腎福康膠囊對慢性腎功能衰竭模型大鼠的抗氧化作用研究

蔣 霞 陸 華▲ 程 娜 張洪啟

1.廣西醫科大學第一附屬醫院藥學部，廣西南寧530021；2.桂林醫學院藥學院，廣西桂林541001

腎福康膠囊對慢性腎功能衰竭模型大鼠的抗氧化作用研究

蔣 霞1陸 華1▲程 娜2張洪啟2

1.廣西醫科大學第一附屬醫院藥學部，廣西南寧530021；2.桂林醫學院藥學院，廣西桂林541001

目的探討腎福康膠囊對慢性腎功能衰竭（CRF）模型大鼠的抗氧化作用。方法取健康雄性SD大鼠70只，造模前取尾靜脈血，分離血清，進行尿素氮（BUN）含量測定，按BUN水平均衡，隨機分為空白組、模型組、陽性對照組及腎福康低、中、高劑量組，每組10只大鼠。模型組、陽性對照組及腎福康低、中、高劑量組采用灌服腺嘌呤致大鼠CRF模型，同時腎福康組連續給大鼠灌胃腎福康膠囊40 d，分別按低、中、高劑量[0.225、0.45、0.9 g生藥/（kg·d）]進行給藥；陽性對照組給予灌胃尿毒清顆粒[6.7g/（kg·d））]共40 d。造模后12、24 d測定各組大鼠血清BUN、血清肌酐（SCr）含量；造模后第40天測定各組大鼠心、腎臟組織勻漿中超氧化物岐化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量。結果模型組大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織勻漿中MDA含量明顯高于空白組，SOD含量較空白組顯著性降低（均P<0.01）。陽性對照組、腎福康中、高劑量組與模型組比較，能顯著降低大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織中MDA含量（P<0.05），明顯增加心、腎組織勻漿液中SOD含量（P<0.05）。各劑量組間比較，腎福康中、高劑量組在降低大鼠血清BUN、SCr含量，升高腎組織勻漿中SOD含量方面與腎福康低劑量組比較有顯著性優勢（P<0.05）。結論腎福康膠囊具有抗氧化作用，能有效保護CRF大鼠心、腎等重要器官。

腎福康膠囊；慢性腎衰竭；抗氧化

腎福康膠囊為廣西醫科大學第一附屬醫院在多年治療腎臟疾病的臨床經驗基礎上研制而成的復方中藥制劑[桂衛藥制字（1999）001250]，由黃芪、大黃等藥組成，對慢性腎功能不全、氮質血癥期、尿毒癥有一定的療效。本課題組擬研究腎福康膠囊對慢性腎功能衰竭大鼠心、腎組織勻漿中超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA））含量的影響，探討腎福康抗氧化作用，為該藥的深入研究與臨床應用提供理論依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DU600型貝克曼紫外分光光度計（德國），RA-50半自動化分析儀（日本），FJ-200高速分散勻質機（上海），HH-0600電熱恒溫水浴箱（上海）。

1.2 試劑

腎福康膠囊（廣西醫科大學第一附屬醫院制劑室，批號：20090416），尿毒清顆粒（康臣藥業有限公司，批號：20081209），維生素B4（江蘇晨牌藥業有限公司，批號：081015），血尿素氮（BUN）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20090530），超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20090720），丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：2009 0426），肌酐（Cr）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20090612）。

1.3 動物

（250±20）g雄性SD大鼠70只由廣西醫科大學動物中心提供，動物飼養合格證號：SCXK桂2003-0003。

2 方法

2.1 分組與造模[1]

健康雄性SD大鼠70只，造模前取尾靜脈血，分離血清，進行BUN含量測定，按BUN水平均衡，隨機分為空白組、模型組、陽性對照組及腎福康低、中、高劑量組，每組10只大鼠。模型組、陽性對照組（尿毒清組）及腎福康低、中、高劑量組給予灌服200 mg/（kg·d）腺嘌呤24 d，從第1～12天，每天1次，第12天后隔日1次，復制人類慢性腎功能衰竭模型。空白組不做任何處理。

2.2 給藥方法

制備腎福康膠囊水溶液，按腎福康低、中、高劑量組（0.225、0.45、0.9 g生藥/kg，按公斤體重計算相當于臨床人用量2.7 g生藥/d的5、10、20倍）進行灌胃給藥；尿毒清組灌胃給予尿毒清顆粒6.7 g/kg。模型組、空白組給予等容量的蒸餾水1 mL/100 g。造模同時按劑量灌胃給藥，共計給藥40 d。

2.3 檢測指標與方法

分別于造模第12、24天從大鼠尾部靜脈取血3 mL，經高速低溫離心（3000 r/min，15 min）分離血清，用全自動生化分析儀檢測血清中BUN、SCr的含量。灌服給藥40 d，于末次給藥后，斷頭處死大鼠，立即取出心臟、腎制備組織勻漿，制成1%和10%的濃度，取上清液，分別測定SOD、MDA含量，具體步驟按照各試劑盒說明書進行操作。

2.4 統計學方法

采用SPSS 13.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 動物死亡情況

造模第12天，除空白組無動物死亡外，其余各組均有死亡，模型組、尿毒清組、腎福康低、中、高劑量組動物死亡數分別為4、2、3、1、2只；至實驗結束，模型組、尿毒清組、腎福康低、中、高劑量組動物死亡數分別為5、2、3、1、2只，模型組死亡動物數最多。

3.2 腎福康膠囊對大鼠血清中BUN、SCr含量的影響

造模12、24 d后，模型組與空白組比較，大鼠血清BUN、SCr含量均有顯著性升高（P＜0.01）；尿毒清組及腎福康中、高劑量組血清BUN、SCr水平較模型組顯著降低（P＜0.05）；腎福康低劑量組血清BUN、SCr與模型組比較有下降趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05）。尿毒清組、腎福康高劑量組降低BUN、SCr作用與低劑量組比較差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3.3 腎福康膠囊對大鼠心、腎組織勻漿中SOD、MDA含量的影響

模型組與空白組比較，心、腎組織中SOD含量顯著降低（P＜0.05），MDA含量明顯升高（P＜0.05）。尿毒清組、腎福康中、高劑量組與模型組比較，顯著升高慢性腎衰竭大鼠心、腎組織勻漿中SOD含量，降低MDA含量（均P＜0.05）。腎福康低劑量組與模型組比較有一定的作用趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05）。腎福康中、高劑量組在升高大鼠腎組織勻漿中SOD含量方面較低劑量組差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表1 腎福康膠囊對各組大鼠血清BUN、SCr含量的影響（x±s）

4 討論

自由基是人體正常生化過程的中間產物，機體在進化過程中獲得了滅活氧自由基的一些酶，如超氧化物歧化酶。當自由基產生過多或者機體內的酶系統過少時可導致疾病的發生。現代研究表明，慢性腎功能衰竭患者存在明顯的氧化應激，從而加劇了慢性腎功能衰竭患者的病情及其并發癥的發生[2-4]。Singh等[5]認為活性氧（ROS）在腎臟疾病的病理生理過程中起著關鍵作用，氧化應激狀態時體內ROS明顯增加，抗氧化劑顯著減少，導致氧化與抗氧化動態平衡被破壞，介導了細胞的損傷。Terawaki等[6]經臨床研究發現，氧化應激還加重了慢性腎功能衰竭患者的腎功能不全，氧化應激是加劇慢性腎功能衰竭患者病情進展及促進某些并發癥發生的一個重要因素。清除或使用飲食、抗氧化藥物純化ROS可減輕、預防氧化應激，從而減輕、抑制由此導致的腎臟損傷[7]。

表2 腎福康膠囊對大鼠心、腎組織勻漿中SOD、MDA含量的影響（x±s）

腎福康膠囊由大黃、黃芪等藥組成。方中大黃治療慢性腎功能衰竭的作用已被廣泛認可，它不僅能“活血祛瘀、泄濁解毒”，同時也有“推陳致新，通利水谷，調中化食，安和五臟”的作用。現代藥理研究發現，大黃能提高血清蛋白，降低膽固醇、三酰甘油水平而調整脂質代謝；改善氮質血癥，抑制殘余腎單位代償性肥大，降低殘余腎高代謝狀態，減少蛋白尿，并糾正鈣、磷代謝紊亂[8]。抑制腎小管上皮細胞肥大和增殖，降低細胞的高代謝狀態可能是大黃治療慢性腎功能衰竭的主要機制之一[9]。腎小管高代謝學說認為，慢性腎功能衰竭時殘余腎單位高濾過狀態促使ATP利用及線粒體耗氧增加，氧自由基（OFR）產生過多，最終導致膜脂質過氧化，腎小管間質受損[10]。鄭敏麟等[11]發現，大黃提純物可抑制腎切除5/6大鼠腎小管上皮細胞線粒體嵴型腫脹，提示其可通過抑制腎小管的高代謝，提高線粒體氧化磷酸化效率，有效減緩腎硬化進程。方中另一主藥黃芪能補氣升陽，固表止汗，利水消腫，具有顯著的免疫調節活性和抗氧化作用。研究表明，黃芪可減輕尿蛋白和腎臟病理改變，其作用機制可能為通過降低氧自由基生成或直接使其失活，并減輕脂質過氧化對腎臟的損害[12]。戴芹等[13]研究了黃芪對慢性腎功能衰竭大鼠的抗氧化作用，結果顯示黃芪能顯著升高SOD活性而清除氧自由基，從而減輕氧自由基對腎臟細胞的損傷，同時黃芪能夠減少MDA含量，具有明顯的抗氧化作用。

中醫的“心腎相關”理論認為，腎與心臟有密切聯系，腎病日久必然要累及心臟。清·陳士鐸《石室秘錄》中指出“治心之所以治腎，而治腎之所以治心”。《石室秘錄評述·本治法》對這一心腎相關治療學理論做了具體化評述，并歸納為“安心當治腎，治腎當治心”。這種“心腎相關”的治療學理論為慢性腎功能衰竭心臟病變的治療提供了理論依據。大量報道認為[14]，中醫藥的各類單方和復方均能有效降低BUN、SCr水平，具有提高內生肌酐清除率，改善貧血，改善血脂，抗組織纖維化等功效，與目前現代醫學以改善引發慢性腎功能衰竭心臟病變的危險因素的治療策略不謀而合。本實驗同時研究了腎福康膠囊對慢性腎衰竭模型大鼠心、腎組織中SOD、MDA含量的影響，結果顯示，模型組大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織勻漿中MDA含量明顯高于空白組，SOD含量較空白組顯著性降低（均P<0.05）。尿毒清組、腎福康中、高劑量組較模型組比較能顯著降低大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織中MDA含量（P<0.05），明顯增加心、腎組織勻漿液中SOD含量（P<0.05）。各劑量組間比較，腎福康中、高劑量組在降低大鼠血清BUN、SCr含量，升高腎組織勻漿中SOD含量方面有顯著性優勢（P<0.05）。腎福康低劑量組血清BUN、SCr水平與模型組比較有下降趨勢，對升高心、腎組織中SOD含量，降低MDA含量的影響呈現了一定的作用趨勢。表明腎福康膠囊對慢性腎衰模型大鼠心腎有一定的保護和治療作用。

綜上所述，腎福康膠囊可降低BUN、SCr水平，通過降低腎臟的毒性物質而阻止部分氧自由基的產生，同時可顯著升高大鼠心、腎組織中SOD含量，降低MDA含量，提高機體的抗氧化能力，減輕自由基對腎小球的損害，從而改善腎功能。

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Anti-oxidation effects of Shenfukang Capsule for rats with chronic renal failure

JIANG Xia1LU Hua1▲CHENG Na2ZHANG Hongqi2
1.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530021,China;2.College of Pharmacy,Guilin Medical University,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Guilin 541001,China

Shenfukang Capsule;Chronic renal failure;Anti-oxidation

R285.5

A

1673-7210（2014）03（b）-0031-04

2013-12-12本文編輯：程銘）

廣西壯族自治區衛生廳自籌經費科研課題（編號Z2008135）；廣西壯族自治區中醫藥民族醫藥自籌經費科研課題（編號GZZC13-17）。

▲通訊作者

[Absract]ObjectiveTo observe the anti-oxidation effects of Shenfukang Capsule for rats with chronic renal failure (CRF).Methods70 SD rats were randomly divided into blank,disease model,positive control and ShenFukang lowdose,middle-dose and high-dose treatment groups according to the levels of blood urea nitrogen(BUN),each gourp had 10 rats.All groups were fed with adenine to induce CRF model besides blank group.ShenFukang low-dose,middle-dose and high-dose treatment groups were administered according to the dose of 0.225,0.45,0.9 g/(kg·d)respectively for 40 days.Positive control group were given NiaoDuqing Granules according to the dose of 6.7 g/(kg·d)for 40 days.The levels of BUN,serum creatinine(SCr)of all groups after molding of 12 days and 24 days were detected,and the contents of superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde(MDA)in heart and kidney after molding of 40 days were detected.ResultsCompared with blank group,the levels of BUN,SCr,MDA in heart and kidney in model group were obviously higher,while the activities of SOD were obviously lower(all P<0.01).The levels of BUN,SCr,MDA in heart and kidney in positive control group,Shenfukang middle-dose and high-dose treatment groups were obviously lower,the activities of SOD were obviously higher compared with model group（all P<0.05).The effect of lower BUN, SCr levels and higher SOD activities in Shenfukang middle-dose and high-dose treatment groups were more significant than in Shenfukang low-dose treatment group(P<0.05).ConclusionShenfukang Capsule has the ability of anti-oxidation,can protect important organs such as heart,kidney of rats with CRF.