澤漆不同部位總黃酮的含量測定

李玉賢 董媛媛 王天杰 張俊利 王 磊

（河南中醫學院藥學院，河南 鄭州 450046）

澤漆不同部位總黃酮的含量測定

李玉賢 董媛媛 王天杰 張俊利 王 磊

（河南中醫學院藥學院，河南 鄭州 450046）

目的 測定澤漆不同部位總黃酮的含量。方法 以蘆丁含量為考察指標，通過分光光度法對澤漆不同部位總黃酮含量進行精密測定。結果 澤漆葉中總黃酮含量最高（29.6671 mg/g），根次之（13.1930 mg/g），莖最低（12.8009 mg/g）。結論 澤漆葉的總黃酮含量最高，利用價值最大。

澤漆；總黃酮；含量；不同部位；分光光度法

澤漆（Euphorbia helioscopia L），別名貓眼兒草，五燈頭，五朵云，五風草，五鳳靈枝，一把傘，九頭獅子草，燈臺草，廯草，奶漿草等。主要生于山坡，荒野，田邊及河岸邊，分布于除新疆，西藏以外的全國各地，藥物資源較為豐富。澤漆主要化學成分含有二萜酯類，黃酮類，酚酸類，三萜類[1-4]，甾醇類，多酚類，氨基酸及天然油脂等物質，并含有多種以槲皮素為苷元的黃酮苷。黃酮類化合物是一類生理活性較強的化合物[6-9]，且無毒無害，具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗過敏、抗病毒等作用，近年來在醫療，食品等方面有著越來越重要的地位。本實驗通過對澤漆中總黃酮含量測定，發現澤漆植物中黃酮類化合物含量較高。

1 實驗儀器與試劑

1.1 實驗儀器：KQ-100E型超聲波清洗器，721型可見分光光度計，FW80型高速萬能粉碎機，DZKW-D型 星宇電熱恒溫水浴鍋，101-1型電熱恒溫干燥箱，微量分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司），HZ-D循環水式真空泵，標準配套磨口玻璃儀器。

1.2 實驗試劑：澤漆樣品于2012年5月采自河南（樣品經風干，粉碎，保存在塑料袋中備用），蘆丁對照品（中國藥品生物制品鑒定所），氫氧化鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，乙醇等實驗所用試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 黃酮的定性鑒別：依次做了紫外光下顯色反應，濃氨水反應，三氯化鋁反應，乙酸鎂反應，鹽酸-鎂粉反應均顯陽性反應，可得出澤漆提取物中含有黃酮。

2.2 蘆丁對照品標準曲線的繪制

2.2.1 對照品標準溶液的配制：精密稱量120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品12.8 mg，置于50 mL干燥燒杯中，用60%乙醇溶液溶解，冷卻至室溫，并定容至100 mL的容量瓶中，振蕩均勻，則配制得到濃度為0.0128 mg/mL的蘆丁對照品標準溶液，備用。

2.2.2 吸收波長的確定：準確量取蘆丁對照品標準溶液1.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液4 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，放置5 min后，加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，放置5 min后，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，再用60%乙醇溶液定容。放置10 min后在400～600 nm波長之間測定吸光度，確定最大吸收波長為510 nm。2.2.3 蘆丁對照品溶液標準曲線的繪制：精密量取蘆丁對照品標準溶液0、1、2、3、4、5 mL分別置于6支10 mL容量瓶中，依次加入60%乙醇溶液 5、4、3、2、1、0 mL，各加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，搖蕩均勻，最后用60%乙醇溶液定容。靜置10 min后于510 nm處測量吸光度，試劑1為空白參照液，以蘆丁對照品標準溶液的質量濃度為橫坐標（mg/mL），吸光度為縱坐標，進行線性回歸分析，繪制蘆丁對照品溶液濃度與吸光度標準曲線，得到線性回歸方程：A=9.1406C-0.0007，R2=0.9999，說明蘆丁對照品標準溶液濃度與吸光度之間有良好的線性關系。

2.3 澤漆不同部位總黃酮的含量測定[10]

2.3.1 澤漆總黃酮的提取：以乙醇溶液濃度為60%，物料比為1∶25，提取時間20 min，提取溫度60 ℃為提取條件。精密稱量澤漆根，莖，葉各3份，每份2.4 g，分別置于9個具塞錐形瓶中，分別加入60%乙醇溶液60 mL，稱重，調節超聲清洗器溫度為60 ℃，提取20 min，補加60%乙醇至相同質量，抽濾，分別得到根，莖，葉的提取液。

2.3.2 澤漆不同部位總黃酮含量的測定：精密吸取上述各提取溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實驗步驟測定吸光度，每種提取液平行測定3次，計算不同部位總黃酮含量（%）。

2.4 實驗方法考察

2.4.1 穩定性試驗：精密吸取1 mL超聲提取溶液，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實驗步驟測定吸光度，再在30、60、90、120、150 min之后測定吸光度。由一系列實驗數據得：吸光度的RSD值為1.04%，表明供試溶液在顯色后150 min之內穩定。

2.4.2 重復性試驗：取同一批澤漆樣品細粉6份，每份2.4 g，分別按照“2.3.1”實驗步驟得供試品溶液，分別精密吸取1 mL，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實驗步驟測定吸光度。由一系列實驗數據得：吸光度的RSD值為1.32%，表明實驗重復性良好。

2.4.3 精密度試驗：精密量取蘆丁對照品標準溶液6份，各份1 mL，分別置于6支10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實驗步驟測定吸光度。由一系列實驗數據得：吸光度的RSD值為0.98%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 加樣回收試驗：精密量取供試品溶液9份，每份1 mL，置于九支10 mL容量瓶中，再分別精密加入蘆丁對照品標準溶液適量，混勻。分別按照“2.2.3”實驗步驟測定吸光度，計算總黃酮含量。加樣回收試驗結果見表1。

結果表明：平均回收率分別為102.84%、101.04%、98.53%，加樣回收率RSD分別為1.12%、0.98%、0.76%，加樣回收率良好，符合質量分析要求。

3 實驗結果

澤漆不同部位總黃酮含量測定結果，見表2。

4 討 論

4.1 超聲提取法提取澤漆總黃酮的實驗方法簡單、穩定，有助于提高總黃酮的提取率，縮短提取時間，節省提取溶劑，因此，超聲提取法可作為澤漆中總黃酮開發研究和質量評價的方法。

表1 加樣回收試驗

表2 澤漆不同部位總黃酮含量測定結果

4.2 采用分光光度法（比色法）測定澤漆中總黃酮含量具有科學，高效，準確，快速，重現性較好，儀器便宜易得的特點。

4.3 澤漆中不同部位所含的天然黃酮類化合物含量由大到小為葉、根、莖。為臨床用藥提供科學依據。

[1] 蔡鷹,王晶.澤漆根體外抗腫瘤實驗研究[J].中藥,1999,22(2):85-87.

[2] 蔡鷹,陸瑜.澤漆根體內抗腫瘤作用研究[J].中藥材,1999,22(11): 579-582.

[3] 高志良.大劑量澤漆為主治療早期肝瘤[J].江蘇中醫,1997,18 (2):28.

[4] 胡小華,李國強.澤漆研究進展[J].新疆中醫藥,2008,26(2):80-81.

[5] 何江波,劉月明.澤漆的化學成分研究[J].天然產物研究與開發, 2010,22(5):731-735.

[6] 龐維榮,杜晨暉.澤漆化學成分[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17 (20):118-121.

[7] 楊莉,陳海霞.澤漆化學成分及藥理作用研究進展[J].中草藥,2007, 38(10):1586-1589.

[8] 曹緯國,劉志勤.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].西北植物學報,2003,23(12):2241-2247.

[9] 劉仲則.中草藥黃酮類化合物心血管活性成分概述[J].中草藥, 2005,18(3):37.

[10] 楊帆,張軒.柿葉中總黃酮的鑒別與含量測定[J].中國醫藥指南, 2013,11(8):435-436.

醫學科技期刊中的代號與縮寫

非各學科公認的縮寫首次出現時應有全稱（摘要及正文中首次出現的均應有全稱與英文全稱及縮寫對照）。常用的名詞術語統一如下：總蛋白TP，清蛋白Alb，白細胞WBC，紅細胞RBC，血紅蛋白Hb，肌酐Cr,三酰甘油TG，尿蛋白測定量UTP，尿糖US，等。

R282.710.2

：B

：1671-8194（2014）32-0061-02

河南中醫學院大學生創新學習項目(項目編號: YXCX [2012]5；CXXM[2012]04)