毛細管氣相色譜法測定米氮平原料藥中的有機溶劑殘留量

霍建富，申云飛，連建科，張慧蘭

(山西康寶生物制品股份有限公司，山西 長治 046011)

米氮平是全球首個對去甲腎上腺素能和特異性5-羥色胺能受體雙重阻滯作用的的抗抑郁藥(NaSSA)。由于該藥在合成過程中使用了乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，而這5種有機溶劑都是《中國藥典》(2010年版)中規定控制限量的溶劑，有必要對其殘留量進行檢測。作者根據溶劑的性質和初步分離的結果，建立了毛細管氣相色譜法測定米氮平原料藥中上述5種有機溶劑的殘留量。

1　實驗

1.1　試藥、試劑與儀器

米氮平原料藥(批號：110801、110901、110902)，自制。

二甲基亞砜、二氯甲烷、三氯甲烷，上海阿拉丁化學試劑有限公司；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，天津北科化學品有限公司；四氫呋喃、乙醇，天津凱通化學試劑有限公司；以上試劑均為色譜純。

GC2010 Plus型氣相色譜儀，日本島津公司；GA-380A型低噪音空氣泵、GH-300型高純氫發生器，北京中興江利科技發展有限公司；F-502型頂空進樣器，北京北分瑞利分析儀器有限責任公司；HP-1型毛細管色譜柱(30 m×0.53 mm，3μm)，FID檢測器。

1.2　方法

1.2.1色譜條件

HP-1毛細管柱(30 m×0.53 mm，3μm)。程序升溫：40 ℃保持8 min；以7 ℃·min-1的速率升溫至120 ℃，保持5 min；再以30 ℃·min-1的速率升溫至200 ℃，保持2 min。進樣口溫度200 ℃；檢測器溫度250 ℃；載氣為高純氮氣，流速3 mL·min-1；分流比1∶15；頂空瓶平衡溫度90 ℃，平衡時間30 min。頂空進樣。

1.2.2對照品溶液的配制

分別精密稱取適量乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，用二甲基亞砜稀釋成每毫升約含乙醇500μg、二氯甲烷60μg、三氯甲烷6μg、四氫呋喃72μg、N,N-二甲基甲酰胺88μg的溶液，作為對照品溶液。

1.2.3供試品溶液的配制

取米氮平適量(約1 000 mg)，精密稱定，置于10 mL量瓶中，用二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.2.4貯備溶液的配制

分別精密稱取適量乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，用二甲基亞砜稀釋成每毫升中約含乙醇5 000.40μg、二氯甲烷606.22μg、三氯甲烷60.08μg、四氫呋喃721.64μg、N,N-二甲基甲酰胺882.96μg的溶液，作為貯備溶液。

2　結果與討論

2.1　專屬性實驗

取空白溶劑二甲基亞砜及乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺分別進樣。結果發現，二甲基亞砜、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺峰的保留時間分別為18.925 min、3.995 min、5.843 min、9.780 min、10.500min、17.003 min。

取空白溶劑二甲基亞砜及乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺混合物進樣，色譜圖如圖1所示。

Ⅰ.乙醇　Ⅱ.二氯甲烷　Ⅲ.三氯甲烷　Ⅳ.四氫呋喃　Ⅴ.N,N-二甲基甲酰胺　Ⅵ.二甲基亞砜

由圖1可以看出，各溶劑間分離度良好。空白溶劑對測定無干擾。

2.2　檢出限實驗

取各溶劑精密稱定，用二甲基亞砜逐步稀釋，按信噪比3∶1進行實驗。結果表明，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的檢出限(μg·mL-1)分別為1.03、0.83、0.47、0.32、1.04。

2.3　精密度實驗

取對照品溶液重復進樣6次，測得乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺峰面積的RSD值分別為0.70％、0.91％、0.30％、0.23％、0.45％。表明該檢測方法的精密度良好。

2.4　線性關系

精密量取貯備溶液0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，用二甲基亞砜稀釋，得到含不同濃度(μg·mL-1)乙醇(100.008、250.020、500.040、750.060、1 000.080)、二氯甲烷(12.124、30.311、60.622、90.933、121.244)、三氯甲烷(1.202、3.004、6.008、9.012、12.016)、四氫呋喃(14.433、36.082、72.164、108.246、144.328)、N,N-二甲基甲酰胺(17.659、44.148、88.296、132.444、176.592)的溶液。按色譜條件頂空進樣，以峰面積(A)對濃度(c)進行線性回歸。線性方程及相關系數見表1。

表1　線性關系實驗結果

由表1可知，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺的濃度(μg·mL-1)分別在100.008～1 000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592范圍內與峰面積的線性關系良好。

2.5　回收率實驗

取適量(約0.5 g)米氮平原料藥(批號：110801)共9份，精密稱定，置于5 mL量瓶中，先用適量二甲基亞砜溶解，再分別加入各貯備溶液0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，用二甲基亞砜定容，搖勻，作為高、中、低3個檔次濃度的供試品溶液。按色譜條件頂空進樣，計算回收率及相對標準偏差，結果見表2。

由表2可看出，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的平均回收率分別為99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％，相對標準偏差(RSD)均小于1％。

2.6　樣品檢測

取3批米氮平原料藥樣品(批號110801、110901、110902)按上述方法測定有機溶劑殘留量，結果見表3。

2.7　討論

(1)在人用藥物注冊技術要求國際協調會(ICH)的有機溶劑殘留量指導原則中，規定二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺為第二類應該限制使用的溶劑，本實驗參照《中國藥典》(2010年版)二部的指標要求，規定溶劑的限度為：二氯甲烷0.06％、三氯甲烷0.006％、四氫呋喃0.072％、N,N-二甲基甲酰胺0.088％。雖然乙醇為第三類溶劑，毒副作用很小，但還是應該控制，規定限度為0.5％。

表2　回收率實驗結果

表3　樣品中有機溶劑殘留量測定結果/％

(2)本實驗采用HP-1毛細管色譜柱，通過程序升溫使5種有機溶劑得到完全分離。40 ℃保持8 min，使沸點低的溶劑乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃先分離；然后以7 ℃·min-1的速率升溫至120 ℃，保持5 min，使沸點高的溶劑N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜分離，并盡可能地保證基線平穩；再以30 ℃·min-1的速率升溫至200 ℃，保持2 min，使沸點更高的雜質溶劑分離，以確保測量準確。

(3)本實驗選用二甲基亞砜作溶劑，其與樣品和被測的5種有機溶劑均能互溶，且不干擾被測組分的測定。

(4)要確保供試品溶液氣-液相達到平衡，頂空時間不易過長，一般為30～45 min。過長可能導致頂空瓶的氣密性變差，過短達不到平衡效果。本實驗選擇的頂空時間為30 min。

3　結論

建立了米氮平原料藥中乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等有機溶劑殘留量毛細管氣相色譜測定法。結果表明：以上5種有機溶劑的含量(μg·mL-1)分別在100.008～1 000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592的范圍內與峰面積的線性關系良好，檢出限(μg·mL-1)分別為1.03、0.83、0.47、0.32、1.04；平均回收率分別為99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％；精密度實驗相對標準偏差(RSD)均小于1％。該方法靈敏、準確，可用于米氮平原料藥中有機溶劑殘留量的測定。

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