175例急性白血病流式細胞術免疫分型的研究

姚亞洲 鄭引索 陳峰云 陳 濤 田昱平 李小妮 楊彩霞 張 玲

（寶雞市中心醫院血液風濕科，陜西 寶雞 721008）

175例急性白血病流式細胞術免疫分型的研究

姚亞洲 鄭引索 陳峰云 陳 濤 田昱平 李小妮 楊彩霞 張 玲

（寶雞市中心醫院血液風濕科，陜西 寶雞 721008）

目的 探討急性白血病流式細胞術免疫分型的意義以及與FAB分型的對照。方法 采用流式細胞術三色熒光標記技術和CD45/SC雙參數散點圖設門，檢測175例急性白血病的免疫表型，對抗原表達情況進行分析。結果 FAB分型和免疫分型的相符率90.28%（158/175），175例急性白血病檢出B-ALL44例，占25.14%，其主要表達的抗原陽性率從高到低依次為CD19、CD22、CD79a；T-ALL19例，占10.86%，其主要表達的抗原陽性率從高到低依次為HLA-DR、CD34、CD5、CD7、cCD3、CD8、CD38；非M3 AML103例，占58.86%，其主要表達的抗原陽性率從高到低依次為CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR、MPO、CD34、CD123、CD15、CD64；共檢出AML-M3患者6例，占0.34%，其主要表達的抗原陽性為MPO、CD13、CD33、CD117、CD123、CD64。結論 流式細胞術免疫分型在白血病分型中起重要作用，是FAB分型的補充和修正,提高了急性白血病診斷的準確率，有必要進一步加強流式細胞術免疫分型的規范化和標準化工作。

急性白血病；流式細胞術

急性白血病是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病，因白血病細胞自我更新增強、增殖失控、分化障礙、凋亡受阻，而停滯在細胞發育的不同階段。我國各類白血病的發病率為3～4/10萬人，在惡性腫瘤所致的病死率中，白血病居第6位（男性）和第7位（女性），在兒童和35歲以下的人群中則居第1位[1]。準確地為白血病的進行分型對于白血病的診斷、治療方案的確定、預后判斷、療效觀察都有著非常重要的意義。鑒于染色體分析技術以及分子生物學檢查技術短期難于大范圍普及，作為MICM分型的重要組成部分，流式免疫分型能精確地反映白血病細胞的來源和分化程度，是急性白血病的診斷、治療及預后判斷的重要依據，流式細胞術免疫分型的開展促進了急性白血病診斷治療水平的進展。我們通過對我科收治的175例初診急性白血病患者采用流式細胞免疫分型和骨髓形態學檢查的結果進行總結和分析，報道如下。

1 材料與方法

1.1 對象：2008年10月至2014年5月在本院血液科送檢的免疫分型病例共175例，均為初診病例，男97例，女78例，年齡6～83歲。

1.2 方法

1.2.1 骨髓細胞形態學檢查：患者局麻下行骨髓穿刺涂片，常規瑞氏加吉姆薩染色，細胞化學檢查檢測MPO，PAS，NSE，油鏡下分類計數200個有核細胞，個別患者計數500個細胞，按法美英（FAB）白血病分型標準進行分型[2]。

表1 109例AML中不同抗原表達

1.2.2 流式細胞術免疫表型分析：采集骨髓標本1～2 mL，使用EDTA抗凝。外周血原始細胞＞30%且白細胞計數＞20×109的部分患者采用外周血標本，24 h內送至中心實驗室，按實驗室常規標記熒光抗體，包括T淋巴細胞相關抗體CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3；B淋巴細胞相關抗體CD10、CD19、CD20、CD22、CD79a、sIgM；髓系細胞相關抗體CD13、CD14、CD15、CD33、CD64、CD61、MPO、CD42b、Gly；以及HLA-DR、CD34、CD45、CD38、TdT等通用抗體。采用美國BD公司生產的四色流式細胞儀采集10000個細胞，用SystemⅡ軟件對結果進行自動分析。

1.2.3 流式細胞儀和所有試劑均購自美國BD公司。以胞質抗原≥10%、膜表面抗原≥20%定義為陽性；若髓系和一個淋系積分均＞2，參照白血病免疫學積分系統（EGIL，1998）[3]診斷為急性混合細胞白血病。

1.2.4 統計學分析：應用Microsoft Excel2007軟件進行數據處理和統計分析，計數資料以陽性百分比表示。

2 結 果

2.1 骨髓形態學結果：本組175例急性白血病患者經骨髓細胞形態學檢查，初診時按FAB分類，急性髓細胞白血病（AML）106例，急性淋巴細胞白血病（ALL）61例，形態學不典型無法判斷者8例。

2.2 免疫分型結果：本研究中175例急性白血病經流式細胞術檢測免疫分型結果，原始細胞占骨髓有核細胞的比例為最低24.5%，最高達99%，中位數為80.57%，流式細胞術免疫分型結果，ALL 63例，AML 109例，混合細胞白血病（MLL）3例。4例形態分型經過免疫分型得以修正，2例ALL-L3修改為T/M，2例AML-Ml修改為T-ALL；8例骨髓細胞形態學難以確診的患者為1例為B-ALL，1例為T-ALL，1例為B/M，其余5例均為AML，FAB分型和流式細胞免疫分型的相符率為90.28%。

2.3 B-ALL抗原表達情況：本研究中175例急性白血病檢出B-ALL44例，占25.14%，其主要表達的抗原陽性率從高到低依次為HLA-DR、CD38、CD34、CD19、CD22、CD33、CD79a、CD123。

2.4 T-ALL抗原表達情況：本研究中175例急性白血病檢出T-ALL19例，占10.86%，其主要表達的抗原陽性率從高到低依次為HLA-DR、CD34、CD5、CD7、cCD3、CD8、CD38。

2.5 AML抗原表達情況：本研究中175例急性白血病檢出非M3AML103例，占58.86%，其主要表達的抗原陽性率從高到低依次為CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR、MPO、CD34、CD123、CD15、CD64。175例急性白血病共檢出AML-M3患者6例，占0.34%，其主要表達的抗原陽性為MPO、CD13、CD33、CD117、CD123、CD64。見表1。

3 討 論

急性白血病是一組造血干細胞的惡性克隆性疾病，是造血細胞在某一分化階段的大量積累，具有高度的異質性，通過對這一階段細胞的形態、免疫、遺傳學以及分子生物學檢驗分析對白血病進行正確分型，對指導臨床治療與判斷預后均有著十分重要的意義。隨著現代免疫學、細胞遺傳學、分子生物學技術的發展，結合白血病形態學特征，世界衛生組織于1999年正式公布造血和淋巴組織腫瘤分類框架，并在2001年詳細介紹了造血和淋巴腫瘤的分類和診斷并提出MICM分型，近年來已經普遍應用于臨床。FAB形態學分型是應用范圍最廣泛和使用時間最長的白血病分型及診斷方法，然而顯微鏡下的細胞形態學觀察和細胞化學方法對細胞識別受檢驗者的經驗影響，主觀性明顯，加上白血病細胞自身的多態性和異質性，23%～36%左右的急性白血病難以得到準確診斷，而流式免疫分型是根據白血病細胞表達的系列抗原，來確定白血病細胞的來源以及分化程度，提高了白血病診斷的準確性、客觀性和可重復性[4]。本組175例急性白血病中有4例FAB分型與流式細胞免疫分型不符，與國內報道相似；對8例骨髓細胞形態學不典型的患者進行了分型。由此多數學者為流式細胞術免疫分型可以彌補FAB細胞形態學分型的不足，使其準確性提高10%～20%[5]，為急性白血病確診后治療方案的選擇以及對白血病預后的判斷提供了重要依據。本組共檢測出急性淋巴細胞白血病63例，其中B-ALL44例，T-ALL19例。44例B-ALL中，CD19、CD22、CD79a、CD123是B系急性淋巴細胞白血病的敏感標志，其中尤以CD79a的表達較之胞質免疫球蛋白重鏈的表達更早，持續至B細胞的漿細胞階段仍有表達，被認為是B細胞最特異的標志之一[6]。19例T-ALL中CD5、CD7、cCD3的表達率最高（100%），表明CD5、CD7、cCD3的敏感性高，其中cCD3是T-ALL的特異標志之一[3]。本研究共檢出AML109例，其中非M3AML103例，主要表達CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR，MPO其中MPO是髓系白血病的標志性特征。AML-M3患者6例，主要表達MPO、CD13、CD33、CD117、CD123，CD64，與國內外文獻報道一致[7]。由于AML-M3的白血病細胞起源于祖細胞，分化相對較成熟，較少表達CD34和HLA-DR，本組CD34和HLA-DR在AML-M3中的表達率分別為15.15%和0。針對高度異質性和形態多樣性的急性白血病，在遺傳學和分子生物學還不能很好普及的當前，流式細胞術免疫分型診斷是對傳統FAB形態學分型診斷的重要補充和修正，尤其是可以確診一些特殊類型的急性白血病，提高了急性白血病的分型準確性，有利于判斷預后及治療方案的選擇。在目前的現狀下，我們建議：①在進行流式細胞術免疫分型時，按照WHO提出MICM分型的要求，需要結合FAB分型、細胞遺傳學、基因檢測和臨床相關信息，為急性白血病提供更精確的診斷；②在掌握已有的相關信息基礎上，盡量全面地檢測單克隆抗體，以便于疾病的準確診斷、預后判斷；③就目前而言，急需加強流式細胞術免疫分型的規范化、標準化工作，在有條件的地區，相關實驗室可以實行局部規范化和標準化不具備條件的單位，盡可能選擇區域中心的實驗室完善流式細胞免疫分型檢測來提高診斷準確性。

[1] 葛均波,徐永健.內科學[M].8版.北京:人民衛生出版社,2013:578.

[2] 張之南.血液病診斷及治療標準[M].3版.北京:北京科學出版社,2007:106-113.

[3] Bene MC,Castoldi G.Proposals for the immunological classification of acute leukemias[J].Leukemia,1995,9(12):1783-1786.

[4] Jennings CD,Foon KA.Recent advances in flow cytometry: applications to the diagnosis of hematologic[J].Blood,1997,90: 2863-2892.

[5] 黃正剛,陳啟文.67例兒童急性白血病流式細胞術免疫分型的研究[J].實用臨床醫學,2008,9(5):87-90.

[6] Paredes-Aguilera R,Romero-Guzman L.Flow cytometric analysis of cell-surface and intracellular antigens in the diagnosis of acute leukemia[J].Am J Hematol,2001,68(2):69-74.

[7] 黃婕,何璐璐.兒童急性白血病免疫表型及臨床研究[J].醫學臨床研究,2008,25(12):2159-2161.

Immunophenotyping of 175 Case with Acute Leukemia by Flow Cytometry

YAO Ya-zhou, ZHENG Yin-suo, CHEN Feng-yun, CHEN Tao, TIAN Yu-ping, LI Xiao-ni, YANG Cai-xia, ZHANG Ling
(Department of Blood Rheumatology, Baoji Central Hospital, Baoji 721008, China)

Obiective To investigate the significance of immunophenotype in acute leukemia via flow cytometry, and study the relationship of immunophenotype and FAB phenotype. Methods Immunophenotypes were detected by three-color flow cytometry(FCM )and CD45/SSC gating in 175 cases of acute leukemia(AL)and antigentic expressions were analysed. Results FAB classification and immunophenotype consistent rate of 90.28% (158/175), 175 cases of acute leukemia detected in B-ALL44 cases, accounting for 25.14%, antigen positive rate of its main expression in the order of CD19, CD22, CD79a; T-ALL19 cases, accounting for 10.86%, the positive rate of antigen expression and its main descending order of HLA-DR, CD34, CD5, CD7, cCD3, CD8, CD38; non M3 AML103 cases, accounting for 58.86%, its the positive rate of antigen expression in the order of major CD33, CD117, CD38, CD13, HLA-DR, MPO, CD34, CD123, CD15, CD64; were found in AML-M3 6 patients, accounting for 0.34%, and its main antigen expression of MPO, CD13, CD33, CD117, CD123, CD64.Conclusion Immunophenotype Plays an important role in the classification of acute leukemia and is a supplementary and correction of FAB phenotype. It can enhance the exactness of diagnosis and needs to be standardized.

Acute leukemia; Flow cytometry

R733.71

：B

：1671-8194（2014）31-0033-02