動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留檢測(cè)研究進(jìn)展

姚駿，李沛然，暴悅梅，王琦，曹菲菲

（1.天津市食品研究所有限公司，天津 301609；2.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津 300384）

氯霉素（chloramphenicol，CAP）又叫左旋霉素，是光譜類抗生素，在低濃度時(shí)即可抑制多種細(xì)菌的生長，特別是流感桿菌和腦膜炎球菌[1]。CAP廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)品養(yǎng)殖的病害防治，但其對(duì)人體有較大的毒副作用，主要表現(xiàn)為：抑制骨髓造血功能，引起再生障礙性貧血、細(xì)胞減少性貧血、血小板減少和粒狀白細(xì)胞減少[2]。

為了保障人民的身體健康以及擴(kuò)大農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易往來，建立靈敏高效的氯霉素殘留檢測(cè)方法對(duì)于保障人民身體健康以及擴(kuò)大農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易往來非常必要。

1 動(dòng)物源性產(chǎn)品中氯霉素殘留的檢測(cè)方法

1.1 微生物測(cè)定法

該方法可分為棉簽法、杯碟法等[3]。其原理是根據(jù)氯霉素對(duì)特定微生物的生理機(jī)能及代謝的抑制作用，定性或定量確定樣品中氯霉素殘留。梅先之等用棉簽法研究了鯉魚體內(nèi)氯霉素殘留，根據(jù)涂滿枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基上有無和大小判斷氯霉素殘留量，最低檢出限為1μg/g[4]。杯碟法是將處理過的樣品加入牛津杯，放置檢測(cè)培養(yǎng)基上，根據(jù)抑菌圈判斷氯霉素殘留，主要采用八疊球菌作為試驗(yàn)菌種[5]。焦彥朝[6]等用杯碟法檢測(cè)了鯉魚體內(nèi)氯霉素殘留，檢出限為0.20μg/g，平均回收率為67.5%。

1.2 色譜分析法

1.2.1 氣相色譜分析法

劉永濤[7]等用毛細(xì)管電子捕獲氣相色譜法測(cè)定了尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）和南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei）中氯霉素殘留量，氯霉素在 1.0μg/L～500.0μg/L濃度范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r≥0.9983，加標(biāo)濃度在0.2μg/kg～10.0μg/kg時(shí)，回收率為83.30%～101.22%。Allen[8]等研究了奶中氯霉素殘留的GC檢測(cè)方法，以m-CAP為內(nèi)標(biāo)，通過SylnoBFT衍生化，用電子捕獲檢測(cè)器（ECD）檢測(cè),檢測(cè)限達(dá)到1 g/kg。

1.2.2 液相色譜分析法

黃志勇[9]等利用高效液相色譜（HPLC）研究了水產(chǎn)品中氯霉素殘留，濃度在50μg/mL～1000μg/mL內(nèi),呈良好線性關(guān)系（R2=0.9994），檢出限為 0.014μg/g。T.L.Li[10]等以乙酸乙酯為提取液，蒸干后,再用氯化鈉溶解，正己烷脫脂，過C18SEP柱，278 nm檢測(cè),檢測(cè)限達(dá)到 5μg/kg,回收率為（95.6±4.5）%。

1.2.3 氣質(zhì)聯(lián)用分析法

劉宜孜[11]等報(bào)道了蜂蜜中氯霉素殘留的固相萃取氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)機(jī)法。結(jié)果表明不同濃度氯霉素的回收率都在90%以上,加標(biāo)的回收率為80%～95%，精密度（RSD）為 7.2%～18.2%，最低檢出限為 0.1μg/kg。謝孟峽[12]等采用氣質(zhì)聯(lián)用法研究了多種動(dòng)物組織樣品中氯霉素殘留。以乙酸乙酯和磷酸鹽緩沖溶液作為提取液，通過硅膠和C18固相萃取柱進(jìn)行凈化和富集。檢測(cè)結(jié)果為不同樣品的加標(biāo)回收率為80%～100%，檢出限為0.1μg/kg。Nagata[13]等用GC-MS研究了黃尾魚肌肉中氯霉素，氟氯霉素和甲礬霉素殘留。利用乙酸乙酯提取氯霉素，在Florisil小柱中用3∶7的甲醇-乙醚洗脫，在50℃條件下用BSA衍生10 min。質(zhì)譜采用EI源，檢測(cè)離子為m/z=208225。最終結(jié)果回收率高于65%，檢出限為 5μg/kg。

1.2.4 液質(zhì)聯(lián)用分析法

李資玲[14]等利用乙酸乙酯提取濃縮魚肉中的CAP，并且經(jīng)過正己烷脫脂凈化，利用HPLC-MS對(duì)樣品進(jìn)行外標(biāo)定量分析。結(jié)果表明：CAP濃度在0.04μg/kg～1.0μg/kg 范圍內(nèi)時(shí)，R2=0.9999，0.10、0.20、0.40μg/kg添加水平下的回收率為91.0%～100.1%（RSD：2.6%～4.1%），檢出限為 0.01μg/kg，定量限為 0.02μg/kg。Victor[15]等利用LC/MS檢測(cè)了多組織中的氯霉素殘留。前處理分別利用乙腈、丙酮提取組織和尿中的CAP，再過LMS固相萃取柱凈化。LC采用甲酸-甲醇作流動(dòng)相，MS使用大氣壓電離（API）模式，選擇離子m/z321（M-2H）檢測(cè)，結(jié)果顯示肌肉中檢測(cè)限為0.5μg/kg，回收率（95±0.48）%。田艷玲[16]等利用高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定牛奶中的氯霉素，乙腈除去蛋白，以MGⅢ-C18柱（2.1 mm×150 mm，1.8μm）反相分離，電噴霧負(fù)離子MRM模式檢測(cè)，檢出限為0.07μg/L，加標(biāo)回收率平均為103.4%。

1.3 免疫分析法

免疫分析法（immunoassays，IAs）是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法，主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫傳感器法、膠體金免疫層析法和磁微粒免疫分析法。

1.3.1 酶聯(lián)免疫法

譚慧[17]等利用間接酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）方法檢測(cè)水產(chǎn)品中CAP殘留，檢測(cè)限達(dá)到0.01μg/kg，兩種添加水平（0.5μg/kg 和 2.0μg/kg）的加標(biāo)回收率分別為72%～116%和86%～108%。馬玲[18]等以常規(guī)兩步式化學(xué)發(fā)光酶免疫法（CLEIA）為前提，采用同時(shí)加入一抗和二抗的方法，優(yōu)化包被條件和競(jìng)爭反應(yīng)時(shí)間，形成了一步式CAP檢測(cè)方法，且最優(yōu)條件下檢測(cè)限為0.01μg/L，同常規(guī)兩步式方法相比，檢測(cè)時(shí)間縮短1.5 h。

1.3.2 免疫傳感器法

張麗君[19]等建立了分子印跡電化學(xué)傳感器的CAP檢測(cè)法，以鄰苯基酚為功能單體，CAP分子印跡聚合物（MIP）膜通過電化學(xué)聚合方法在Pt電極上制備，結(jié)果表明最優(yōu)條件下CAP線性范圍為4.33×10-8mol/L～3.09×10-6mol/L，檢出限為 2.5×10-8mol/L。Agül L[20]等建立活性炭微電極的氯霉素電化學(xué)檢測(cè)法，檢出限為15ng/mL，測(cè)試樣品的回收率均在97%以上。

1.3.3 膠體金免疫層析法

宋紅波[21]等利用膠體金技術(shù)檢測(cè)了雞肉、魚肉和蝦肉中CAP殘留，加標(biāo)在0.5μg/kg及以上的樣品均能用膠體金試劑盒測(cè)出，并且用氣象色譜法驗(yàn)證，并未出現(xiàn)假陽性情況。張燕[22]等建立并優(yōu)化了滲濾式和側(cè)流式兩種免疫膠體金法，靈敏度分別達(dá)到0.8μg/L和1μg/L，通過酶聯(lián)免疫試驗(yàn)驗(yàn)證了其有效性，并利用加速穩(wěn)定試驗(yàn)證明了滲濾式試紙條可在6個(gè)月內(nèi)4℃下保持結(jié)果可靠性。

1.3.4 磁微粒免疫分析法

黃薇[23]通過對(duì)比8種國內(nèi)外超順磁性納米微粒特性，篩選出適合磁性免疫分析的磁球，并且通過免疫層析條件優(yōu)化，建立起一種快速檢測(cè)氯霉素的磁微粒免疫層析新方法，檢出限達(dá)到4ng/mL。王西麗[24]等利用C18-磁性納米顆粒萃取蝦肉中氯霉素，得出最佳萃取條件為50℃結(jié)合5 min，甲醇洗脫3次，檢出限達(dá)到0.1μg/kg，并且在 0.1μg/kg～10μg/kg 范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.9941。

2 問題和展望

色譜法靈敏度相對(duì)較高，結(jié)果準(zhǔn)確，但是前處理比較復(fù)雜，成本較高，適合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。免疫分析法相對(duì)更加快速，成本低，適合大批量的快速檢測(cè)，滿足現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和基層檢測(cè)的要求，并且隨著新技術(shù)和新材料的出現(xiàn)，如磁微粒，氯霉素的檢測(cè)會(huì)更加準(zhǔn)確快速。

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