影響雞新城疫HI抗體檢測的因素分析

張永康 （寧夏職業技術學院生命科學技術系 寧夏 銀川 750021）

影響雞新城疫HI抗體檢測的因素分析

張永康 （寧夏職業技術學院生命科學技術系 寧夏 銀川 750021）

新城疫也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由病毒引起的雞和火雞急性高度接觸性傳染病，常呈敗血癥經過。主要特征是呼吸困難、下痢、神經紊亂、黏膜和漿膜出血，是嚴重危害養雞業的重要疾病之一[1]。紅細胞血凝抑制試驗( HI)是監測ND 免疫狀態的一種簡便、快速的血清學方法, 但影響因素較多。為提高新城疫HI抗體測定的準確性，現就雞新城疫抗體監測中幾個應注意的問題提出來和大家一起探討。

1 溫度的影響

監測時如若室溫高時，HA、HI試驗反應速度加快，同時紅細胞的解凝時間也變短；當室溫低時可出現相反的結果。當室溫過高時配制的各種試劑應及時放置于4℃冰箱中保存，使用時再取出來。另外由于反應的速度加快，因此判定的時間也要相應的提前。不可在接近解凝時才判定，否則測出的HI 抗體水平會升高。當冬季溫度低時可延長HA 和HI 的反應時間，或者把反應板置37℃培養箱中，可解決溫度過低造成的影響。

2 抗原的影響

當抗原比較陳舊時，抗原對紅細胞的凝集能力下降，凝集后解凝時間也變短，因此一般要用新的抗原。

3 雞紅細胞的濃度的影響

有的使用1%的紅細胞懸液，有的使用0.5%的紅細胞懸液。不管是1%或0.5%的紅細胞懸液，都要配置準確。相對紅血球濃度大時，測出的HI值相對較小，而紅血球濃度稀時，則測出的HI值相對較大一些。在新城疫HI監測中，紅細胞的濃度要求為1%或0.5%。離心時要控制在一定的時間和一定的離心速度，這樣配出的紅細胞懸液才能準確。另外，在使用前必須把紅細胞混勻，并不時的搖動。

4 血清的影響

被檢血清如有陳舊、溶血、變質現象，就會影響實驗結果，使結果出現偏差。被檢血清要求足量、新鮮、色清、無雜質、無溶血現象。置清潔無菌的血容器, 操作時每批樣品用生理鹽水和標準陽性血清作陽性和陰性對照, 防止判定偏差。目的是為了讀取HI 抗體滴度時, 時間上有一個較正確的判定依據。即對照孔的紅細胞達到完全凝集時，進行判讀。

5 反應板清潔程度的影響

反應板用的時間長了，洗刷不及時或洗刷不徹底，有時使反應前后跳孔，無法判定結果，因此洗刷反應板時一定要細心。使用前要檢查一下反應板是否清潔。保持反應板清潔的方法是：在試驗做完后，要及時用水進行沖洗和甩干，反復兩次甩干后，V型孔的孔底無任何沉積物，方可干燥后使用，干燥時最好翻轉反應板以保持V型孔底無沉積物。使用數次的反應板應用蒸餾水浸泡過夜。對臟的反應板應先用1%鹽酸處理，再用1%火堿處理，最后用自來水漂洗，用蒸餾水浸泡過夜后烘干備用。

6 移液器的影響

在使用過程中，移液器常引起移液量的不準確，有時吸取的量不夠，有時排液量不充分，都影響監測的結果。移液器在使用時要注意量的準確，移液器嘴要緊，使用前在液體中反復吸排，吸排量相等，吸嘴內無液體滯留者為好用的，若吸頭內有液體滯留，則移液器不準。移液器用完后一定要回到松弛狀態，即擰到最大刻度。移液器不準時，可以維修，修不好就淘汰。

7 操作方法的影響

在操作過沖中常常因為人為因素造成結果不準確的現象，所以在操作中要盡量避免人為因素的影響。在稀釋血清時，要把移液器內的液體排空后，再吸出 25μl，排至下一孔去稀釋，依此類推。若吸嘴沒排空就稀釋下去，這樣可能使所測 HI抗體變高； 在移去液體時，移液器盡量呈垂直狀態；在倍比稀釋時，盡量使每孔稀釋的次數一致，并且每次稀釋次數至少 3次以上。HI值讀取在規定作用時間后進行， 紅細胞對照孔內紅細胞應完全沉淀， 抗原對照孔紅細胞應完全凝集，陽性血清對照孔紅細胞應完全沉淀( 即完全抑制凝集)，樣品檢測以完全凝集抑制為判定界限，作為判定標準。

總之，隨著養雞業的發展，雞病會越來越復雜，但雞新城疫在未來一段時間內仍是危害養雞業發展的重要疫病，因些準確地進行雞新城疫HI抗體的監測顯得非常重要，也會越來越普及，因此對影響雞新城疫HI抗體監測的因素應給予足夠的重視，以確保監測準確，有力地指導生產，減少雞新城疫對養雞業的損失。

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1007-1733(2014)06-0063-01

2014–03–31）