研究生分子生物學綜合實驗設計
——IMPACT蛋白單柱親和純化

趙仲麟，李 燕，朱 偉，張淑利，賈樹恒，馬斌強，袁 超*

(1.河南農業大學理學院，河南 鄭州450002;2.鄭州輕工業學院食品與生物工程學院，河南 鄭州450002; 3.河南農業大學農學院，河南 鄭州450002)

0 前言

生物類專業研究生實驗課程培養中，分子生物學是一門重要的學位課。分子生物學通過研究生物大分子的結構和功能等方面的內容來闡明各種生命現象的本質，其技術手段越來越多的應用到農業、醫學、環保、制藥等的眾多領域中。研究生培養關鍵是要提高學生的實踐能力和創新能力，而實驗課是研究生能力培養中的重要一環。培養學生的創新能力、動手能力，就需要充分發揮學科的優勢，把最新的科研成果和實驗技術融入到研究生實驗教學環節中。

本文設計了一個針對研究生分子生物學課程的綜合實驗，利用IMPACT(Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding)系統對蛋白進行表達純化，以大腸桿菌作為宿主菌。本實驗將分子生物學和基因工程所學部分內容相整合，既鞏固了學生的理論知識又科提高學生的實驗操作技能。該方法為新型蛋白純化方法，國內使用較少，增加了學生的學習興趣的同時，更利于讓學生了解最新的實驗技術手段。對于提高學生的創新和研究能力、培養科研創新思維具有重要意義。

1 實驗原理

IMPACT系統是一種新型的蛋白融合表達及純化系統，已應用到蛋白質工程的許多重要領域［1～5］。IMPACT表達的目的蛋白與內含肽(intein)及幾丁質結合蛋白(CBD)形成融合蛋白，通過幾丁質柱親和純化融合蛋白。……