京萬紅凝膠劑對大鼠神經變性型糖尿病足的影響*

劉玉璇，趙 宇，國大亮，陳 柳，劉文偉

（1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津達仁堂京萬紅藥業有限公司，天津 300112）

京萬紅凝膠劑對大鼠神經變性型糖尿病足的影響*

劉玉璇1，趙 宇2，國大亮1，陳 柳1，劉文偉2

（1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津達仁堂京萬紅藥業有限公司，天津 300112）

[目的]觀察京萬紅凝膠劑對大鼠神經變性型糖尿病足的影響。[方法]采用神經變性型糖尿病足潰瘍模型，觀察京萬紅凝膠劑對模型大鼠的影響。[結果]1）采用京萬紅凝膠劑、油膏劑，重組人表皮生長因子分別給藥，各給藥組給藥14 d后，給藥各組與模型組相比，均有明顯的好轉。2）各給藥組均有改善大鼠神經變性型糖尿足癥狀的趨勢，病灶逐漸減小，炎癥逐漸減輕，基本趨于正常。[結論]在該實驗條件下，京萬紅凝膠劑與京萬紅油膏劑、重組人表皮生長因子具有相同的促進大鼠神經變性型糖尿足病灶愈合的作用。

京萬紅；凝膠劑；神經變性型；糖尿足

1 實驗材料

1.1 實驗動物 雄性Wistar大鼠：北京維通利華實驗動物有限公司，合格證號SCXK（軍）2007-004，體質量220～240 g。

1.2 實驗試劑 1）鏈尿佐菌素（Sigma公司，貨號：S0310）。2）檸檬酸（Sigma公司，貨號：S1804-500G）。3）檸檬酸鈉（Sigma公司，貨號：C1909-500G）。4）京萬紅軟膏（天津達仁堂京萬紅藥業有限公司，批號：211485）。5）京萬紅凝膠劑（自制）。6）重組人表皮生長因子凝膠（中國華諾威基因藥業有限公司，批號：20110905）。

1.3 實驗儀器 PHS-3C型酸度計，蕭山市分析儀器廠。

2 實驗方法

2.1 大鼠糖尿病模型的復制 選用Wistar大鼠90只，雄性，體質量220～240 g，編為1～90號。造模前大鼠禁食不禁水24 h，造模時稱量大鼠空腹體質量，據大鼠總體質量稱量所需的鏈脲菌素（STZ），用配置好的無菌檸檬酸緩沖液（pH 4.35，酸度計測得）以1%濃度（質量分數）配制獲得所需的STZ溶液，根據大鼠空腹體質量，以60 mg/kg體質量腹腔快速注射相應劑量的STZ（STZ稱質量，配制，注射時注意避光，30 min內注射完畢）。1周后尾尖取血，用中生北控試劑公司提供的葡萄糖試劑盒測定空腹血糖，排除血糖值小于16.65 mmol/L的大鼠，血糖值達標的大鼠喂養1個月，期間保持足夠的飲水量及飼料，每天清潔1次衛生，環境溫度為（25±2）℃。

2.2 大鼠糖尿病足模型的復制 高糖Wistar大鼠在飼養1個月后，建立神經變性型糖尿病足潰瘍模型。大鼠俯臥位，50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉，沿坐骨神經走向切開長約1.5～2.0 cm的切口，分離皮下肌肉層，暴露坐骨神經。用中號止血鉗在坐骨神經分叉處上方0.5 cm處夾持，滿扣，1 min（鉗壓強度：鉗子的第2段）。然后逐層縫合。

2.3 實驗分組及給藥 造模21 d后，待大鼠足部出現潰瘍后，按照大鼠體質量、血糖及造模后瓦格納分級結果，將大鼠按分層隨機方法分為4組：糖尿病模型組（10只），京萬紅油膏劑（10只），京萬紅凝膠劑組（10只），重組人表皮生長因子組（rhEGF，10只）另外10只糖尿病正常組作為對照。給藥劑量見表1。

各組大鼠足部于分組1 d后按表1劑量每天上午9∶00給藥1次，給藥14 d。換藥前用溫水清潔創面，擦干后給藥，并用無菌紗布包扎。

表1 各組別給藥劑量表Tab.1 Table of administration dosage in each group

2.4 大鼠體質量和血糖的測量 分別于分組前和給藥14 d后對各組大鼠的體質量和血糖進行測量并記錄結果。

2.5 瓦格鈉分級 記錄各組大鼠分組后，給藥5 d后，10 d后，14 d后瓦格納分級結果。分數代表了足部潰瘍的程度，分數越小，足部損傷程度越小，越接近正常組織。

其三，從人均收入來看，我市人均生產總值、城市居民人均可支配收入、農村住戶人均純收入近年來都呈現上升趨勢，但三者增長并不同步。人均生產總值增長快于城市居民人均可支配收入，城市居民人均可支配收入增長又快于農村住戶人均純收入，使居民難以充分享受經濟增長帶來的好處，也使城鄉居民收入差距有進一步拉大的可能。

分級標準：0級：皮膚完整無開放性病灶，僅有肢端供血不足，皮膚冷涼呈暗紅色伴有麻木、刺痛、灼痛，感覺遲鈍或喪失，并有足趾或足畸形。1級：皮膚有開放性淺病灶，但未累及深部，如水泡、血泡、腫脹雞眼或胼胝，及其他損傷所致的皮膚淺表潰瘍。2級：感染皮損病灶已侵犯深部肌肉，膿性滲出物較多，但無肌腱、韌帶破壞常表現為蜂窩組織炎,多發性膿灶或竇道形成,感染順肌間隙擴展,形成足部貫通性潰瘍。3級：肌腱韌帶受損，蜂窩組織炎相互融合形成大膿腔，膿性物及壞死組織增多，但無明顯骨質破壞。4級：嚴重感染導致骨質破壞、缺損、骨髓炎、骨關節破壞或假關節形成，部分肢端出現濕性或干性壞疽。5級：足大部或全部感染或缺血,致嚴重的濕性或干性壞死，肢端變黑、尸干，常波及踝關節和小腿，一般需截肢。

2.6 大體形態觀察 分別于分組后和給藥14 d后對各組大鼠足部進行觀察。

2.7 統計學方法 應用SPSS 18.0統計軟件進行數據處理，計量資料以均數±標準差（±s）表示，正態分布計量資料組間比較采用單因素方差分析（one－way ANOVA），偏態分布計量資料組間比較采用秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 大鼠體質量和血糖的測定結果 各組大鼠的空腹血糖均在16.7mmol/L以上，并且分組后和給藥14d后，各組大鼠的體質量和血糖均無統計學差異，表明各給藥組無明顯的降低血糖的作用。各組大鼠血糖和體質量測定結果見表2。

表2 大鼠體質量和血糖測定結果（±s）Tab.2 Determination results of body weight and blood glucose in rats（±s）

表2 大鼠體質量和血糖測定結果（±s）Tab.2 Determination results of body weight and blood glucose in rats（±s）

14 d后 分組后 給藥14 d后糖尿病正常組 10 198.5±18.8 182.6±17.3 31.6±3.9 30.0±3.7糖尿病模型組 10 209.4±16.1 192.7±14.9 32.6±3.3 31.0±3.1京萬紅油膏劑 10 210.7±19.5 193.9±18.0 33.5±3.1 31.8±2.9京萬紅凝膠劑組 10 190.6±18.0 175.3±16.6 30.1±4.0 28.6±3.8重組人表皮生長組10 211.1±15.3 194.2±14.1 32.3±3.7 30.7±3.6組別 n體質量（g） 血糖（mmol/L）分組后 給藥

3.2 瓦格納分級的結果 由表3可以看出，分組后，各給藥組間足部損傷程度一致，給藥14d后，給藥組病灶基本愈合，糖尿病模型組多數出現嚴重感染如大膿腔或部分肢端出現斷肢或壞死。

表3 瓦格納分級結果（±s）Tab.3 Results of Wagner classification（±s） 分

表3 瓦格納分級結果（±s）Tab.3 Results of Wagner classification（±s） 分

注：與糖尿病正常組比較，*P＜0.05；與糖尿病模型組相比較，＃P＜0.05。

組別糖尿病正常組糖尿病模型組京萬紅油膏劑京萬紅凝膠劑組重組人表皮生長組n 10 10 10 10 10分組1 d后 給藥14 d后0 0 1.32±0.18* 2.89±0.39* 1.35±0.13* 0.62±0.39*＃1.21±0.16* 0.58±0.38*＃1.29±0.15* 0.57±0.42*＃

3.3 大體觀察的結果 見圖1～5。

由圖可見，隨著給藥天數的增多，糖尿病模型組的感染病灶已侵犯深部肌肉組織，壞死組織增多，見圖2，而各藥組均有改善癥狀的趨勢，病灶逐漸減小，炎癥逐漸減輕，基本趨于正常，見圖3～5。

圖1 正常組Fig.1 Control group

4 小結

各組大鼠的空腹血糖均在16.7 mmol/L以上，并且分組后和給藥14 d后，各組大鼠的體質量和血糖均無統計學差異，表明各給藥組無明顯降低血糖的作用。

瓦格納分級的結果顯示，分組后，各給藥組間足部損傷程度一致，給藥14 d后，給藥各組與模型組相比，均有明顯的好轉。

從足部大體觀察可以看出，隨著給藥天數的增多，模型組的感染病灶已侵犯深部肌肉組織，壞死組織增多，而各藥組均有改善癥狀的趨勢，病灶逐漸減小，炎癥逐漸減輕，基本趨于正常。

圖2 糖尿病模型組Fig.2 Diabetic model group

圖3 京萬紅組Fig.3 Jingwanhong group

圖4 京萬紅凝膠組Fig.4 Jingwanhong gel group

圖5 重組人表皮生長因子組Fig.5 Human epidermal grouth factor group

5 討論

糖尿病足的發病率占糖尿病患者的49.5%[7-8]，是糖尿病大血管并發癥之一，發生糖尿病足的患者約有5%～10%需要截肢。目前主要認為是由于神經病變、血管病變及感染等3種因素共同作用所致。其中，周圍神經病變的發生率約為30%～45%，下肢最為常見。血管病變是糖尿病并發足壞疽的重要病理基礎，在免疫力低下及易受外傷等因素的作用下極易感染，糖尿病足患者感染嚴重程度在臨床上與截肢（趾）率呈正相關[9-10]。

中醫學認為，糖尿病足屬于“脫疽”范疇，常因臟腑功能失調，肝脾腎虧虛，加之外邪侵襲而致。脾氣不健，化生不足，氣血虧虛，不能充養四肢，腎陽不足，不能溫煦四肢，導致熱盛肉腐終成潰瘍，壞疽[11-13]。京萬紅原劑型為復方純中藥油膏劑，主要成分為地榆、當歸、黃連、黃柏、紅花、黃芩、梔子、川芎等30余種中藥，以清熱解毒代表方黃連解毒湯為基礎[14]，又加入具有活血止痛，清熱解毒，化瘀通絡功效的多味中藥。治法體現了中藥外治法治療糖尿病足的4個原則，即清熱解毒法[15-16]，活血通絡法[17-18]，溫通經脈法[19]和祛腐生肌法[20]，臨床使用取得了很好的祛腐生肌，減輕疼痛的效果[2-3，21]。

本次兩種劑型影響大鼠神經變性型糖尿病足潰瘍模型的實驗中發現，京萬紅凝膠劑與京萬紅油膏劑、重組人表皮生長因子[22]具有相似的促進大鼠神經變性型糖尿足病灶愈合的作用，為該藥新劑型的開發提供了實驗依據。

[1]李永平,趙士美,楊長林.京萬紅的基礎研究及臨床應用[J].中成藥,1992,34(12):23-24.

[2]王海博,朱 霞，車樹強.京萬紅膏和玉紅膏在治療糖尿病足濕性壞疽中的療效對比[J].中華中醫藥雜志，2011,26（12）：3017-3019.

[3]丁雄飛.馬應龍痔瘡膏聯合京萬紅軟膏治療糖尿病足22例[J].中醫外治雜志，2009,18（4）:18-19.

[4]王冬梅，蘇文昭，于大勇，等.中西醫結合治療糖尿病足30例臨床觀察[J].中國臨床醫生,2013,41(2):61-62.

[5]艾慶波，趙 宇，國大亮，等.均勻設計優化京萬紅超臨界萃取工藝研究[J].化學工業與工程，2012,29（2）:24-27.

[6]黃秋霞，潘 超，趙 宇，等.不同促滲劑對京萬紅中沒食子酸透皮吸收的影響[J].天津中醫藥，2013,30（4）:242-244.

[7] 鄧堯利.糖尿病足的臨床護理體會[J].實用醫技雜志,2005，12(2): 385.

[8] Michael EE，Alethea VM Foster,Lee J Sanders.于德民，王鵬華譯.糖尿病足診治實踐彩色圖解[M].天津:天津科學技術翻譯出版公司，2006:123.

[9] 于秀辰.中西醫結合治療糖尿病足[M].北京:人民衛生出版社，2009:58.

[10]中華醫學會糖尿病學分會.中國2型糖尿病防治指南·2007年版[J].中華醫學雜志，2008,88(18):1237.

[11]國際糖尿病足工作組.糖尿病足國際臨床指南[S].北京：人民軍醫出版社，2004：416.

[12]王洪武，王玉興.2型糖尿病證候研究規律的思考[J].天津中醫藥大學學報,2011,30(1):6-8.

[13]楊彩鳳，曹 茜，沈永明.2型糖尿病中醫證候研究進展[J].天津中醫藥大學學報,2008,27(2):106-109.

[14]潘 超,李亞楠,國大亮,等.黃連解毒湯的藥效學研究進展[J].天津中醫藥，2013,30(5):315-317.

[15]尚文斌，錢筱雨，劉 佳.清熱解毒法治療糖尿病慢性炎癥狀態的研究進展[J].中國中醫基礎醫學雜志，2012,18（10）:1172-1174.

[16]李 治.養陰清熱解毒法治療Ⅱ級糖尿病足療效觀察[J].世界中西醫結合雜志,2013,8(10):1049-1051.

[17]王自輝,王曉媛,張雅蘭，等.清熱解毒活血通絡法治療糖尿病足的研究[J].中國中西醫結合雜志，2013,33（4）:480-483.

[18]晁衛紅，胡志華.活血通絡法治療糖尿病周圍神經病變臨床研究[J].山東中醫雜志，2012,31（5）:320-321.

[19]張廣輝,徐大鵬.涼血散瘀法與溫通經脈法辨治糖尿病周圍神經病變[J].北京中醫,2001,20（5）：54.

[20]劉曉霞，魏愛生，林 旋.玉紅膏外敷治療糖尿病足祛腐生肌期療效觀察[J].新中醫,2012，44(2):43-44.

[21]于秀辰,婁樹靜,趙 溥.內治法與外治法聯合應用治療感染性糖尿病足[J].北京中醫藥大學學報,2011,18(1):39-41.

[22]安宏元，陳杰翔.重組人表皮生長因子不同劑型作用于糖尿病潰瘍動物模型的療效比較[J].中國現代醫藥雜志,2010,12,(10):82-85.

Effect of Jingwanhong gel on neural degeneration in rats with diabetic foot

LIU Yu-xuan1，ZHAO Yu2，GUO Da-liang1，CHEN Liu1,LIU Wen-wei2
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193,China；2.Tianjin Darentang Jingwanhong Pharmaceutical CO., Ltd.，Tianjin 300112,China）

[Objective]To observe the effect of Jingwanhong gel on neural degeneration in rats with diabetic foot.[Methods]We used a model with neural degeneration of diabetic foot ulcer to observe the effect of Jingwanhong gel in the diseased rats.[Results]1）Jingwanhong gel,ointment and recombinant human epidermal growth factor were administered separately.Fourteen days later,the disease was better in the treatment groups compared with model group significantly.2）The treatment group had improved neural degeneration in rats with type 2 diabetes foot symptoms.Lesions were gradually decreased.Inflammation was reduced gradually.The pathologic change was tended to normal.[Conclusion]Under the condition of this experiment,Jingwanhong gel and Jingwanhong ointment,recombinant human epidermal growth factor have the same effect in promoting the healing of rat neural degeneration and diabetic foot lesions.

Jingwanhong;gel;nerve degeneration;diabetic foot

R587.2

A

1672-1519（2014）10-0617-04

2013-04-22）

（本文編輯：馬 英，高 杉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.10.11

科技部科技人員服務企業行動資助項目（2009 GJA10033）。

劉玉璇（1969-），男，博士，教授，從事中藥制藥、制藥工程研究。