香黃通便膠囊中木香烴內酯、去木香烴內酯含量測定的研究

祁秀玲 于永軍 王曉琦 孫會昌 劉清新 于 娜

1.滄州醫學高等?？茖W校，河北滄州061000；2.河北省滄州市食品藥品檢驗所，河北滄州061000

香黃通便膠囊中木香烴內酯、去木香烴內酯含量測定的研究

祁秀玲1于永軍1王曉琦2孫會昌2劉清新1于 娜1

1.滄州醫學高等專科學校，河北滄州061000；2.河北省滄州市食品藥品檢驗所，河北滄州061000

目的采用高效液相色譜法，對香黃通便膠囊中木香烴內酯、去木香烴內酯進行含量測定研究。方法①高效液相色譜法：檢測木香烴內酯、去木香烴內酯的含量。參考文獻選擇合適的固定相，調整流動相組成、配比、流速以及柱溫，在最大吸收波長下測定，使指標峰分離完全，理論塔板數符合要求。②線性范圍考察：配制系列濃度的對照品溶液，以色譜峰的峰面積為縱坐標，以進樣濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸曲線并考察線性范圍。③方法學考察：分別考察測定方法的重復性、重現性、耐用性、穩定性和加樣回收率。④樣品含量測定：取三批樣品分別按上述方法測定指標成分的含量。結果香黃通便膠囊中木香烴內酯、去木香烴內酯色譜條件為：Agilent Zorbax SB-C18色譜柱，流動相：甲醇-水（65∶35，V/V），流速：0.8 mL/min，柱溫：25℃，檢測波長：225 nm。木香烴內酯、去木香烴內酯分別在14.4～216.0 μg/mL、28.0～421.2 μg/mL范圍內線性關系良好，r分別為0.9996、0.9999。該方法重復性、重現性、耐用性、在12h內穩定性的RSD分別為0.77%、0.30%，0.05%、0.59%，0.88%、1.30%，1.54%、0.43%。三個濃度（80%、100%、120%）的加樣回收率為99.2%、102.9%，100.9%、101.8%，97.5%、100.5%，RSD分別為0.84%、0.31%，0.20%、1.70%，0.18%、0.12%。樣品中木香烴內酯、去木香烴內酯總含量不低于4.22 mg/粒。結論以木香烴內酯、去木香烴內酯作為含量測定指標，采用高效液相色譜法進行檢測，準確度高，專屬性強，重現性好。

香黃通便膠囊；含量測定；高效液相色譜法；木香烴內酯；去木香烴內酯

香黃通便膠囊是在臨床經驗方的基礎上研制開發成的中藥復方制劑，由大黃、木香、鹽知母、鹽黃柏等十一味中藥材組成，具有清熱散結、順氣導滯、健脾消食、潤腸通便的作用，用于熱結津傷、氣滯脾虛導致的便秘。木香是處方中主要藥味[1]，故對木香中所含主要活性成分木香烴內酯和去木香烴內酯進行含量測定研究[2]，以控制制劑質量，保證藥品安全有效[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XS105型電子分析天平（萬分之一），AS312O型超聲波清洗儀（天津奧特塞恩斯有限公司），LC-2010AHT230V液相色譜儀（日本島津），8453型紫外分光光度計（安捷倫），Agilent 1260，Agilent Zorbax SBC18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。

1.2 試藥

香黃通便膠囊（自制，規格為0.5 g/粒，批號為2013 0401、20130501、20130502、20130503），木香烴內酯（中國藥品生物制品檢定所，批號為111524-201208，純度為99.5%），去木香烴內酯（中國藥品生物制品檢定所，批號為111525-201008，含量以100%計），甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

取膠囊內容物，研細，取1 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱重，甲醇補充重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作供試品溶液[4-6]。

2.2 對照品溶液的制備

取木香烴內酯、去木香烴內酯，加甲醇，制成濃度分別為38、82 μg/mL的混合對照品溶液[7]。

2.3 陰性樣品液的制備

取不含木香的陰性制劑，照供試品溶液的制備方法制備，作為陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件[8-10]

將對照品溶液在190～320 nm范圍內掃描，得掃描曲線，見圖1、2。選擇合適的固定相，調整流動相的組成、配比、流速以及柱溫，在最大吸收波長處測定，使指標峰分離完全、理論塔板數符合要求。

試驗可知大木香烴內酯、去木香烴內酯在225 nm波長處均有較大吸收，且基線平穩。使用Agilent 1260，色譜柱，流動相：甲醇-水（65∶35），流速為0.8 mL/min，柱溫為25℃時，木香烴內酯、去木香烴內酯各峰與其他峰分離良好，分離度大于1.5，陰性對照實驗表明其他組分峰對上述峰無干擾，理論塔板數按大黃素計不低于3000。色譜見圖3、4、5。

圖1 木香烴內酯的最大吸收波長掃描圖

圖2 去木香烴內酯的最大吸收波長掃描圖

圖3 木香烴內酯、去木香烴內酯標準品的高效液相色譜圖

2.5 線性關系的考察

圖4 樣品中木香烴內酯、去木香烴內酯的高效液相色譜圖

圖5 陰性樣品木香烴內酯、去木香烴內酯的高效液相色譜圖

取混合對照品溶液（38、82 μg/mL），分別進樣2、5、10、15、20、30 μL，測定吸收峰，分別以木香烴內酯、去木香烴內酯進樣量為橫坐標，所對應的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，峰面積對木香烴內酯、去木香烴內酯的回歸方程為y=240.91x-57.938，y=237.53x-33.251。r分別為0.9996、0.9999，木香烴內酯、去木香烴內酯在14.4～216.0 μg/mL、28.0～421.2 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.6 重復性考察

取同一批樣品，按相同制備方法制備6份供試品溶液，進樣，測定峰面積，計算木香烴內酯、去木香烴內酯峰面積的RSD為0.77%、0.30%。

2.7 穩定性考察

取供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12 h測定峰面積，計算木香烴內酯、去木香烴內酯峰面積的RSD為1.54%、0.43%。樣品溶液在12 h穩定。

2.8 加樣回收率

取已知含量的樣品6份，各約0.25 g，精密稱定，分別各加入80%、100%、120%的木香烴內酯對照品溶液（0.12 mg/mL），去木香烴內酯對照品溶液（0.234 mg/mL），加甲醇制成25 mL，進樣，測定加樣回收率，見表1。計算可知，樣品的平均回收率為99.2%、102.9%，100.9%、101.8%，97.5%、100.5%，RSD為0.84%、0.31%，0.20%、1.70%，0.18%、0.12%。

表1 木香烴內酯、去木香烴內酯的加樣回收率測定結果

2.9 耐用性試驗

分別采用依特利（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱，Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱，考察不同牌號色譜柱對色譜峰的影響，結果表明，木香烴內酯、去木香烴內酯各峰與其他峰分離度均＞1.5，理論塔板數均＞4000，測試結果RSD為0.88%、1.30%。

2.10 重現性試驗

兩人在不同實驗室使用不同的液相色譜儀及色譜柱測定同一批樣品，計算RSD為0.05%、0.59%。

2.11 樣品測定

按確定的上述含量測定方法，測定3批樣品中木香烴內酯、去木香烴內酯的含量，結果見表2。

表2 木香烴內酯、去木香烴內酯的含量測定（mg/粒）

通過3批樣品的測定，可知木香烴內酯、去木香烴內酯含量總和平均為5.2932 mg/粒，考慮到藥材的差異，制備過程中的差異，測量中的誤差，確定香黃通便膠囊中木香烴內酯、去木香烴內酯總含量限度指標下浮20%，即不小于4.22 mg/粒[12]。

3 討論

木香是處方中的主要成分[11]，參照木香藥材的含量測定方法，制定了復方制劑中木香烴內酯和去木香烴內酯的含量。本研究選擇了甲醇-水（65∶35），保留時間適宜，分離度及理論塔板數均符合要求。木香烴內酯及去木香烴內酯需冷凍保存，故對照品液應新鮮配制，同時柱溫設定在室溫。中藥制劑不同于化藥制劑，藥材有效成分含量差異較大，生產過程影響因素較多，因此在制訂質量標準時，含量指標的確定以三批樣品含量平均值下浮20%作為控制指標。

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The study of determination of Costunolide and Dehydrocostuslactone in Xianghuangtongbian Capsule

QI Xiuling1YU Yongjun1WANG Xiaoqi2SUN Huichang2LIU Qingxin1YU Na1
1.Cangzhou Medical College,Hebei Province,Cangzhou061000,China;2.Cangzhou Institute for Food and Drug Control,Hebei Province,Cangzhou061000,China

ObjectiveTo measure the content of Costunolide and Dehydrocostus lactone in Xianghuangtongbian Capsule by using highly-effective liquid chromatography.Methods①HPLC:The contents of Costunolide and Dehydrocostus lactone was detected separately.Proper stationary phase was chosed,the makeup,matching,flow rate and column temperature of mobile phase was adjusted,in the condition of wavelength(nm)max,the absorption peaks were separated completely,the theoretical plate number meet the standard.②Linearity range investigation:Reference substance solution of different concentration were confected,the linear regression was performed with chromatographic peak area as y-axis and sampling concentration as x-axis,the curvilinear regression was to get,and the linearity range was investigated.③Methodological investigation:the repeatability,reproducibility,durability,stability and sample recovery rate of the method were investigated.④Sample content determination:determining the content of index components in three groups of samples according to the methods mentioned above.ResultsThe concentration of Costunolide and Dehydrocostus lactone in Xianghuangtongbian Capsule was determined using a HPLC system at the wavelength of 225 nm.The separation was achieved by using a Agilent Zorbax SB-C18,at a rate of 0.8 mL/min.The temperature of column was 25℃.The mobile phase consisted of methyl alcohol and water at a ratio of 65∶35(V/V),Costunolide and Dehydrocostus lactone had a good linear relationship among 14.4-216.0 μg/mL,28.0-421.2 μg/mL.r was 0.9996 and 0.9999.The RSD%of repeatability,reproducibility,durability,the stability within 12 hours and analytical recovery were 0.77%,0.30%;0.05%,0.59%;0.88%,1.30%;1.54%, 0.43%.The analytical recovery of three different concentration was 99.2%,102.9%;100.9%,101.8%;97.5%,100.5%,with RSD was 0.84%,0.31%;0.20%,1.70%;0.18%,0.12%.It was no less than 4.22 mg mg in per granule of the total content of Costunolide and Dehydrocostus lactone.ConclusionRegard Costunolide and Dehydrocostus lactone as a target of determining the content,using highly-effective liquid chromatography to measure it,the accuracy is high, the specificity is better,the reproducibility is good.

Xianghuangtongbian Capsule;Content measuring;HPLC;Costunolide;Dehydrocostuslactone

R927.2

A

1673-7210（2014）04（c）-0095-04

2013-11-19本文編輯：衛軻）

河北省科學技術研究與發展計劃項目（編號12272507）。

祁秀玲（1966.12-），女，河北東光人，碩士，副教授，高級工程師，滄州醫學高等專科學校藥學系藥劑教研室主任；研究方向：藥物制劑技術。