RP-H PLC測定鹽酸二甲雙胍腸溶片的含量

周平 童卉琦 白金 趙明明 金向群

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130012）

RP-H PLC測定鹽酸二甲雙胍腸溶片的含量

周平 童卉琦 白金 趙明明 金向群

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130012）

目的：依《中國藥典》所述鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊含量測定的方法，對鹽酸二甲雙胍腸溶片含量測定方法進(jìn)行研究。方法：采用 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動相為0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用10%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（84∶16），柱溫：30℃，檢測波長232 nm。結(jié)果：鹽酸二甲雙胍在2.335～37.36 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率為100.34%（n=9）。結(jié)論：藥典所述腸溶膠囊的含量測定方法簡便準(zhǔn)確，靈敏度高，專屬性好，不僅能夠用于腸溶膠囊的測定，同時也能夠用于鹽酸二甲雙胍腸溶片的質(zhì)量控制。

鹽酸二甲雙胍；反向高效液相色譜法；含量測定

雙胍類降糖藥物被廣泛用于治療2型糖尿病患者，其療效確切，為 2型糖尿病患者的首選藥物，鹽酸二甲雙胍腸溶片為雙胍類腸溶制劑，不但有降血糖的作用，還有減輕體質(zhì)量和高胰島素血癥的效果。《中國藥典》（2010年版）中雖未收載鹽酸二甲雙胍腸溶片及其含量的測定方法[1]，但已收載鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的測定方法，本文擬依據(jù)《中國藥典》（2010年版）對鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的含量測定方法，對腸溶片劑進(jìn)行測定，以確定其適應(yīng)性。

1 儀器與試藥

島津LC-10AT型高效液相色譜儀，SPD-10A型紫外檢測器，AT-330柱溫控制儀，浙江大學(xué)2010色譜工作站，JA1003型電子天平；所用甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；鹽酸二甲雙胍標(biāo)準(zhǔn)品（批號：100664-200602，原中國藥品生物制品檢定所提供）；鹽酸二甲雙胍腸溶片（批號：20130121，20120205，20130612，實驗室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用10%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（84∶16）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃；檢測波長：233 nm。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

精密稱取鹽酸二甲雙胍對照品適量，用流動相稀釋成每1 mL約含20 μg的溶液作為對照品溶液。進(jìn)樣測定，鹽酸二甲雙胍峰的保留時間約為6.2 min，理論板數(shù)為2 000以上。稱取處方比例混合輔料約25 mg，置于100 mL容量瓶中，加流動相適量，溶解后定容，依法測定，結(jié)果表明，空白輔料色譜圖無明顯雜質(zhì)峰，輔料和外加試劑不干擾鹽酸二甲雙胍的測定。色譜圖見圖1～ 3。

2.3 溶液的制備

圖1 空白輔料RP-HPLC圖

圖2 鹽酸二甲雙胍對照品RP-HPLC圖

圖3 鹽酸二甲雙胍腸溶片RP-HPLC圖

2.3.1 對照品溶液的配置精密稱取鹽酸二甲雙胍對照品，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL約含40 μg的溶液，作為對照品儲備液；精密量取上述儲備液適量，加流動相制成每 1 mL含鹽酸二甲雙胍20 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的配置精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍50 mg），置于200 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密取續(xù)濾液8 mL，置于100 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取對照品儲備液用流動相稀釋制成不同濃度的系列溶液。分別精密吸取上述溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，照含量測定方法測定。記錄峰面積，以峰面積對濃度回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線，鹽酸二甲雙胍的回歸方程為：

r=0.999 9。結(jié)果表明鹽酸二甲雙胍2.335～37.36 μg/mL濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 檢測限

配制不同濃度的鹽酸二甲雙胍對照品溶液照含量測定項下的色譜條件測定，以信噪比大于3為判斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)試驗結(jié)果，確定鹽酸二甲雙胍的檢測限約為50 ng/mL。

2.6 定量限

配制不同濃度的鹽酸二甲雙胍對照品溶液，照含量測定項下的色譜條件測定，以信噪比大于10為判斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)試驗結(jié)果，確定鹽酸二甲雙胍的定量限約為0.5 μg/mL。

2.7 重復(fù)性試驗

取“2.3.1”項下對照品溶液，精密吸取20 μL，進(jìn)樣，連續(xù)測定6次，記錄色譜圖，計算得峰面積的RSD值為0.76%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

照含量測定方法，配制含量測定樣品溶液（批號：20130322），共6份，依次測定，記錄峰面積，結(jié)果鹽酸二甲雙胍含量的RSD值為0.61%，表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.9 穩(wěn)定性試驗

取“2.3.2”項下供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8小時精密吸取 20 μL，進(jìn)樣，記錄峰面積，并經(jīng)計算得RSD值為0.42%。結(jié)果表明，樣品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗

精密稱定約40，50，60 mg的鹽酸二甲雙胍原料藥各3份，分別加入相應(yīng)量的空白輔料，照含量測定項下方法制備供試品溶液并測定。由測得量和加入量計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸二甲雙胍回收率試驗結(jié)果

表1結(jié)果表明該方法高、中、低三個濃度的回收率均合格。平均回收率為100.34%，總RSD為0.68%。

2.11 含量測定

取實驗室自制鹽酸二甲雙胍腸溶片共 3批，按擬定的方法和條件制備對照品溶液與供試品溶處液，取上述兩種溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算含量，結(jié)果3個批號20130129，20130322，20140425的鹽酸二甲雙胍含量分別為99.8%，99.4%和98.9%，RSD分別為0.23%，0.23%和0.24%。

3 討論

3.1檢測波長的確定：用配置好的供試品溶液和空白輔料溶液在200～ 800 nm范圍內(nèi)掃描，供試品溶液在233 nm處有最大吸收，而輔料和溶劑無干擾，故將檢測波長定在233 nm。

3.2流動相的選擇：鹽酸二甲雙胍在水和甲醇溶液中保留時間較短，容易與溶劑峰混淆，通過對多重試劑的比較和選擇，最終確定用 0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用10%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（84∶16）作為本研究的流動相[2-3]。

3.3本實驗依《中國藥典》所述鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊的方法對鹽酸二甲雙胍腸溶片劑進(jìn)行了含量測定，并對該測定法進(jìn)行了方法學(xué)考察，考察結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確靈敏，重復(fù)性好，不僅能夠用于腸溶膠囊的測定，同時也能夠用于鹽酸二甲雙胍腸溶片的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：625-626.

[2] 楊青.高效液相色譜法測定鹽酸二甲雙胍片的含量[J].中國藥業(yè)，2008，17（19）：35.

[3] 戚燕，尤聰超，吳松.離子對-HPLC法測定鹽酸二甲雙胍含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2002，22（4）：285-287.

Determination of Metformin Hydrochloride Enteric-coated Tablets by RP-HPLC

Zhou Ping，Tong Huiqi，Bai Jin，Zhao Mingming，Jin Xiangqun（School of Pharmaceutical Sciences of Jilin University，Jilin Changchun 130012，China）

Objective：To study the method of determinating the content of metformin hydrochloride enteric-coated tablets by RP-HPLC according to the method set forth in the Chinese Pharmacopoeia for metformin hydrochloride enteric-coated capsules.Methods：Chromatographic column of Hypersil ODS C18（4.6 mm× 250 mm,5 μm）was used with the mobile phase of 0.05%heptane solution of sodium （10%phosphoric acid solution adjusted to pH 4.0）-acetonitrile （84∶16）.The detection wavelength was at 232 nm and the column temperature was at 30℃.Results：There was a good linear relationship when the sample size was within the range of 2.335～37.36 μg/mL（r=0.999 9）. The average recovery was 100.34% （n=9）.Conclusion：The content determination method for the capsules is convenient,fast and reproducible,it can also be used for the content determination of metformin hydrochloride enteric-coated tablets.

Metformin Hydrochloride；RP-HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.12.008

2014-09-08）

周平，女，碩士。研究方向：藥物新劑型及新型藥物。E-mail：june0z@163.com

金向群，男，博士生導(dǎo)師。研究方向：藥物新劑型及新型藥物。通訊作者E-mail：jinxq@jlu.edu.cn