載脂蛋白E(ApoE)基因多態性與2型糖尿病(T2DM)血脂及其腦梗死并發癥的關系研究

李 英 唐英琪

1.遼寧省沈陽市第二中醫醫院，遼寧沈陽 110101；2.大連醫科大學附屬第一醫院內分泌科，遼寧大連 116011

載脂蛋白E(ApoE)基因多態性與2型糖尿病(T2DM)血脂及其腦梗死并發癥的關系研究

李 英1唐英琪2

1.遼寧省沈陽市第二中醫醫院，遼寧沈陽 110101；2.大連醫科大學附屬第一醫院內分泌科，遼寧大連 116011

目的 分析并研究載脂蛋白E基因多態性與2型糖尿病血脂及其腦梗死并發癥的關系。方法 從2012年5月—2014年5月期間該院收治的2型糖尿病患者中選取100例作為臨床研究對象，設定為試驗組，其中50例患者并發腦梗死，50例患者無并發癥；同時從全市范圍內征集100例健康者作為對照組。兩組實驗者均采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性方法檢測其ApoE基因多態性，通過基因多樣性的檢結果分析并研究其與2型糖尿病血脂及其腦梗死并發癥的關系。結果 對照組和試驗組等位基因分布頻率相差不大，差異無統計學意義(P＞0.05)；對試驗組的100例患者進行組間比較發現，患者低密度脂蛋白與膽固醇含量在攜帶E4等位基因的患者中最高，在攜帶E2等位基因的患者中最低，差異有統計學意義(P＜0.05)。且實驗結果顯示并發腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率高，無并發腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率低，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 載脂蛋白基因多樣性與2型糖尿病之間不存在必然的關系；2型糖尿病高脂血癥及其并發腦梗死與E4等位基因的攜帶有關。

載脂蛋白E基因多態性；2型糖尿病；血脂；腦梗死

2型糖尿病具有明顯的遺傳傾向和家族群發現象，是一類與 血漿脂蛋白代謝有關的基因疾病[1]。而載脂蛋白是構成血漿脂蛋白的重要成分，在血漿脂蛋白的代謝中發揮著極其重要的作用，因此載脂蛋白與2型糖尿病之間存在著密切的關系[2]。臨床研究發現[3]2型糖尿病患者且并發腦梗死的患者往往表現為低密度脂蛋白和膽固醇水平的異常增高。在該研究中，對2型糖尿病載脂蛋白E基因多態性與其血脂及其腦梗死并發癥的關系進行分析和研究，現分析2012年5月—2014年5月間該院收治的100例2型糖尿病患者的臨床資料，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從該院收治的2型糖尿病患者中選取100例作為臨床研究對象，設定為試驗組，其中 50例患者并發腦梗死，50例患者無并發癥；同時從全市范圍內征集100例健康者作為對照組。對照組 100例，男性 48例，女性 52例；年齡 21～86歲，平均（53.3± 10.1）歲；對照組的100人經全身檢查確定為健康者。試驗組100例，男性55例，女性45例，年齡24～82歲，平均（53.8±10.2）歲；病程1～3年，平均（2.5±1.1）年。

1.2 檢測方法

首先采集標本：參加實驗的200名受試者于清晨空腹狀態下采集靜脈血8 mL，其中的3 mL用于血脂檢查，檢測其低密度脂蛋白和膽固醇含量，其余5 mL加入抗凝劑后低溫保存。隨后提取DNA：應用酚-氯仿法從低溫保存的靜脈血液樣品中提取DNA,立即放入冰箱中低溫保存等待下步實驗時再取出。然后擴增PCR：該反應在PCR擴增儀中進行，其中引物位于ApoE基因第四外顯子內，包含了兩個多態性位點，反應物包括適量模板DNA，dNTP，Mgcl2,Kcl,二甲亞砜及相應的反應酶等，隨后循環進行變性，退火，延伸等過程直至得PCR產物。最后向PCR產物中加入內切酶得酶切產物行凝膠電泳后，染色觀察。

1.3 統計方法

應用 SPSS l5.0統計軟件對數據進行分析，計數資料采用百分比表示,數據對比采取χ2校驗。

2 結果

2.1 等位基因分布頻率

對兩組受試者等位基因分布頻率進行比較，發現E2，E3，E4分布頻率相差不大，差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組等位基因分布頻率比較[n（%）]

2.2 ApoE基與腦梗死并發癥的關系

將試驗組中的50例并發腦梗死者與50例無并發癥者進行比較，發現并發腦梗死組21例攜帶E4基因，無并發癥組7例攜帶E4基因，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 ApoE基與腦梗死并發癥的關系

3 討論

載脂蛋白是一種關系到體內脂蛋白轉運的多態性蛋白，其多態性與機體多種疾病有著密切關系。其具有多態性的原因主要是載脂蛋白基因的多態性與基因多樣性表達。目前，關于載脂蛋白E基因多態性與疾病的關系已成為研究的熱點[4]。在該研究中設置了對照實驗，其中對照組為 100名健康者，試驗組為100例2型糖尿病患者，對這200例受試者E2，E3，E4等位基因進行檢測。E3為野生型基因而E2和E4為突變型基因，突變型基因與人體內血脂的含量有著密切的關系[5-6]。E2基因所表達的載脂蛋白與低密度脂蛋白的親和力較低而E4基因表達產物與低密度脂蛋白的親和力較高[7-8]。E4與低密度脂蛋白以及膽固醇的高親和力，大大降低了體內血脂的代謝速度，從而使血脂含量較高，隨后通過高血脂來促進腦梗死的病發，而E4與2型糖尿病的發生并無直接關系[9-10]。在該實驗中，對兩組檢測結果進行比較，對照組和試驗組等位基因分布頻率相差不大，差異無統計學意義（P＞0.05）；患者低密度脂蛋白與膽固醇含量在攜帶E4等位基因的患者中最高，在攜帶E2等位基因的患者中最低，差異有統計學意義（P＜0.05）。且并發腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率高，無并發腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率低，差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，2型糖尿病高脂血癥及其并發腦梗死與E4等位基因的攜帶有密切的關系。

[1]徐秋，李生兵，楊剛毅，等.中國人群ApoE基因多態性與2型糖尿病相關性的Meta分析[J].第三軍醫大學學報，2010,32（2）:164-168.

[2]王袁，吳琪俊，施榕.糖尿病腎病與載脂蛋白E基因多態性相關性的Meta分析[J].上海交通大學學報：醫學版，2011,31（5）:625-631.

[3]向茜，吳于濱，宋滇平，等.載脂蛋白E基因多態性與糖尿病腎病的相關性研究[J].中國糖尿病雜志，2010,18（3）:185-186.

[4]謝毅強.ApoE基因多態性與2型糖尿病并發癥的研究進展[J].現代生物醫學進展，2010,10（5）:978-981.

[5]汪瑋琳，馮克娜，周玉穎，等.2型糖尿病中老年住院患者輕度認知障礙與載脂蛋白E基因多態性的關系[J].中國慢性病預防與控制，2013, 21（6）:666-668.

[6]Chaudhary R，Likidlilid A，Peerapatdit T，et a1.Apolipoprotein E gene polymorphism：effects on plasma lipids and risk of type 2 diabetes and coronary artery disease[J].Cardiovase Diabetol，2012，21l：36.

[7]龍愛梅，左彥方，黃曉青，等.中國人群載脂蛋白E基因多態性與2型糖尿病相關性的薈萃分析[J].循證醫學，2013，13（1）：57-60.

[8]葛彪，陳吉，田改生，等.載脂蛋白E基因多態性與2型糖尿病患者血脂的關系[J].中國醫藥導報，2013，10（32）：17-19,23.

[9]Asghar M，Kabita S，Kalla L，et a1．Prevalence of MTHFR，Factor V，ACE and APOE gene polymorphisms among Muslims of Manipur，India[J].Ann Hum Biol，2013，40(1)：83-87．

[10]黃琳，何錦文.珠海地區2型糖尿病患者血脂和載脂蛋白水平的變化[J].國際檢驗醫學雜志，2013,34（4）：816-817.

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[報紙]作者.文章題目[N].報紙名，出版年月日（版）.

Study of the Relationship Between Apolipoprotein E(ApoE)Gene Polymorphism,Type 2 Diabetes(T2DM)Blood Lipid and Cerebral Infarction Complication

LI Ying1TANG Yingqi2
1.Liaoning Shenyang Second Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shenyang,Liaoning Province,110101,China;2.Department of Endocrinology,The First Affiliated Hospital of Dalian Medical University,Dalian,Liaoning Province,116011,China

Objective To analyze and study the relationship between apolipoprotein E gene polymorphism and type 2 diabetes blood lipid and complication of cerebral infarction.Methods 100 cases with type 2 diabetes admitted in our hospital from May 2012 to May 2014 were selected as the clinical subjects and set as the experimental group,including 50 cases with cerebral infarction and 50 cases without.And 100 healthy controls selected from the city were set as the control group during the same period.Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism method was used to detect the ApoE gene polymorphism of the two groups.The detection results of genetic diversity were analyzed and the relationship between type 2 diabetes blood lipid and complication of cerebral infarction was studied.Results The distribution frequency of allele in the control group and the experimental group had no obvious difference,the difference was not statistically significant(P＞0.05);It was found by comparing 100 patients in the experimental group that patients carrying E4 allele had the highest low density lipoprotein and cholesterol content, while patients carrying E2 allele had the lowest,the difference was statistically significant(P＜0.05).The experimental results showed that diabetic patients with cerebral infarction had high carrying rate of E4 allele,while those without cerebral infarction had low carrying rate of E4 allele,the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion There is no necessary relationship between diversity of apolipoprotein gene with type 2 diabetes;type 2 diabetic hyperlipemia and cerebral infarction complication have certain relationship with the carrying of E4 alleles.

Apolipoprotein E gene polymorphism;Type 2 diabetes;Blood lipid;Cerebral infarction

R743.33

A

1674-0742（2014）11（a）－0037-03

李英(1965.2-),女，遼寧沈陽人，本科，副主任醫師，研究方向：腦血管病。