平胃散中蒼術素在大鼠體內藥代動力學研究

李古月 劉佳鑫 才 謙

1.中國醫科大學附屬第一醫院，遼寧沈陽110000；2.中國醫科大學藥學院，遼寧沈陽110000；3.遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧大連116600

平胃散中蒼術素在大鼠體內藥代動力學研究

李古月1，2劉佳鑫1，2才 謙3

1.中國醫科大學附屬第一醫院，遼寧沈陽110000；2.中國醫科大學藥學院，遼寧沈陽110000；3.遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧大連116600

目的研究平胃散中蒼術素在大鼠血漿及組織中分布特征。方法建立大鼠血漿中蒼術素的HPLC測定方法，考查大鼠口服平胃散混懸液0.17，0.33，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12，24 h后血藥濃度變化和2，3，8 h后大鼠體內組織分布情況，采用DAS 2.0數據處理軟件計算藥代動力學參數。結果大鼠口服平胃散混懸液后，蒼術素在大鼠體內的達峰時間Tmax為2.5 h，最大濃度Cmax為1.765 mg/L，半衰期t1/2z為5.723 h，AUC 11.789 mg/L·h，且在6 h左右時第2次達峰，出現雙峰現象。大鼠口服平胃散混懸液后2，3，8 h的藥物組織分布由高到低的順序大致是胃>小腸、脾>肝、肺、心>腎、大腸。結論該方法靈敏、快速、準確，可用于大鼠血漿中蒼術素濃度的測定。

平胃散；蒼術素；藥代動力學；組織分布；高效液相色譜

平胃散出自宋代《太平惠民和劑局方》。由炙蒼術、姜厚樸、陳皮、甘草四味藥組成，具有燥濕健脾，行氣和胃之效。主治濕困脾胃證[1]。大凡脾胃病變，只要屬于所謂脾胃濕滯，都可用它或加味而治，所以古人稱它是“治脾圣藥”。君藥蒼術為菊科植物茅蒼術A-tractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術Atractylodes Chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖，春、秋二季采挖，除去泥沙，曬干，撞去須根。蒼術味辛、苦，性溫、歸脾、胃、肝經，具有燥濕健脾，祛風散寒，明目的功效[2]。蒼術有效成分為倍半萜類和聚乙烯炔類，前者主要為β-桉葉醇，而后者主要為蒼術素[3]，并多以蒼術素作為定量指標。以往對蒼術素的藥代動力學研究僅局限在單味藥上，因此本實驗采用HPLC法[4]，以大黃素甲醚為內標，研究復方中蒼術素的藥代動力學和組織分布的變化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FJ-200高速分散均質機（上海標本模型廠）；HC-2062高速離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司）；XK96-B快速混勻器（姜堰市新康醫療器械有限公司）；AR2140電子分析天平（上海奧豪斯公司）；KH-300P型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；島津LC-10A高效液相色譜儀（SPD-10Avp、LC-10ATp、N3000色譜工作站）。

1.2 藥材和藥品試劑

蒼術（麩炒）、厚樸（姜炙）、陳皮、甘草（炙）均購自北京同仁堂大藥房大連分店，經遼寧中醫藥大學鑒定教研室李峰教授鑒定，均符合《中國藥典》2010年版一部規定。蒼術素（批號：17-2001；上海中藥標準化研究中心）；大黃素甲醚對照品（批號：110758-201013，中國食品藥品檢定研究院）；氯化鈉注射液（黑龍江科倫制藥有限公司，批號：B12120408-1）；乙腈（色譜純，瑞典歐森巴克化學公司）；甲醇（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司），其余試劑均為分析純。

1.3 動物

健康清潔級SD大鼠，體重180～220 g，雌雄兼用，動物合格證號：SCXK（遼）2008-0002，由大連醫科大學實驗動物中心提供，適應性飼養1周，動物房溫度維持在18～25℃。

2 方法與結果

2.1 藥液的配制

取麩炒蒼術24 g，厚樸18 g，陳皮12 g，甘草6 g，四種藥材混合粉碎（過60目篩），將混合藥材粉末置于具1 L塞圓底燒瓶中，加入900 mL 95%乙醇密封浸泡48 h，超聲1 h，靜置1 h，再超聲1 h，取出，放至室溫后抽真空濾過，濾液經減壓旋蒸濃縮至干，將干膏用水充分溶解混勻成濃度為含生藥2 g/mL藥液，冷藏避光保存以備用。

2.2 樣品的采集及處理

隨機選取SD大鼠6只，禁食、自由飲水，24 h后，采用單次給藥法，眼眶后靜脈叢取血0.5 mL，然后灌胃給平胃散混懸液（50 g/kg）。分別于給藥后0.17，0.33，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12，24 h自眼眶后靜脈叢取血0.5 mL，置于用肝素預處理過的1.5 mL離心管中，10 000 r/min離心5 min，分離血漿，精密量取血漿樣品200μL，加入50μL大黃素甲醚內標溶液，渦旋混勻，再加入600μL乙腈沉淀蛋白，渦旋90 s，10 000 r/min離心5 min，取上清液，加入600μL氯仿，渦旋90 s，靜置40 min，保留氯仿層，40℃空氣流下吹干，加100μL甲醇復溶，取20μL進樣。

組織分布試驗中，將SD大鼠20只，隨機分成4組，每組5只。實驗前禁食24 h，自由飲水?？瞻捉M于給藥前處死，其余3組灌胃給予平胃散混懸液（50 g/kg），于2，3，8 h后處死，解剖采集心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸。用生理鹽水沖洗組織表面的血液和內容物，用濾紙吸干水分，精密稱取各組織樣品0.2 g，加入1 mL生理鹽水，勻漿處理。10 000 r/min離心5 min，取上清液200μL。加入25μL大黃素甲醚內標溶液，再加入600μL乙腈沉淀蛋白，渦旋90 s，10 000 r/min離心5 min，取上清液，加入600μL氯仿，渦旋90 s，靜置40 min，保留氯仿層，40℃空氣流下吹干，加100μL甲醇復溶，取20μL進樣。

2.3 色譜條件

色譜柱：Promosil-C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈-水（76∶24），流速：0.8 mL/min；檢測波長：340 nm；柱溫：25℃；進樣量：20μL。

在上述色譜條件下，空白血漿（A），空白血漿加蒼術素和內標大黃素甲醚（B），大鼠血漿樣品加內標大黃素甲醚（C）等HPLC色譜圖見圖1。流動相對蒼術素與內標大黃素甲醚的色譜峰得到良好分離，且不受內源性物質的干擾。

2.4 方法學考察

分別精密稱取蒼術素和大黃素甲醚對照品適量，甲醇配成質量濃度分別為5.00×10-4mg/L和6.90×10-5mg/L的儲備液。精密量取200μL大鼠空白血漿6份，加入蒼術素對照儲備液，配成含蒼術素分別為4.97，2.49，0.99，0.50，0.25，0.05mg/L的標準含藥血漿質控樣品，按血漿樣品處理方法操作后測定峰面積。以對蒼術素的濃度（X）為橫坐標，對蒼術素與大黃素甲醚內標峰面積比（Y）為縱坐標，用加權最小二乘法進行回歸計算，結果表明，蒼術素在0.057～4.970 mg/L范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=0.6013X-0.0004，r=0.9981。制備蒼術素濃度為0.05，0.99，4.97 mg/L的質控樣品的回收率分別為（87.53±1.75）%，（84.24±1.73）%，（87.65±2.73）%。日內精密度分別為（98.86±2.86）%，（98.54±1.74）%，（97.80±1.85）%，日間精密度（98.6±3.25）%，（98.6± 1.56）%，（97.9±4.12）%。在1 h（室溫）、24 h（室溫）、30 d（-20℃）條件下樣品濃度的RSD值在3.7%～4.0%之間，符合生物樣品分析方法的規定，樣品在上述四個條件下均穩定可測。

蒼術素在組織中的標準曲線和線性范圍分別是：Y心=1.471X-0.0858（r=0.9911），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y肝=2.4062X-0.050（r=0.9942），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y脾=1.8398X-0.0936（r=0.9972），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y肺=2.1673X-0.1376（r=0.9938），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y腎= 2.3735X-0.0684（r=0.9913），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y大腸=1.7886X-0.1082（r=0.9931），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y小腸=1.9305X-0.1358（r=0.9956），線性范圍為0.0996～9.9600 mg/L，Y胃= 2.0599X+0.0363（r=0.9948）。本試驗方法測定組織的日內精密度和日間精密度均RSD小于5%，準確度在85.0%～96.8%之間，在蒼術素濃度為0.0996，0.996，9.96μg/mL的質控樣品的回收率在82.3%～91.7%之間，RSD值在1.3%～4.3%之間，在1 h（室溫）、24 h（室溫）、30 d（-20℃）條件下組織樣品濃度的RSD值均小于5%，均符合生物樣品分析方法的規定，表明方法的可行性。

圖1 樣品HPLC色譜圖

2.5 結果

大鼠血漿中蒼術素的C-t曲線見圖2，數據用DAS 2.0數據處理軟件進行擬合處理，口服給藥后的藥物吸收符合非房室模型，主要藥代動力學參數見表1。大鼠口服平胃散混懸液后，蒼術素在大鼠體內的達峰時間Tmax為（2.5±0.5）h，最大濃度Cmax為1.764 mg/L，半衰期t1/2z為（5.723±1.316）h。

圖2 蒼術素在口服平胃散大鼠血漿中平均藥-時曲線（n=6）

大鼠各組織中蒼術素在2，3，8 h各組織分布見圖3。由結果可知，大鼠灌胃平胃散混懸液2 h時組織中蒼術素含量從高到低順序是：胃＞小腸＞脾＞肺＞大腸＞心＞腎＞肝，3 h時組織中蒼術素含量從高到低順序是：胃＞小腸＞脾＞肺＞心＞肝＞腎＞大腸，8 h時組織中蒼術素含量從高到低順序是：脾＞大腸＞胃＞小腸＞肝＞心＞肺＞腎。

3 討論

平胃散作為治療濕困脾胃證的中藥復方的基礎，在臨床廣泛應用，目前相關報道多為臨床和藥效學應用研究，未有相關藥代動力學方面的研究報道[5-8]。蒼術素屬聚乙烯炔類成分，為君藥蒼術的特征性成分，也是活性成分之一。有相關研究表明蒼術素具有抗炎、利膽，防止胃損傷等作用[9-12]，故選用蒼術素為測定指標，而蒼術素醇、蒼術素等聚乙烯炔類成分不穩定，在光照條件下易發生空間構型變化，生成異構體[13]，所以在整個實驗和貯存過程中，要盡量避光處理。在沉淀蛋白的溶劑選擇過程中，分別考察了3倍勻漿體積的甲醇和乙腈，結果用乙腈沉淀蛋白較完全，而且對內標物質及待測物質的測定均無干擾，故最終選擇乙腈沉蛋白法。

表1 蒼術素在口服平胃散大鼠的藥代動力學統計矩參數（x±s，n=6）

圖3 蒼術素在口服平胃散大鼠各組織分布（x±s，n=5）

本實驗擬選用蒽醌類化合物大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等為內標，分別按血漿樣品處理方法操作及測定，結果大黃素的保留時間為10.3 min，易被相鄰的峰干擾，而大黃酚極性較小，保留時間過長，故最終選用無內源性物質干擾，與待測成分分離度良好，保留時間適中的大黃素甲醚為內標化合物。

本實驗曾分別以50%、80%、95%乙醇作為藥物提取溶劑，采用相同的提取方法并定容到含生藥量0.2 g/mL的藥液，采用反相高效液相色譜法，測定各溶液中蒼術素的含量，結果其濃度以95%的乙醇液提取蒼術素含量最高，故選用95%乙醇為提取溶劑。

藥代動力學數據結果表明，口服給藥后的藥物吸收符合非房室模型，由藥時曲線可以看出，蒼術素在6 h左右時第2次達峰，出現雙峰現象。推測原因可能是由于蒼術素在大鼠體內的吸收存在肝腸循環。大鼠組織分布測定結果表明，蒼術素在心、肝、脾、肺、腎、大腸、小腸、胃等組織中均有分布，說明蒼術素在大鼠體內分布比較廣泛，在口服給藥后2 h時，胃和小腸中蒼術素含量很高，說明其為蒼術素的主要吸收器官，經血液循環系統分布到其他各器官，說明此時主要進行吸收和分布過程；3 h時蒼術素在小腸和胃中含量降低，除大腸外其他組織中蒼術素含量均有上升，說明此時主要進行分布過程，8 h時，蒼術素在大腸中含量明顯上升，在脾、肺、腎等組織中含量下降，推測此時主要進行排泄過程。但在肝和心組織中含量無下降趨勢，說明部分蒼術素在肝中進行生物轉化。

[1]李飛.方劑學[M].北京：人民衛生出版社，2002：1564.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：150-151.

[3]南洋，賈凌云，李倩，等.RP-HPLC法同時測定蒼術中蒼術素和白術內酯Ⅱ的含量[J].藥物分析雜志，2010，30（1）：17-20.

[4]Yushi Zhang，Zhimin Wang，Jingjing Zhu，etal.Determination of Atractylodin in Rat Plasma by HPLC-UV Method and Its Application to a Pharmacokinetic Study[J].Journal of Liquid Chromatography&Related Technologies，2012，35：778-787.

[5]段彬，張建強，陳明，等.平胃散及其組方藥材水煎液對大鼠胃排空的影響[J].蘭州大學學報，2013，39（1）：20-22.

[6]張曉丹，黃秀深，楊成，等.濕阻中焦證模型大鼠胃腸水通道蛋白3（AQP3）的病理特征性表達分布譜以及平胃散干預的研究[J].遼寧中醫雜志，2012，39（12）：2500-2503.

[7]陳繼蘭，黃秀深，曾躍琴，等.平胃散調控濕困脾胃證大鼠腸道能量代謝的實驗研究[J].山西中醫學院學報，2012，13（3）：27-29.

[8]王丹鳳，劉玉強，才謙.蒼術麩炒前后健脾作用研究[J].時珍國醫國藥，2013，24（1）：155-156.

[9]Resch M，Heilmann J，Steigel A，et al.Further phenols and polyacetylenes from the rhizomes of Atractylodes lancea and their anti-inflammatory activity[J].Planta Med，2001，67（5）：437-442.

[10]Resch M，Steigel A，Chen ZL，et al.5-lipoxygenase and cyclooxygenase-1 inhibitory active compounds from A-tractylodes lancea[J].J Nat Prod，1998，61（3）：347-350.

[11]Yi XZ，Pu Z，Wang BM.Antifungal Effect of Traditional Chinese Medicine Rhizoma Atractylodis and Clinical Outlook[J].Beihua Univ，2002，1：492-493.

[12]Zhu HJ，Zhang HY，Ma YL，etal.Protective EffectofRhizoma Atractylodison MyocardialIschemia and Ischemia-Reperfusion Injury in Rats[J].TradiMed SciTech，2000，7：173-174.

[13]黃琦，陳炎銘，侴貴新，等.蒼術化學指紋圖譜建立及其穩定性研究[J].上海中醫藥雜志，2012，46（10）：76-78.

Determination of Atractylodin of Pingwei Powder in rat plasma by HPLC-UV method and their application to a pharmacokinetic and a tissue distribution study

LI Guyue1,2LIU Jiaxin1,2CAI Qian3
1.The First Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang 110000,China;2.Pharmacy College of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang 110000,China;3.Pharmacy College of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Dalian 116600,China

ObjectiveTo study the blood concentration and tissue distribution of Atractylodin after oral administration of Pingwei Powder to rats.MethodsThe determination methods of Atractylodin in Pingwei Powder in rat plasma was established by HPLC,the blood concentration of Atractylodin after oral administration of Pingwei Powder at 0.17,0.33, 0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,6.0,8.0,12,24 h and tissue distribution in rats at 2,3,8 h were examined,the data was dealt with DAS 2.0 data processing software to calculate the pharmacokinetics parameters.ResultsAfter oral administration of Pingwei Powder,the Tmaxwas 2.5 h,Cmaxwas 1.765 mg/L,t1/2zwas 5.723 h,AUC was 11.789 mg/L·h.The second peak was appeared at 6 h.After oral administration of Pingwei Powder,Atractylodin was quickly distributed to main organs with the concentration difference,stomach>small intestine,spleen>liver,lung,heart>kidney,large intestine.ConclusionThis paper has developed a simple,specific,and rapid method of RP-HPLC with UV detection to determine Atractylodin of Pingwei Powder in ratplasma.

Pingwei Powder;Atractylodin;Pharmacokinetics;Tissuces distribution;HPLC

R285

A

1673-7210（2014）03（b）-0019-04

2013-10-12本文編輯：衛軻）

國家自然科學基金資助項目（編號81202919）；國家中醫藥管理局中醫藥行業科研專項項目（編號20110700 712）。