腎福康膠囊對(duì)慢性腎功能衰竭模型大鼠的抗氧化作用研究

蔣 霞 陸 華▲ 程 娜 張洪啟

1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣西南寧530021；2.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林541001

腎福康膠囊對(duì)慢性腎功能衰竭模型大鼠的抗氧化作用研究

蔣 霞1陸 華1▲程 娜2張洪啟2

1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣西南寧530021；2.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林541001

目的探討腎福康膠囊對(duì)慢性腎功能衰竭（CRF）模型大鼠的抗氧化作用。方法取健康雄性SD大鼠70只，造模前取尾靜脈血，分離血清，進(jìn)行尿素氮（BUN）含量測(cè)定，按BUN水平均衡，隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及腎福康低、中、高劑量組，每組10只大鼠。模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及腎福康低、中、高劑量組采用灌服腺嘌呤致大鼠CRF模型，同時(shí)腎福康組連續(xù)給大鼠灌胃腎福康膠囊40 d，分別按低、中、高劑量[0.225、0.45、0.9 g生藥/（kg·d）]進(jìn)行給藥；陽(yáng)性對(duì)照組給予灌胃尿毒清顆粒[6.7g/（kg·d））]共40 d。造模后12、24 d測(cè)定各組大鼠血清BUN、血清肌酐（SCr）含量；造模后第40天測(cè)定各組大鼠心、腎臟組織勻漿中超氧化物岐化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量。結(jié)果模型組大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織勻漿中MDA含量明顯高于空白組，SOD含量較空白組顯著性降低（均P<0.01）。陽(yáng)性對(duì)照組、腎福康中、高劑量組與模型組比較，能顯著降低大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織中MDA含量（P<0.05），明顯增加心、腎組織勻漿液中SOD含量（P<0.05）。各劑量組間比較，腎福康中、高劑量組在降低大鼠血清BUN、SCr含量，升高腎組織勻漿中SOD含量方面與腎福康低劑量組比較有顯著性?xún)?yōu)勢(shì)（P<0.05）。結(jié)論腎福康膠囊具有抗氧化作用，能有效保護(hù)CRF大鼠心、腎等重要器官。

腎福康膠囊；慢性腎衰竭；抗氧化

腎福康膠囊為廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院在多年治療腎臟疾病的臨床經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上研制而成的復(fù)方中藥制劑[桂衛(wèi)藥制字（1999）001250]，由黃芪、大黃等藥組成，對(duì)慢性腎功能不全、氮質(zhì)血癥期、尿毒癥有一定的療效。本課題組擬研究腎福康膠囊對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠心、腎組織勻漿中超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA））含量的影響，探討腎福康抗氧化作用，為該藥的深入研究與臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DU600型貝克曼紫外分光光度計(jì)（德國(guó)），RA-50半自動(dòng)化分析儀（日本），F(xiàn)J-200高速分散勻質(zhì)機(jī)（上海），HH-0600電熱恒溫水浴箱（上海）。

1.2 試劑

腎福康膠囊（廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20090416），尿毒清顆粒（康臣藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20081209），維生素B4（江蘇晨牌藥業(yè)有限公司，批號(hào)：081015），血尿素氮（BUN）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20090530），超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20090720），丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：2009 0426），肌酐（Cr）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20090612）。

1.3 動(dòng)物

（250±20）g雄性SD大鼠70只由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物飼養(yǎng)合格證號(hào)：SCXK桂2003-0003。

2 方法

2.1 分組與造模[1]

健康雄性SD大鼠70只，造模前取尾靜脈血，分離血清，進(jìn)行BUN含量測(cè)定，按BUN水平均衡，隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及腎福康低、中、高劑量組，每組10只大鼠。模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（尿毒清組）及腎福康低、中、高劑量組給予灌服200 mg/（kg·d）腺嘌呤24 d，從第1～12天，每天1次，第12天后隔日1次，復(fù)制人類(lèi)慢性腎功能衰竭模型。空白組不做任何處理。

2.2 給藥方法

制備腎福康膠囊水溶液，按腎福康低、中、高劑量組（0.225、0.45、0.9 g生藥/kg，按公斤體重計(jì)算相當(dāng)于臨床人用量2.7 g生藥/d的5、10、20倍）進(jìn)行灌胃給藥；尿毒清組灌胃給予尿毒清顆粒6.7 g/kg。模型組、空白組給予等容量的蒸餾水1 mL/100 g。造模同時(shí)按劑量灌胃給藥，共計(jì)給藥40 d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

分別于造模第12、24天從大鼠尾部靜脈取血3 mL，經(jīng)高速低溫離心（3000 r/min，15 min）分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中BUN、SCr的含量。灌服給藥40 d，于末次給藥后，斷頭處死大鼠，立即取出心臟、腎制備組織勻漿，制成1%和10%的濃度，取上清液，分別測(cè)定SOD、MDA含量，具體步驟按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 動(dòng)物死亡情況

造模第12天，除空白組無(wú)動(dòng)物死亡外，其余各組均有死亡，模型組、尿毒清組、腎福康低、中、高劑量組動(dòng)物死亡數(shù)分別為4、2、3、1、2只；至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，模型組、尿毒清組、腎福康低、中、高劑量組動(dòng)物死亡數(shù)分別為5、2、3、1、2只，模型組死亡動(dòng)物數(shù)最多。

3.2 腎福康膠囊對(duì)大鼠血清中BUN、SCr含量的影響

造模12、24 d后，模型組與空白組比較，大鼠血清BUN、SCr含量均有顯著性升高（P＜0.01）；尿毒清組及腎福康中、高劑量組血清BUN、SCr水平較模型組顯著降低（P＜0.05）；腎福康低劑量組血清BUN、SCr與模型組比較有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。尿毒清組、腎福康高劑量組降低BUN、SCr作用與低劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

3.3 腎福康膠囊對(duì)大鼠心、腎組織勻漿中SOD、MDA含量的影響

模型組與空白組比較，心、腎組織中SOD含量顯著降低（P＜0.05），MDA含量明顯升高（P＜0.05）。尿毒清組、腎福康中、高劑量組與模型組比較，顯著升高慢性腎衰竭大鼠心、腎組織勻漿中SOD含量，降低MDA含量（均P＜0.05）。腎福康低劑量組與模型組比較有一定的作用趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。腎福康中、高劑量組在升高大鼠腎組織勻漿中SOD含量方面較低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表1 腎福康膠囊對(duì)各組大鼠血清BUN、SCr含量的影響（x±s）

4 討論

自由基是人體正常生化過(guò)程的中間產(chǎn)物，機(jī)體在進(jìn)化過(guò)程中獲得了滅活氧自由基的一些酶，如超氧化物歧化酶。當(dāng)自由基產(chǎn)生過(guò)多或者機(jī)體內(nèi)的酶系統(tǒng)過(guò)少時(shí)可導(dǎo)致疾病的發(fā)生。現(xiàn)代研究表明，慢性腎功能衰竭患者存在明顯的氧化應(yīng)激，從而加劇了慢性腎功能衰竭患者的病情及其并發(fā)癥的發(fā)生[2-4]。Singh等[5]認(rèn)為活性氧（ROS）在腎臟疾病的病理生理過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)體內(nèi)ROS明顯增加，抗氧化劑顯著減少，導(dǎo)致氧化與抗氧化動(dòng)態(tài)平衡被破壞，介導(dǎo)了細(xì)胞的損傷。Terawaki等[6]經(jīng)臨床研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激還加重了慢性腎功能衰竭患者的腎功能不全，氧化應(yīng)激是加劇慢性腎功能衰竭患者病情進(jìn)展及促進(jìn)某些并發(fā)癥發(fā)生的一個(gè)重要因素。清除或使用飲食、抗氧化藥物純化ROS可減輕、預(yù)防氧化應(yīng)激，從而減輕、抑制由此導(dǎo)致的腎臟損傷[7]。

表2 腎福康膠囊對(duì)大鼠心、腎組織勻漿中SOD、MDA含量的影響（x±s）

腎福康膠囊由大黃、黃芪等藥組成。方中大黃治療慢性腎功能衰竭的作用已被廣泛認(rèn)可，它不僅能“活血祛瘀、泄?jié)峤舛尽保瑫r(shí)也有“推陳致新，通利水谷，調(diào)中化食，安和五臟”的作用。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，大黃能提高血清蛋白，降低膽固醇、三酰甘油水平而調(diào)整脂質(zhì)代謝；改善氮質(zhì)血癥，抑制殘余腎單位代償性肥大，降低殘余腎高代謝狀態(tài)，減少蛋白尿，并糾正鈣、磷代謝紊亂[8]。抑制腎小管上皮細(xì)胞肥大和增殖，降低細(xì)胞的高代謝狀態(tài)可能是大黃治療慢性腎功能衰竭的主要機(jī)制之一[9]。腎小管高代謝學(xué)說(shuō)認(rèn)為，慢性腎功能衰竭時(shí)殘余腎單位高濾過(guò)狀態(tài)促使ATP利用及線粒體耗氧增加，氧自由基（OFR）產(chǎn)生過(guò)多，最終導(dǎo)致膜脂質(zhì)過(guò)氧化，腎小管間質(zhì)受損[10]。鄭敏麟等[11]發(fā)現(xiàn)，大黃提純物可抑制腎切除5/6大鼠腎小管上皮細(xì)胞線粒體嵴型腫脹，提示其可通過(guò)抑制腎小管的高代謝，提高線粒體氧化磷酸化效率，有效減緩腎硬化進(jìn)程。方中另一主藥黃芪能補(bǔ)氣升陽(yáng)，固表止汗，利水消腫，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)活性和抗氧化作用。研究表明，黃芪可減輕尿蛋白和腎臟病理改變，其作用機(jī)制可能為通過(guò)降低氧自由基生成或直接使其失活，并減輕脂質(zhì)過(guò)氧化對(duì)腎臟的損害[12]。戴芹等[13]研究了黃芪對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠的抗氧化作用，結(jié)果顯示黃芪能顯著升高SOD活性而清除氧自由基，從而減輕氧自由基對(duì)腎臟細(xì)胞的損傷，同時(shí)黃芪能夠減少M(fèi)DA含量，具有明顯的抗氧化作用。

中醫(yī)的“心腎相關(guān)”理論認(rèn)為，腎與心臟有密切聯(lián)系，腎病日久必然要累及心臟。清·陳士鐸《石室秘錄》中指出“治心之所以治腎，而治腎之所以治心”。《石室秘錄評(píng)述·本治法》對(duì)這一心腎相關(guān)治療學(xué)理論做了具體化評(píng)述，并歸納為“安心當(dāng)治腎，治腎當(dāng)治心”。這種“心腎相關(guān)”的治療學(xué)理論為慢性腎功能衰竭心臟病變的治療提供了理論依據(jù)。大量報(bào)道認(rèn)為[14]，中醫(yī)藥的各類(lèi)單方和復(fù)方均能有效降低BUN、SCr水平，具有提高內(nèi)生肌酐清除率，改善貧血，改善血脂，抗組織纖維化等功效，與目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)以改善引發(fā)慢性腎功能衰竭心臟病變的危險(xiǎn)因素的治療策略不謀而合。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)研究了腎福康膠囊對(duì)慢性腎衰竭模型大鼠心、腎組織中SOD、MDA含量的影響，結(jié)果顯示，模型組大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織勻漿中MDA含量明顯高于空白組，SOD含量較空白組顯著性降低（均P<0.05）。尿毒清組、腎福康中、高劑量組較模型組比較能顯著降低大鼠血清BUN、SCr及心、腎組織中MDA含量（P<0.05），明顯增加心、腎組織勻漿液中SOD含量（P<0.05）。各劑量組間比較，腎福康中、高劑量組在降低大鼠血清BUN、SCr含量，升高腎組織勻漿中SOD含量方面有顯著性?xún)?yōu)勢(shì)（P<0.05）。腎福康低劑量組血清BUN、SCr水平與模型組比較有下降趨勢(shì)，對(duì)升高心、腎組織中SOD含量，降低MDA含量的影響呈現(xiàn)了一定的作用趨勢(shì)。表明腎福康膠囊對(duì)慢性腎衰模型大鼠心腎有一定的保護(hù)和治療作用。

綜上所述，腎福康膠囊可降低BUN、SCr水平，通過(guò)降低腎臟的毒性物質(zhì)而阻止部分氧自由基的產(chǎn)生，同時(shí)可顯著升高大鼠心、腎組織中SOD含量，降低MDA含量，提高機(jī)體的抗氧化能力，減輕自由基對(duì)腎小球的損害，從而改善腎功能。

[1]胡安康，朱孝榮，袁紅花.慢性腎衰竭大鼠模型的建立[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2011，19（1）：34-38.

[2]Ben-Zvi I，Green Y，Nakhoul F，et al.Effects of diabetes mellitus，chronic renal failure and hemodialysis on serum and Salivary antioxidantstatus[J].Nephron Clin Praet，2007，105（3）：114-120.

[3]Singh PA，Bobby Z，Selvaraj N，et al.An evaluation ofthyroid hormone status and oxidative stress in undialyzed chronic renalfailure patients[J].Indian JPhysiolPharmacol，2006，50（3）：279-284.

[4]張新，彭力人，趙素梅.尿毒癥患者腎性貧血對(duì)氧化應(yīng)激的影響[J].中國(guó)血液凈化，2004，3（8）：426-430.

[5]Singh D，Kaur R，Chander V，et al.Antioxidants in the prevention of renal disease[J].J Med Food，2006，9（4）：443-450.

[6]Terawaki H，Yoshimura K，Hasegawa T，etal.Oxidative stress is enhanced in correlation with renal dysfunction：examination with the redox state of albumin[J].Kidney Int，2004，66（5）：988-1993.

[7]Cottone S，Palermo A，Vaccaro F，et al.Oxidative stress and inflammation in long-term renal transplanted hypertensives[J].Clin Nephrol，2006，66（1）：32-38.

[8]楊俊偉.大黃對(duì)大鼠5/6腎切除后殘余腎功能的保護(hù)作用：離體腎灌注的研究[J].金陵醫(yī)院學(xué)報(bào)，1991（4）：397-400.

[9]鄭豐，黎磊石.大黃對(duì)腎小管細(xì)胞增殖的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，1993，73（6）：34.

[10]袁發(fā)煥，廖立生.慢性腎衰大鼠殘腎血流量和氧自由基改變及意義[J].中華腎臟病雜志，1995，11（3）：144.

[11]鄭敏麟，阮詩(shī)瑋，張文光，等.腎切除5/6大鼠腎小管線粒體自由基與腎病理的相關(guān)性研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2004，22（8）：1443.

[12]施輝，錢(qián)桐蓀，蔣季杰，等.補(bǔ)腎活血湯、黃芪治療大鼠阿霉素腎病的研究[J].南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，16（4）：503-505.

[13]戴芹，曲小璐，湯家銘，等.黃芪對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠抗氧化作用的研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2009，16（4）：223-224.

[14]楊雪軍，何立群.慢性腎功能衰竭心臟病變的研究進(jìn)展[J].上海中醫(yī)藥雜志，2005，39（12）：58-59.

Anti-oxidation effects of Shenfukang Capsule for rats with chronic renal failure

JIANG Xia1LU Hua1▲CHENG Na2ZHANG Hongqi2
1.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530021,China;2.College of Pharmacy,Guilin Medical University,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Guilin 541001,China

Shenfukang Capsule;Chronic renal failure;Anti-oxidation

R285.5

A

1673-7210（2014）03（b）-0031-04

2013-12-12本文編輯：程銘）

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題（編號(hào)Z2008135）；廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥民族醫(yī)藥自籌經(jīng)費(fèi)科研課題（編號(hào)GZZC13-17）。

▲通訊作者

[Absract]ObjectiveTo observe the anti-oxidation effects of Shenfukang Capsule for rats with chronic renal failure (CRF).Methods70 SD rats were randomly divided into blank,disease model,positive control and ShenFukang lowdose,middle-dose and high-dose treatment groups according to the levels of blood urea nitrogen(BUN),each gourp had 10 rats.All groups were fed with adenine to induce CRF model besides blank group.ShenFukang low-dose,middle-dose and high-dose treatment groups were administered according to the dose of 0.225,0.45,0.9 g/(kg·d)respectively for 40 days.Positive control group were given NiaoDuqing Granules according to the dose of 6.7 g/(kg·d)for 40 days.The levels of BUN,serum creatinine(SCr)of all groups after molding of 12 days and 24 days were detected,and the contents of superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde(MDA)in heart and kidney after molding of 40 days were detected.ResultsCompared with blank group,the levels of BUN,SCr,MDA in heart and kidney in model group were obviously higher,while the activities of SOD were obviously lower(all P<0.01).The levels of BUN,SCr,MDA in heart and kidney in positive control group,Shenfukang middle-dose and high-dose treatment groups were obviously lower,the activities of SOD were obviously higher compared with model group（all P<0.05).The effect of lower BUN, SCr levels and higher SOD activities in Shenfukang middle-dose and high-dose treatment groups were more significant than in Shenfukang low-dose treatment group(P<0.05).ConclusionShenfukang Capsule has the ability of anti-oxidation,can protect important organs such as heart,kidney of rats with CRF.