朝醫方千金文武湯提取工藝優化

楊金葳 林 瑩 通訊作者：郭建鵬

（1.長春金賽藥業有限責任公司，吉林 長春130012 2.長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室（延邊大學 ））

目前臨床使用朝醫經典方劑千金文武湯（《東醫四象新編》）用于治療糖尿病（Diabetes mellitus，DM）具有顯著療效。本文以該方劑藥味中共有活性部位總黃酮的提取量為指標，優選最佳提取工藝。

儀器與試藥

UV-2201型紫外可見分光光度計（日本島津制作所）；FA2004型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；蘆丁（購自中國藥品生物制品檢驗所，批號：818-9401）；藥材為：葛根（Pueraria lobata［willd.］ohwi）、黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）、山藥（Dioscorea opposita Thunb.）、麥門冬（Ophiopogon japonicus［Thumb.］Ker-Gawl.）、五味子（Schisandra chinesis［Turcz.］Bail）、桔梗（Platycodon grandiflorum［Jacq.］A.DC.）、白芷（Angelica dahurica［Fisch.ex Hoffm.］Benth.et Hook.f.）；水為純水，其他試劑均為分析純。

方法與結果

1.處方分析：千金文武湯處方由葛根、山藥、黃芩、麥門冬、五味子、桔梗、白芷七味藥組成，具有補肺斂肺、潤燥化痰、生津解表的功效，主要用于太陰人下消，小便不禁等證［1］，目前朝醫臨床常用其治療DM。方中主藥葛根中黃酮類成分葛根素［2］、黃芩中黃酮類成分黃芩苷［3，4］有明確降血糖或降血脂作用。故以葛根、黃芩為主，結合其他藥味，選擇總黃酮為該方劑提取的指標成分。

總黃酮含量測定方法學考察：采用紫外分光光度法，建立總黃酮含量的測定方法［5］。

2.溶液的配制。

對照品溶液：精密稱取干燥至恒重的蘆丁5.7mg，用適量水溶解后定容至100ml，即得。

樣品溶液：稱取處方量藥材，加入12倍量水浸泡1h，加熱煎煮提取1h，濾過，再加入10倍量水提取1h，濾過，合并濾液，定容至1 200ml，即得。

供試品溶液：精密吸取樣品溶液1ml于蒸發皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于恒重干燥箱中，50℃揮干溶劑，轉入層析柱，用30 ml石油醚洗脫，棄石油醚，再用30ml甲醇洗脫總黃酮，收集洗脫液，減壓蒸干，殘渣用甲醇溶液溶解并定容至25ml即得。

3.線性關系的考察：精密量取對照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 ml至10 ml容量瓶中，用水定容，在256nm處測定吸光度。以吸光度值（Y）對濃度（X）進行回歸，得到其回歸方程。結果表明，對照品溶液濃度與吸光度值呈良好的線性關系。

4.精密度考察：精密量取上述對照品溶液，重復測定5次，RSD為0.77%，表明儀器精密度良好。

5.穩定性考察：精密量取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h進行測定，RSD為0.91%，表明供試品溶液在24h內穩定。

6.重現性考察：精密稱取同一批樣品溶液5份，按供試品溶液項下制備，按上述方法測定，RSD為0.95%，表明本法重現性良好。

7.加樣回收率考察：精密量取已知含量的樣品溶液共6份，分別精密加入對照品適量，按供試品溶液項下制備，測定，計算回收率。本法平均回收率為97.77%，RSD為1.54%，表明本法準確度較好，方法可行。

8.樣品濃度與吸光度線性關系考察：精密量取1ml樣品溶液，用蒸餾水定容至50 ml，分別精吸1、2、3、4、5ml置10ml容量瓶中，用蒸餾水定容，在256nm處測吸光度值。以吸光度值（Y）對濃度（X）進行回歸，得其回歸方程。結果表明，樣品濃度與吸光度值呈良好的線性關系，表明以總黃酮含量作為樣品測定指標合理、可行。

提取工藝優化

1.試驗方案的設計：采用正交設計試驗，以樣品中總黃酮含量為評價指標，優選最佳提取工藝。復方制劑實際生產中提取次數一般為2次，所以在提取工藝中，提取時間、溶劑用量是影響總黃酮提取量的主要因素。因此，選用L4（22）正交設計安排實驗。因素水平設置見表1，正交實驗安排及結果見表2。

表1 正交設計因素水平設置

表2 正交實驗安排及結果

結果分析：以各實驗組總黃酮的含量為指標進行分析，方差分析結果見表3。

表3 方差分析結果

結果表明，在所選因素的水平范圍內，因素A（提取時間）、B（溶劑用量）對總黃酮提取量均無顯著性影響。通過正交試驗所得結果進行直觀選擇，最佳提取工藝為A2B1，即提取時間為90min／45min，溶劑用量為12倍／10倍。

2.驗證性實驗：按照上述優化提取工藝進行提取，重復進行3次平行試驗，測得樣品中總黃酮含量為（3.532±0.05）mg／g，與正交實驗最大值3.635mg／g接近，表明該工藝穩定、可行。

討論

本文采用紫外分光光度法作為千金文武湯的含量測定方法，結果平均回收率為97.77%，RSD為1.54%，表明此法準確、可靠，可用于總黃酮的含量測定。優化的最佳提取工藝為：提取時間為90min／45min，溶劑用量為12倍／10倍。

［1］金海龍.綜述近十年朝醫藥學術進展［J］.中國民族醫藥雜志，2009，15（5）：71-73.

［2］王建超，雷婷，王聰，等.葛根素在治療糖尿病中的藥理作用［J］.醫學綜述，2009，15（20）：3171-3173.

［3］李玉萍，劉建濤，熊向源，等.黃芩素的制備及抗糖尿病研究概況［J］.安徽農業科學，2009，37（32）：15648-15654.

［4］楊娟，傅軍鵬.黃芩活性成分及藥效研究近況［J］.實用醫藥雜志，2004，21（3）：271-273.

［5］朱華，唐桂興，張可鋒.基于紫外分光光度法的金花茶葉中總黃酮含量的測定［J］.安徽農業科學，2010，38（9）：4559-4561.