豬瘟診斷技術(shù)的比較

曲春林

豬瘟（CSF）又稱為“爛腸瘟”，是一種高度接觸性傳染病，豬瘟病毒（CSFV）感染是引發(fā)該病的主要因素。豬瘟傳染性很強(qiáng)，其發(fā)病率和死亡率居高不下，不僅不利于養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，而且還會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，提高豬瘟診斷技術(shù)水平，以預(yù)防為主加強(qiáng)防控是減少養(yǎng)豬業(yè)損失的重要措施。本文就豬瘟診斷技術(shù)的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述，同時(shí)也展望了該技術(shù)的發(fā)展方向，以供參考。

1 豬瘟的診斷技術(shù)

1.1 常規(guī)診斷方法

目前，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)診斷技術(shù)主要有免疫熒光實(shí)驗(yàn)（FAT）和血清型診斷兩種。免疫熒光實(shí)驗(yàn)是診斷豬瘟的常用方法，該法將抗豬瘟病毒抗體IgG提純后標(biāo)記熒光物質(zhì)，然后制成相應(yīng)的熒光試劑。試劑制成后使用其著染患豬淋巴結(jié)、扁桃體等病料的觸片或冰凍切片，若通過熒光顯微鏡觀察到有亮綠色熒光則表明該病毒熒光抗體染色呈陽性，即存在豬瘟病毒感染。利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)患豬內(nèi)臟是否存在豬瘟病毒可有效提高豬瘟的早期診斷水平，對(duì)于防控豬瘟進(jìn)一步發(fā)展，防止其擴(kuò)大傳染具有重要意義。豬瘟病毒感染早期采用豬瘟熒光抗體染色技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)具有較高的檢出率，適應(yīng)性較廣，除可檢出強(qiáng)毒抗原之外，還能檢出低毒力病毒感染。同時(shí)，與常規(guī)診斷技術(shù)相比，該技術(shù)的診斷時(shí)間更短，準(zhǔn)確性更高，有效提高了診斷效率和質(zhì)量，適宜在規(guī)模化豬場(chǎng)等大型養(yǎng)殖基地進(jìn)行檢測(cè)和診斷。另外一種，血清型診斷。當(dāng)前，豬瘟酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定實(shí)驗(yàn)是常用的血清抗體檢測(cè)方法，該診斷方法的敏感性與特異性較高，其試劑較為穩(wěn)定，不會(huì)產(chǎn)生放射性危害，可操作性強(qiáng)，適用于各級(jí)檢驗(yàn)部門。

1.2 分子生物學(xué)診斷技術(shù)

在豬瘟病毒的診斷中，反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、巢式PCR、多重引物PCR以及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）等分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)揮了重要作用，其特點(diǎn)各異，現(xiàn)具體介紹如下：反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度和特異度高、重復(fù)性好和檢測(cè)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，該技術(shù)對(duì)CSFV的識(shí)別性很強(qiáng)，其靈敏度高達(dá)100%，可在臨床診斷中發(fā)揮重要作用；巢式PCR是使用2對(duì)PCR引物擴(kuò)增完整的片段，可增強(qiáng)擴(kuò)增過程中的特異性，提高檢測(cè)靈敏度；多重引物PCR與普通PCR相比，該檢測(cè)技術(shù)的反應(yīng)原理和操作過程基本一致，其主要是通過將2對(duì)或2對(duì)以上的引物加入同一PCR反應(yīng)體系中以擴(kuò)增出多個(gè)核苷酸片段，在臨床樣品中病原體的快速診斷中可發(fā)揮重要作用，為實(shí)驗(yàn)室診斷CSFV提供了一種高效、快速的方法；環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)無需任何儀器便可進(jìn)行觀察，為在基層和現(xiàn)場(chǎng)推廣使用提供了便利。曾小娜（2009）等經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用RT-LAMP法對(duì)80份疑似豬瘟病料進(jìn)行診斷后發(fā)現(xiàn)檢測(cè)陽性率為38.75%，而采用RT-PCR法檢測(cè)陽性率為36.25%；而Chen（2009）等采用上述方法檢測(cè)疑似病例血液和扁桃體樣本中的豬瘟病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RT-LAMP法的檢測(cè)陽性率為89%，而RT-PCR法的檢測(cè)陽性率為78%，這表明RT-LAMP法的檢測(cè)敏感性較高。

1.3 基因芯片診斷技術(shù)

隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，為與微電子學(xué)等多學(xué)科交叉融合創(chuàng)造了條件，基因芯片就是上述學(xué)科融合而成的產(chǎn)物。其應(yīng)用前景十分廣闊，是生命科學(xué)領(lǐng)域的又一次重大革命。基因芯片是指在硅化玻璃等很小的表面覆蓋上數(shù)量巨大的寡核苷酸，每一個(gè)寡核苷酸均可反映出大量的拷貝互補(bǔ)信息，不僅可用于測(cè)定DNA序列、病原及基因突變體檢測(cè)，還能鑒定基因表達(dá)譜，研究基因組相關(guān)功能等。基因芯片診斷技術(shù)為豬瘟診斷提供了新的技術(shù)理念，其診斷效率較高，可替代傳統(tǒng)方法，有望大幅提高豬瘟的防控水平。

2 展望

目前，除了用于定性的診斷方法外，兔體測(cè)毒法（定量）在豬瘟疫苗的效力檢驗(yàn)及病毒滴度確定中仍然發(fā)揮著重要作用，但這種方法費(fèi)力耗時(shí)，價(jià)格也相對(duì)較高，給推廣使用帶來了較大的困難。同時(shí)，由于兔體的敏感性存在個(gè)體差異，在一定程度上降低了標(biāo)定活體病毒量的準(zhǔn)確性。因此，積極研究一種可替代兔體測(cè)毒法的技術(shù)已成為應(yīng)時(shí)之需。我國當(dāng)前用于豬瘟抗原、抗體診斷的方法很多，但這些方法之間的相關(guān)性研究相對(duì)較少，因此針對(duì)上述方法標(biāo)準(zhǔn)化的制定會(huì)成為日后研究的趨勢(shì)。■（編輯：何芳）