良性前列腺增生癥患者外周血中CD8+CD28-T細胞的表達及意義

張立國 么安亮 高海洋 康紹叁 曹鳳宏 高偉興 劉 健 王 磊 李曉強

河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科（唐山 063000）

良性前列腺增生癥患者外周血中CD8+CD28-T細胞的表達及意義

張立國 么安亮 高海洋 康紹叁 曹鳳宏 高偉興 劉 健 王 磊 李曉強

河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科（唐山 063000）

目的探索CD8+CD28-細胞群在前列腺增生癥（BPH）患者外周血中的表達及意義。方法用流式細胞儀檢測患者（51例）和正常男性（51例）外周血中CD8+CD28-細胞群的比例，然后進行統(tǒng)計分析。結(jié)果BPH患者外周血中CD8+CD28-細胞群的平均比例明顯高于正常男性外周血中CD8+CD28-細胞群的平均比例（P＜0.01），BPH組CD8+CD28-細胞群在CD8+細胞群中所占平均比率也明顯升高（P＜0.01）。結(jié)論 CD8+CD28-細胞群參與BPH的發(fā)生和發(fā)展，進而為其發(fā)病機制的研究奠定了基礎(chǔ)。

前列腺增生; CD8+CD28-; T淋巴細胞,調(diào)節(jié)性

良性前列腺增生癥（Benign Prostatic Hyperplasia, BPH）是老年男性常見病，發(fā)病率高，目前已確定其發(fā)病與高年齡和有功能的睪丸有密切聯(lián)系。組織學(xué)上表現(xiàn)為間質(zhì)和腺體的增生，外觀上表現(xiàn)為前列腺體積的增大，臨床上以下尿路癥狀為主，有尿頻、尿急，夜尿增多、排尿等待、尿末滴瀝等癥狀，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。至今有關(guān)BPH的發(fā)病機制尚未明確，有關(guān)其學(xué)說在不斷增多，如激素內(nèi)分泌學(xué)說，細胞因子學(xué)說，上皮間質(zhì)相互作用學(xué)說，免疫調(diào)節(jié)紊亂學(xué)說等，隨著對BPH的深入研究，許多研究都聚焦在免疫調(diào)節(jié)紊亂學(xué)說[1]。研究表明[2]，BPH組織中有大量T淋巴細胞的浸潤，其中T淋巴細胞的平衡紊亂倍受關(guān)注，故本實驗通過檢測BPH患者外周血中CD8+CD28-細胞群表達的變化，明確其在BPH中的意義。

資料與方法

一、一般資料

從2013年2月到2013年10月在我院抽取51例臨床確診的BPH患者，平均年齡57歲；再抽取51例健康男性，平均年齡60歲。研究對象納入標準：（1）BPH組，前列腺體積＞20cm3，經(jīng)肛門用超聲波測定前列腺三徑的長度，運用前列腺體積計算公式進行計算：前列腺體積=0.52×前列腺前后徑×前列腺左右徑×前列腺上下徑；最大尿流率＜15mL，排尿量150～200mL，國際前列腺癥狀評分（IPSS）＞7。（2）健康男性組，前列腺體積＜20cm3，方法同上；最大尿流率＞15mL，排尿量150～200mL，無下尿路癥狀。CD8-FITC及CD28-PE鼠抗人抗體（美國BD公司）；流式細胞儀（FACS1Calibur）；離心機（sigma3K30）。

二、檢測指標及方法

對符合納入標準的研究對象用EDTA采血管進行采血，均抽取2mL，低溫儲存并盡快用流式細胞儀檢測實驗指標。具體操作步驟：（1）在實驗專用小試管內(nèi)加入100μl抗凝血。（2）加入CD8+-FITC和CD28-PE雙色熒光標記的抗體20μl，4℃避光孵育1h。（3）加入1mL紅細胞裂解液。（4）待紅細胞充分裂解后，上流式細胞儀進行檢測。（5）采用Cell Quest軟件進行檢測分析，對淋巴細胞進行設(shè)門，檢測門內(nèi)淋巴細胞群中CD8+CD28-細胞群的比例。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

結(jié) 果

BPH組CD8+CD28-T淋巴細胞群的平均比例（20.51±5.81）%與對照組該細胞群的平均比例（8.55±1.29）%相比較明顯升高（P＜0.01）；BPH組CD8+CD28+T淋巴細胞群的平均比例（13.28±3.20）%與對照組該細胞群的平均比例（24.80±2.50）%相比較明顯降低（P＜0.01）；BPH組CD8+CD28-T淋巴細胞群在CD8+T淋巴細胞群中所占的平均比值 （6.00±0.90）與對照組該細胞群在CD8+T淋巴細胞群中所占的平均比值（2.60±0.30）相比明顯升高（P＜0.01）；BPH組CD8+CD28-T淋巴細胞群與CD8+CD28+T淋巴細胞群的比值的平均值（16.22±5.42）和對照組CD8+CD28-T淋巴細胞群與CD8+CD28+T淋巴細胞群的比值的平均值（3.48±0.62）相比明顯升高（P＜0.01）；BPH組CD8+T淋巴細胞群的平均比例（33.80±6.65）%與對照組該細胞群的平均比例（33.35±2.84）%相比無變化（P＞0.05）。具體結(jié)果見表1，圖1和圖2。

圖1 兩組各項指標的比較

表1 兩組患者外周血中CD8系列細胞群比例的比較

討 論

BPH是一種老年男性疾病，也是一種常見病，嚴重影響患者的日常生活。而免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能和生物學(xué)功能與BPH的發(fā)生和發(fā)展過程有著密切聯(lián)系[3]。諸多研究表明[4,5]，絕大多數(shù)BPH組織中有炎細胞浸潤，主要為淋巴細胞。研究發(fā)現(xiàn)，BPH患者外周血中T淋巴細胞發(fā)生明顯改變，認為BPH與免疫炎癥有關(guān)聯(lián)[6]。而CD8+CD28-T細胞和CD8+CD28+T細胞均為T淋巴細胞亞群，CD8+CD28-細胞群是一種抑制性T細胞，CD8+CD28+細胞群是一種殺傷性T細胞，兩者在免疫反應(yīng)中起著相互對立的作用。

圖2 流式結(jié)果圖

本實驗結(jié)果顯示，首先BPH組CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T淋巴細胞群的平均比例較對照組該細胞群的平均比例明顯升高（P＜0.01），表明CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T淋巴細胞群在BPH患者中反應(yīng)性升高，即新激活的CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T淋巴細胞群擴增，從免疫學(xué)角度可以解釋為一種自身免疫保護狀態(tài)。同時也表明BPH伴隨有免疫炎癥反應(yīng)，這一觀點與前人所得結(jié)論一致。其次結(jié)果還表明，BPH組CD8+CD28+效應(yīng)性T淋巴細胞群的平均比例與對照組該細胞群的平均比例相比較相對降低（P＜0.01），CD8+CD28+效應(yīng)性T淋巴細胞群的功能就是破壞正常細胞同時釋放大量炎癥介質(zhì)，它的減少可以理解為被反應(yīng)性升高的CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T淋巴細胞群所抑制，這一觀點也證明BPH的發(fā)生伴隨免疫炎癥反應(yīng)，與前人觀點一致。此外，BPH組CD8+CD28-T淋巴細胞群在CD8+T淋巴細胞群中所占的平均比值與對照組該細胞群在CD8+T淋巴細胞群中所占的平均比相比明顯升高（P＜0.01），BPH組CD8+T淋巴細胞群的平均比例較對照組該細胞群的平均比例無變化（P＞0.05），兩者再一次證明CD8+CD28-抑制性T淋巴細胞群在BPH的發(fā)生中比例升高。研究結(jié)果同時顯示，BPH組CD8+CD28-抑制性T淋巴細胞群與CD8+CD28+效應(yīng)性T淋巴細胞群的比值的平均值與對照組該比值的平均值相比較升高（P＜0.01），一方面表明反應(yīng)性升高的抑制性CD8+CD28-T淋巴細胞群對效應(yīng)性CD8+CD28+T淋巴細胞群起到抑制的作用，還有前列腺炎癥的出現(xiàn)，表明CD8+CD28-抑制性T淋巴細胞群在BPH中的抑制功能較正常男性減弱；另一方面，兩者的平衡性遭到破壞，說明BPH的發(fā)生和發(fā)展中伴隨有免疫炎癥反應(yīng)[2]，這一觀點免疫穩(wěn)態(tài)遭到破壞導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的機制，也符合前人所得結(jié)論。

總之，本實驗結(jié)果提示CD8+CD28-抑制性T淋巴細胞群和CD8+CD28+效應(yīng)性T淋巴細胞群參與BPH的發(fā)生和發(fā)展，一方面說明BPH的發(fā)生和發(fā)展伴隨炎癥反應(yīng)，另一方面提示CD8+CD28-抑制性T淋巴細胞群和CD8+CD28+效應(yīng)性T淋巴細胞群在BPH的發(fā)病機制中發(fā)揮了一定的影響作用，這些結(jié)果為BPH發(fā)病機制的進一步研究奠定了基礎(chǔ)，也為該病的診斷和治療提供了新依據(jù)。

1 Gero Kramer, Dieter Mitteregger, MarbergerM. Is Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) an Immune Inf ammatory Disease?Eur Urol2007; 5l(5): 1202-1216

2 Oliveim JB, Bidere N, Niemela JE,et a1. NRAS mutation causes a human autoimmune lympho-proliferative syndrome.Proe Natl Acad Sci USA2007; 104(21): 8953-8958

3 Steiner GE, Ojavail B, Ramer QK,et a1. The picture of the prostatic lymphokine network is becoming increasingly complex.Rev Urol2002; 4(2): 171-177

4 Blumenfeld W, Tucci S, Narayan P. Incidental Lymphocytic Prostatitis: Selective Involvement with Nonmalignant Glands.T Am J Surg Pathol1992; 16(4): 975-979

5 Gerstenbluth RE, Sefiela D, Maclennan GT,et a1. Distribution of chronic prostatitis in radical prostatectomy specimens with up-regulation of bel-2 in areas of inf ammmion.J Urol2002; 67(1): 2267-2270

6 張旭, 王少剛, 周四維, 等. 前列腺增生癥的淋巴細胞表型分析. 中華實驗外科 1998; 15(2): 136-137

（2013-12-08收稿）

Number of CD8+CD28-T lymphocytes in peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia and its clinical signif cance

Zhang Liguo, Me Anliang, Gao Haiyang, Kang Shaosan, Cao Fenghong, Gao Weixing, Liu Jian, Wang Lei, Li Xiaoqiang
Urinary Surgery of Aff liated Hospital of Hebei Union University, Tangshan 063000, China

ObjectiveTo investigate the number of CD8+CD28-T cells in peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia and its clinical signif cance.MethodsPercentages of CD8+CD28-T cells in the peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia(51 cases) and normal men(51 cases) were determined by f ow cytometry, which were analyzed with statistical means.ResultsAverage percentage of CD8+CD28-T cells in the peripheral blood of patients with benign prostatic hyperplasia was obviously higher than that in the peripheral blood of the control group(P<0.01). Mean ratio of CD8+CD28-T cells and CD8+T cells of patients with benign prostatic hyperplasia also increased significantly, compared with that of the control group(P<0.01).ConclusionCD8+CD28-T cells involved in the occurrence and development of benign prostatic hyperplasia, which layed a foundation for the research of pathogenesis of benign prostatic hyperplasia.

prostatic hyperplasia; CD8+CD28-; T lymphocytes, regulatory

10.3969/j.issn.1008-0848.2014.04.003

R 697.32