留量。結果，鹽酸氟奮乃靜原料藥樣品中均未檢出甲苯，奮乃靜原料藥樣品中甲苯殘留量均為0.001%，表明該方法的耐用性良好。

奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜的部分合成工藝是相同的，對于同時生產兩種原料藥的企業來說，能在同一個色譜條件下對二者中甲苯的殘留量進行控制，將大大簡化質量控制的檢驗操作，提高生產效率，降低人力和物力的消耗。本試驗所建立的方法結果準確、可靠，可用于奮乃靜和鹽酸氟奮乃靜原料藥中甲苯殘留量的測定。

[1]陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學[M].15 版.北京：人民衛生出版社，2003：238-239.

[2]栗德林.中國藥物大辭典：下冊[M].北京：中國醫藥科技出版社，1991：296-297、475.

[3]魏金友.鹽酸氟奮乃靜合成方法改進[J].中國醫藥工業雜志，1988，19（12）：537.

[4]陳發普，殷祥生，張浩，等.鹽酸氟奮乃靜合成工藝改進[J].中國醫藥工業雜志，1991，22（12）：535.

[5]《化學藥物殘留溶劑研究技術指導原則》課題研究組.化學藥物有機溶劑殘留量研究的技術指導原則：[H]GPH7-1[S].2005-03.

[6]ICH Steering Committee.Harmonized Tripartite Guideline Impurities：Guideline for Residual Solvents Q3C（R5）[EB/OL].（2011-02）[2013-09].http：//www.ich.org/products/guidelines/quality/quality-single/article/impurities-guideline-for-residual-solvents.html.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄61.