重組溶葡萄球菌酶對(duì)奶牛隱性乳房炎的治療試驗(yàn)

關(guān)文怡 李桂伶 （北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 北京 房山 102442）

郭海龍 （北京市房山區(qū)農(nóng)業(yè)局）

奶牛乳房炎是奶牛群體中常見的高發(fā)病癥之一，其直接影響著奶牛的泌乳量及乳汁的質(zhì)量。在奶牛乳房炎病例中，隱性乳房炎更加普遍，占發(fā)病總數(shù)的75%～ 95%，由于患隱性乳房炎的牛乳房并不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，乳汁肉眼觀察也很難發(fā)現(xiàn)明顯的異常，因此，奶牛隱性乳房炎在臨床上不易發(fā)現(xiàn)，只能通過檢測(cè)才能確診，因而不能引起畜主的足夠重視，給奶牛生產(chǎn)帶來較大經(jīng)濟(jì)損失。引起奶牛乳房炎的主要致病菌是葡萄球菌和鏈球菌，兩種細(xì)菌相加占的比例最高可達(dá)80%以上[1～3]，以往臨床用于治療葡萄球菌的藥物多為抗生素，而抗生素產(chǎn)生的耐藥性、藥殘等問題一直困擾奶業(yè)生產(chǎn)。溶葡萄球菌酶(Lysostaphin，LSP)是1964年Schindler等[2]首次從Staphylococcus simulans 培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的一種生物酶制劑，它與抗生素、化學(xué)藥物有著完全不同的殺菌機(jī)理。它可切斷葡萄球菌細(xì)胞壁肽聚糖中的五甘氨酸肽鍵橋結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到快速殺死細(xì)菌的目的，其獨(dú)特的殺菌機(jī)制不易誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥菌株[3]，特別適用于治療由甲氧西林耐藥性金黃色葡萄球菌(mRSA)引起的感染[4]。并且不會(huì)殘留在動(dòng)物體內(nèi)[5]，對(duì)機(jī)體正常組織無刺激、無致突變性[6－7]。黃青山等[8]研究了rLSP對(duì)奶牛乳房炎和子宮內(nèi)膜炎常見病原菌的體外殺菌試驗(yàn)，結(jié)果表明，rLSP對(duì)試驗(yàn)分離的金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌具有良好抑殺效 果。因此，溶葡萄球菌酶可以做為一種新型、安全的治療奶牛乳房炎的藥物。本試驗(yàn)在臨床采用重組溶葡萄球菌酶粉和頭孢噻肟唑治療奶牛隱性乳房炎，對(duì)其療效進(jìn)行對(duì)比，試驗(yàn)顯示，用重組溶葡萄球菌酶粉治療奶牛隱性乳房炎療效優(yōu)于頭孢噻肟唑。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)藥物與對(duì)照藥物

試驗(yàn)藥物：重組溶葡萄球菌酶粉，規(guī)格為400U(0.4 mg)/支，10支/盒，昆山博青生物科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)20110623。對(duì)照藥物：注射用頭孢噻呋鈉，規(guī)格為0.5g/瓶×2瓶/盒。石家莊市光華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)20110906。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)用牛選自北京某牛場(chǎng)24頭經(jīng)BLT檢測(cè)為陽性的隱型乳房炎患牛。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 患牛乳區(qū)分組 24頭患隱性乳房炎的受試牛在用BLT試劑檢測(cè)過程中共發(fā)現(xiàn)有32個(gè)患病乳區(qū)，將24頭牛分成4個(gè)組，每組6頭(8個(gè)患病乳區(qū))。

1.3.2 試驗(yàn)過程 前3組為重組溶葡萄球菌酶粉試驗(yàn)組，第1組為低劑量組以200U/乳區(qū)給藥，第2組為中劑量組以400U/乳區(qū)給藥，第3組為高劑量組以600U/乳區(qū)給藥，將重組溶葡萄球菌酶粉用注射用水稀釋至20ml患病乳區(qū)內(nèi)注入，每天早、晚擠奶后各用藥1次，連用4d；第4組為藥物對(duì)照組，以注射用頭孢噻呋鈉0.25g/乳區(qū)給藥，將頭孢噻呋鈉粉用注射用水稀釋至20ml患病乳區(qū)內(nèi)注入，每天早、晚擠奶后各用藥1次，連用4d。各組牛以耳標(biāo)號(hào)做為標(biāo)記。

1.3.3 評(píng)定方法 試驗(yàn)通過測(cè)定用藥前及用藥后患牛的乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC)變化，評(píng)定3個(gè)劑量重組溶葡萄球菌酶粉和對(duì)照頭孢噻呋鈉粉對(duì)隱性乳房炎的療效。計(jì)數(shù)方法為：在各試驗(yàn)組第一次用藥前的早上和4d用藥后的次日早上分別用滅菌試管采集治療乳區(qū)的乳樣，每份10ml，做好標(biāo)記，用保溫冰盒保存運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室采用Nucleocounter SCC-100體細(xì)胞測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。若用藥乳區(qū)乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC少于50萬個(gè)/ml，表明病原菌幾乎全部消除，可視為治愈；若用藥乳區(qū)乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC)在50～100萬個(gè)/ml之間，表明主要病原菌消除，可視為有效；若用藥乳區(qū)乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC)仍多于100萬/ml，表明病原菌未被消除，既為無效。

2 結(jié)果

對(duì)24頭隱性乳房炎患病乳區(qū)用藥前后乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果如附表所示。

使用SPSS7.0軟件統(tǒng)計(jì)分析組內(nèi)用藥前后和組間用藥后的乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC)數(shù)值(±SD)。

首次用藥時(shí)采奶檢測(cè)，各組奶牛隱性乳房炎乳區(qū)所泌乳汁的體細(xì)胞數(shù)差異不顯著(P>0.05)；用藥4d后，各組奶牛隱性乳房炎乳區(qū)所泌乳汁的體細(xì)胞數(shù)均較用藥前顯著減少(P<0.01)；200U劑量組與400U劑量組和600U劑量組之間用藥效果差異顯著(P<0.01)；200U、400U、600U劑量重組溶葡萄球菌治療組的體細(xì)胞數(shù)均顯著低于頭孢噻呋鈉粉治療組(P<0.05或 P<0.01)；3個(gè)劑量組與對(duì)照組之間均存在極顯著差異(P<0.01)。

附表 用藥前后乳汁體細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果(SCC) (萬個(gè)/ml)

3 討論

（1）重組溶葡萄球菌酶對(duì)奶牛隱性乳房炎有明顯治療效果。與頭孢菌素類治療相比，重組溶葡萄球菌酶能夠顯著降低治療乳區(qū)泌乳的體細(xì)胞數(shù)，并能夠很好的解決抗生素治療牛乳房炎過程中出現(xiàn)的易產(chǎn)生耐藥菌株、牛奶中抗生素殘留過高、治療效果不穩(wěn)定易復(fù)發(fā)等問題，從而提高產(chǎn)奶量及牛奶的品質(zhì)，最終達(dá)到減輕隱性乳房炎對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成的損失。（2）建議奶牛場(chǎng)在夏季的每月對(duì)全部泌乳牛進(jìn)行一次隱性乳房炎監(jiān)測(cè)，既定期進(jìn)行牛奶體細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查，對(duì)陽性患牛采用重組溶葡萄球菌酶(400U以上劑量)治療4d，以減低隱性乳房炎向臨床型乳房炎的轉(zhuǎn)化，在隱性階段進(jìn)行有效治療，從而收到較理想的效果。（3）由于重組溶葡萄球菌酶對(duì)葡萄球菌等革蘭氏陽性菌有效，但對(duì)大腸桿菌等革蘭氏陰性菌引起的乳房炎并不十分有效，建議奶牛場(chǎng)在使用重組溶葡萄球菌酶的同時(shí)可輔助使用其他桿菌肽或酶類制劑，起到協(xié)同作用。

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