一類新型高效驅(qū)蚊復(fù)方精油的研究

裴竟等

摘要 [目的]為新型驅(qū)蚊產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)與應(yīng)用提供理論依據(jù)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)。[方法]對(duì)夜來(lái)香揮發(fā)油提取物中驅(qū)蚊成分進(jìn)行分離與提純，并對(duì)其產(chǎn)品開發(fā)進(jìn)行研究。[結(jié)果]從夜來(lái)香提取到15.92 g揮發(fā)油，提取率為3.16%。夜來(lái)香揮發(fā)油對(duì)蚊蟲有較好的殺傷效果。復(fù)方精油具有高效的驅(qū)蚊性，具有良好的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。復(fù)方精油可以直接涂于皮膚上，對(duì)皮膚無(wú)刺激作用。[結(jié)論]新型復(fù)方精油可制成固體空氣清新劑。

關(guān)鍵詞 夜來(lái)香；揮發(fā)油提取物；驅(qū)蚊作用

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）03-00770-02

Abstract [Objective] The research aimed to provide theoretical basis and test basis for the development，production and application of new type of mosquito-repellent products. [Method] The mosquito-repellent components were separated and purified from the volatile oil extracts from Centrum nocturnum Linn. And the product development was studied. [Result] 15.92 g volatile oil was extracted from C. nocturnum and the extraction rate was 3.16%. The volatile oil extracted from C. nocturnum had stronger killing effects on mosquitoes and pests. The compound essential oil had high-efficiency mosquito-repellent effects and good market application values. The compound essential oil could be directly smeared on the skin and it had no simulation on skin. [Conclusion] New type of compound essential oil could be made into solid air freshener.

Key words Centrum nocturnum Linn； Volatile oil extracts； Mosquito-repellent effects

夜來(lái)香（Centrum nocturnum Linn）為夜香樹屬茄科植物，在我國(guó)南方地區(qū)較為常見，其性溫味辛，具有行氣止痛鎮(zhèn)定之功效[1]；其花夜間香氣獨(dú)特而有刺激性，其中揮發(fā)油提取物具有高效的驅(qū)蚊作用[2]，但是對(duì)此揮發(fā)油提取物中驅(qū)蚊成分的分離提純以及產(chǎn)品應(yīng)用報(bào)道較少。筆者對(duì)揮發(fā)油提取物中驅(qū)蚊成分的分離提純以及產(chǎn)品開發(fā)進(jìn)行研究，旨在為新型驅(qū)蚊產(chǎn)品的開發(fā)生產(chǎn)應(yīng)用提供一定的提供理論依據(jù)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 植物材料。植物材料為夜來(lái)香樹苗，產(chǎn)自江蘇省宿遷地區(qū)。

1.1.2 試劑。

無(wú)水乙醚（標(biāo)準(zhǔn)分析純）、無(wú)水氯化鈣、鄰苯二甲酸丁酯標(biāo)準(zhǔn)品（從國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)上購(gòu)買）、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯（分析純）、碘顆粒若干、龍虎牌風(fēng)油精、六神驅(qū)蚊花露水、月見草基礎(chǔ)油、甜橙精油、薄荷精油、薰衣草精油、卡拉膠和保水劑（均從青島惠德海洋生物技術(shù)公司購(gòu)買，專門用于生產(chǎn)固體清新劑）吐溫80、蒸餾水、脫毛劑（8%的硫化鈉酒精溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配）。

1.1.3 活體動(dòng)物。

無(wú)翅果蠅（上海海洋大學(xué)食品學(xué)院海洋生物制藥實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后，挑選整齊一致的初期幼蟲供試）；昆明鼠（購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)為SCXK（滬）2008-0016）。

1.1.4 試驗(yàn)儀器。

SB-4200DT超聲波發(fā)生器（寧波新藝生物技術(shù)有限公司）；SHZ-9813循環(huán)水式多用真空汞（鞏義市予華儀器有限公司）；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海青浦滬西儀器廠）；HH.S11-2-S水浴鍋（上海新苗醫(yī)療儀器器械制造有限公司）；廣口瓶500 ml；中速濾紙若干；毛細(xì)管；硅膠板若干；層析色譜柱；燒杯500 ml、培養(yǎng)皿、紗布、濾紙若干；粗硅膠。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 夜來(lái)香揮發(fā)油的提取[2]。

采集夜來(lái)香白天花朵與嫩枝，切碎后風(fēng)干7 d。將風(fēng)干的樣品裝入燒瓶?jī)?nèi)，放入超聲波提取器中進(jìn)行揮發(fā)油提取。在燒瓶?jī)?nèi)加入無(wú)水乙醚，室溫下抽提0.5 h。采用梯度提取法提取4次，使?jié)舛戎饾u增加，達(dá)到濃縮的效果，每提取1次后抽濾1次。最后，用無(wú)水氯化鈣進(jìn)行干燥，得到深綠色透明的揮發(fā)油。

1.2.2 夜來(lái)香揮發(fā)油的分離純化[3-5]。

將粗硅膠與粗提取物拌勻后，再填入層析柱中，然后再加壓用石油醚（60～90 ℃）與乙酸乙酯混合液（20∶1）過(guò)柱。每收集1 000 ml濾液合并40 ℃下旋蒸1次，將所得產(chǎn)物以鄰苯二甲酸丁酯為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行TLC分析，收集所有含鄰苯二甲酸丁酯的提取物。

1.2.3 夜來(lái)香揮發(fā)油提取物驅(qū)蚊效果的檢測(cè)[2]。

將夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與無(wú)水乙醇1∶1稀釋。將20頭果蠅用乙醚麻醉后置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來(lái)，等乙醚對(duì)果蠅的麻醉作用消失以后，將滴有夜來(lái)香提取物乙醇稀釋液的濾紙固定于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通，平行3組，并設(shè)立空白對(duì)照組，30 min內(nèi)觀察果蠅的情況。

1.2.4 復(fù)方精油配置及其驅(qū)蚊效果的檢測(cè)[2]。

將夜來(lái)香揮發(fā)油提取物分別與月見草、甜橙、薄荷、薰衣草精油進(jìn)行1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶5.5、1∶6稀釋。將20頭果蠅用乙醚麻醉后，置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來(lái)，等乙醚對(duì)果蠅的麻醉作用消失以后，將滴有混合精油的濾紙固定于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通。各比例平行3組，并設(shè)立空白對(duì)照組，30 min內(nèi)觀察果蠅的情況。

1.2.5 復(fù)方精油與市場(chǎng)上驅(qū)蚊產(chǎn)品驅(qū)蚊效果的對(duì)比[2]。

將20頭果蠅用乙醚麻醉后置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來(lái)，等乙醚對(duì)果蠅的麻醉作用消失以后，將滴有復(fù)方精油的濾紙固定于于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通。同時(shí)在相同處理的培養(yǎng)皿外面，用滴有等量的龍虎牌風(fēng)油精或六神驅(qū)蚊花露水的濾紙固定于紗布外，濾紙同樣打孔保持空氣流通。將二者進(jìn)行對(duì)比，記錄果蠅全部致死的時(shí)間。各設(shè)立平行3組。

1.2.6 復(fù)方精油皮膚刺激試驗(yàn)[6-8]。

用無(wú)水乙醚浸泡11個(gè)棉球，用棉球麻醉11只昆明鼠，約10 s（若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使小鼠致死），然后用現(xiàn)配的脫毛劑對(duì)11只小鼠背部進(jìn)行脫毛（脫毛區(qū)域?yàn)? cm×3 cm），再將配好的混合精油涂于紗布上，紗布覆蓋于小鼠的裸露的背部，每只老鼠對(duì)應(yīng)1種比例的混合復(fù)方精油（復(fù)方精油中加入10倍精油量的月見草基礎(chǔ)油）。4 h后每個(gè)比例各追加4只小鼠。在相同的培養(yǎng)生存條件下，連續(xù)14 d觀察小鼠。

1.2.7 復(fù)方精油制成的固體清新劑及其驅(qū)蚊效果檢測(cè)[9-10]。

將卡拉膠1.0 g、蒸餾水100.0 ml、保水劑1.0 ml、吐溫80 4.0 ml、復(fù)方精油2.0 ml 混合，85～90 ℃下攪拌混合均勻，迅速冷卻至室溫。

將20頭果蠅用乙醚麻醉后置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來(lái)，等乙醚對(duì)果蠅的麻醉作用消失以后，將放有少量固體清新劑的濾紙固定于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通，平行3組，并設(shè)立空白對(duì)照組，30 min內(nèi)觀察果蠅的情況。

1.2.8 固體空氣清新劑的安全性檢測(cè)。

由青島信標(biāo)檢測(cè)分析技術(shù)有限公司對(duì)自制固體空氣清新劑進(jìn)行安全性檢測(cè)，檢測(cè)固體空氣清新劑VOC和甲醛的含量，檢測(cè)報(bào)告（編號(hào)QT1310280306）表明自制固體空氣清新劑是安全的。

2 結(jié)果與分析

2.1 夜來(lái)香揮發(fā)油的提取和分離純化

100棵夜來(lái)香苗的嫩子和花朵（503.80 g）采用超生提取法提取到揮發(fā)油約60 ml（粗制）。夜來(lái)香揮發(fā)油提取物中主要驅(qū)蚊成分為鄰苯二甲酸丁酯，因此以鄰苯二甲酸丁酯為標(biāo)準(zhǔn)物，對(duì)夜來(lái)香提取物進(jìn)行層析柱分離，去除葉綠素等雜質(zhì)。過(guò)硅膠柱時(shí)，從編號(hào)60的試管開始出現(xiàn)鄰苯二甲酸丁酯，直至編號(hào)105的試管均有，合并這45管后40 ℃下蒸發(fā)1次，得到夜來(lái)香揮發(fā)油35 ml，重量達(dá)15.92 g（精制），提取率為3.16%，提取率較低，提取成本較高。

2.2 夜來(lái)香揮發(fā)油提取物驅(qū)蚊效果的檢測(cè)

試驗(yàn)表明，含有夜來(lái)香揮發(fā)油提取物的試驗(yàn)組在30 min后全部死亡，而不含夜來(lái)香提取物的空白組全部存活，說(shuō)明夜來(lái)香對(duì)蚊蟲有較好的殺傷效果。

2.3 復(fù)方精油配置及其驅(qū)蚊效果的檢測(cè)

由于提純的精油不可以直接使用，需要與其他精油混合使用，因此開展了夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與其他精油配比成復(fù)方精油的研究。

試驗(yàn)表明，夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與月見草精油的混合物對(duì)蚊蟲沒(méi)有殺傷作用。從圖1可以看出，夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與甜橙精油的混合比例為1∶1、1∶3、1∶4、1∶5、1∶5.5時(shí)，對(duì)蚊蟲具有較好的殺傷作用。從圖2可以看出，夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與薄荷精油的混合比例為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4時(shí)對(duì)蚊蟲有較好的殺傷效果。從圖3可以看出，夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與薰衣草的混合物比例為1∶4和1∶5時(shí)對(duì)蚊蟲具有較好的殺傷作用。另外，當(dāng)夜來(lái)香與甜橙的比例為1∶2時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)有些反常，但經(jīng)過(guò)2次的重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果類似，其原因有待探討。

通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，夜來(lái)香揮發(fā)油提取物與其他精油的混合物對(duì)蚊蟲的殺傷作用除與夜來(lái)香提取物的濃度有關(guān)外，應(yīng)還與精油的揮發(fā)性有關(guān)。由于月見草為基礎(chǔ)油類，揮發(fā)性極低，因此殺傷效果較弱甚至沒(méi)有。