時間分辨熒光免疫分析技術檢測梅毒抗體中的應用

郭 輝

(大慶市第四醫院檢驗科，黑龍江大慶163712)

梅毒螺旋體是引起人類梅毒的病原體。梅毒是性傳播疾病，人是梅毒的唯一傳染源。近年來我國梅毒流行呈逐年上升的趨勢［1］，據資料顯示從1993～1999年呈年增長率平均達85%。一經感染梅毒螺旋體，48h后機體即可產生特異性抗體，先為IgM隨后出現IgG、IgA，有些人還可以檢出IgE。IgM經過一段時間治療后很快消失，它可作為活動性梅毒的一個指征和療效指標。同時機體也可以產生非特異性抗心脂反應素，這就是梅毒特異性和非特異性血清學檢驗的理論基礎。而梅毒血清學檢驗的方法選擇對梅毒感染不同表現時期以及區分先天梅毒和神經性梅毒有重要的臨床意義。血清學標記免疫技術是梅毒血液篩查、方法學評價和療效判斷應用最有價值的免疫技術，檢測梅毒抗體的方法通常分兩類，一類是以血清類脂質抗原測定梅毒非特異性抗體，例如RPR、TRUST等，另一類是以梅毒組份蛋白檢測梅毒特異性抗體，如 TPHA、TPPA、TP-ELISA［2］。我院在 2010 年引進上海新波公司提供的時間分辨熒光免疫分析儀后，我們根據免疫項目的規劃和儀器的特征使用時間分辨熒光免疫技術(TRFIA)檢測了梅毒特異性抗體、丙型肝炎抗體和艾滋病抗體血清學檢測，本人根據幾年來的親身體會使用TRFIA法檢測梅毒特異性抗體，并且同時與TPPA、RPR方法對部分標本比對檢測和相互比較，現將檢測結果報道如下。

1 資料和方法

1.1 標本來源

門診皮膚性病科初診梅毒篩查及復診梅毒復檢患者；住院手術輸血前檢測患者血清26份，同時用TRFIA、TPPA和RPR方法檢測，并且按照實驗室規定SOP文件嚴格操作。

1.2 試劑來源

運用TRFIA、TPPA法檢測梅毒特異性抗體，RPR法檢測梅毒非特異性抗體。TRFIA法運用上海新波公司提供的儀器和儀器專用試劑；TPPA試劑來自日本富士株式會社；RPR試劑購自蘭州生物制品研究所，質控品購自上海儀器廠家提供供。試劑和質控品都在效期之內。

1.3 測定基本原理

TRFIA基本原理是蛋白質、激素、多肽、抗體等用鑭系金屬離子標記抗原和抗體，并與時間分辨熒光儀測定技術結合而建立起來的一種新型非放射性微量分析技術，對液體標本中微量物質進行定量測定最后產物的熒光強度；具有靈敏度高、發光穩定、熒光壽命長、自然熒光干擾少，標準曲線范圍寬等特點目前已廣泛應用臨床。TPPA法是在室溫下在U型板加稀釋血清25μL，分別在3、4孔加未致敏和致敏血球顆粒，封板靜止2h；RPR法是在反應板加血清50μL再滴加心脂抗原振蕩10min。

1.4 統計學處理

采用χ2檢驗，P＜0.05為差異而統計學意義。

2 結果

TRFIA實驗26份血清標本陽性11例，陽性檢出率12.7%；TPPA實驗26份血清標本陽性11例，陽性檢出率12.5%；RPR實驗26份血清標本滴度出現顆粒陽性者9例，陽性檢出率9.5%。

3 討論

梅毒病程漫長，早期侵犯生殖器和皮膚，晚期侵犯全身器官，并產生多種多樣的癥狀和體征，通過性行為在人群中相互傳播，危機下一代，也有極少數患者通過接吻、哺乳。接觸有傳染性損害病人的日常用品而被感染，危害性大因此必須予以高度重視。

TRFIA法檢測同TPPA、RPR法相比TRFIA檢測梅毒特異性抗體適用于批量梅毒生物學假陽性的排除和患者的初步診斷。對療效判斷和預后評價應用可能受一定限制［3］。

TPPA法是在TPHA試劑基礎上建立起來的一種新試劑，具有操作簡單，敏感性強，特異性高的特點，所以大多實驗室將其用作確證試驗，業界認為TP-ELISA檢測效果類同TPPA［4］。

RPR(快速血漿反應環狀卡片試驗)是20世紀80年代問世的非特異性抗體，主要用于二期梅毒診斷。對一期梅毒陽性率在75% ～85%，RPR可用于梅毒普查，抗體過量易出現假陰性反應，并且此方法必須手工操作，肉眼觀察結果，出現陽性必須用TPPA或TRFIA法進一步確證，而且存在一定生物學陽性［5］，是梅毒治療預后療效觀察、復發或再感染的檢測方法，患者經過治療后反應素消失或陰轉，因而用于梅毒的診斷和療效判斷，可是有時也需用特異性抗體測定試驗排除因其它疾病，如結核、類風濕、紅斑狼瘡、麻風等血清中也含有抗磷脂抗體的因素所致的生物學假陽性。

以上試驗充分的比較了梅毒血清學三種檢測方法的可靠性，同時對26份血清標本用TRFIA法和TPPA法檢測特異性抗體，以及用RPR方法檢測非特異性抗體。TRFIA檢測與TPPA檢出陽性符合率幾乎100%。符合程度比較高。同時應用TRFIA法檢測避免了用TPPA檢測時由于用手工和肉眼觀察時的室內光線而出現遺漏，得出結論兩種檢測方法可以互補存在，同時發展。RPR檢出陽性9例，檢出陽性率9.5%，比較與特異性抗體陽性檢出率，差異明顯，時間分辨熒光免疫分析儀的應用結果表明，在檢測梅毒特異性抗體時，操作流程比TPPA檢測更安全、加樣更準確、判讀靈敏度高，而且時間分辨熒光免疫分析儀整體智能化程度較高，減輕工作人員的負荷，在今后的實驗室發展趨勢中會更加適應。

［1］郭兌山，寧平，方德強，等.梅毒螺旋體抗體IgG ELISA和RPR試驗的比較［J］.中國輸血雜志，2001，14(2)：88

［2］陳華根.梅毒的實驗室診斷及臨床應用［J］.實用醫技雜志，2010，17(3)：245 246

［3］李金明.臨床酶免疫測定技術［M］.北京：人民軍醫出版社，2005，163

［4］葉順章，邵長庚，主編.性病診療與預防［M］.北京：人民衛生出版社，2002，11 12

［5］董瑜，董六慶，王宏.ELISA雙抗原夾心法檢測梅毒抗體的血清學分析［J］. 黑龍江醫藥科學，2004，27(3)：37