富含多糖的強旱生植物半日花基因組DNA提取方法

白沙如拉等

近年來，隨著分子生物學技術的發展，以DNA為主要研究對象的保護遺傳學在珍惜瀕危植物的保護和利用上得到了廣泛應用[1-2]。相關研究結果證明，保護遺傳學在瀕危物種的保護方面起到了十分積極的作用[1-4]。而要開展珍惜瀕危植物的保護遺傳學研究，獲得高質量基因組DNA是關鍵的第一步。對于植物DNA提取，目前已有很多經典和成功方法[5-8]，然而，多數瀕危植物由于生境特殊（干旱、低溫及鹽堿等），其體內常含有較多的多糖和多酚等物質，若方法不當，會使所提基因組DNA沉淀含有多糖等粘稠膠狀物而難于溶解，嚴重影響所提取DNA的質量，以至于無法進行PCR擴增和酶切等反應。雖然已有一些富含多糖多酚類物質植物的基因組DNA提取方法的報道[5-11]，但這些方法并不適用于所有極端生境下的植物，照搬這些方法提取的基因組DNA常常無法進行下游試驗。為此，對于一些極端環境下的珍稀瀕危植物基因組DNA的提取仍需摸索其最佳提取條件。變色硅膠能有效、快速干燥植物葉片，用植物干葉片提取DNA以及用此樣品進行酶切和擴增的成功很有意義，為解決野外采樣以及保存和運輸上的困難提供了很大的方便，使得研究人員可以在居群水平對瀕危植物進行保護遺傳學研究[1-3]。為了評價超旱生瀕危植物半日花（Helianthemum soongoricum）的遺傳多樣性，筆者嘗試了上述多種去多糖多酚類植物基因組DNA的提取方法，用于提取半日花基因組DNA，但所提取的基因組DNA仍含有多糖等粘稠膠狀物而難于溶解，無法進行酶切和PCR擴增試驗，而商業化的植物基因組DNA提取試劑盒由于價格較高以及DNA產率低，不適合于大樣本量的群體遺傳分析，為此，本研究基于CTAB法提取植物DNA的原理，以硅膠干燥的葉片為材料，通過改進多糖的分離和去除，摸索出一種更適合半日花DNA提取的方法，為進一步開展半日花的保護遺傳學研究奠定了基礎。

1 材料和方法

1.1 材 料

本方法提供了一個通用、簡單易行，成本低，且安全地去除植物DNA 提取過程中多糖等雜質的方法，所提取 DNA無降解并且純度較高，采用該方法所提DNA的純度和濃度可以滿足PCR擴增和限制性內切酶消化的要求，這為后續以分子標記和序列分析為基礎的植物群體遺傳學和保護遺傳學的研究奠定了重要的基礎。

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