牛奶中硫氰酸根的檢測方法優(yōu)化

劉洋　葛懷禮　于和水

摘 要：建立離子色譜法檢測牛奶中硫氰酸根的檢測方法，解決了雜峰對樣品峰的干擾。樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白，冷凍離心，取上清液過RP柱待測。優(yōu)化了色譜條件，以5%的丙酮和5.0 mmol/L的碳酸鈉為緩沖液，保留時間為12.5 min，回收率在94.51%～104.21%之間，RSD為1.95%。定量范圍為0.1～2.0 μg/mL，檢出限為0.02 μg/mL，本方法簡單快速，重現(xiàn)性好，靈敏度、準(zhǔn)確度高，適用于牛奶中硫氰酸根的檢測。

關(guān)鍵詞：離子色譜；牛奶；硫氰酸根

Abstract：Detection method of thiocyanate by ion chromatography was established in milk， solve the interference peak to peak. Samples were first deproteined with acetonitrile， deproteinized by high-speed frozen centrifugation， purified with the RP column. Under the optimal conditions， with 5% of acetone and 5.0 mmol/L of sodium carbonate as the running buffer. Retention time was 12.5 min. The recoveries ranged from 94.51% to 104.21%， and average relative standard deviation was 1.95%. The liner range is 0.1～ 2.0 μg/mL with the detection limit of 0.02 μg/mL. The method is simple and rapid， reproducible， sensitive， accurate， suitable for the detection of thiocyanate in milk.

Key word：ion chromatography； milk； thiocyanate

我國1995年發(fā)布了GB/T15550—1995《活化乳中乳過氧化物酶體系保存生鮮牛乳實施規(guī)范》[1]，添加硫氰酸鈉15 mg/kg利用乳過氧化物酶、硫氰酸根和過氧化氫組成了生鮮乳保存體系，防止牛奶變質(zhì)。但由于硫氰酸鈉的毒副作用及其濫用，2008年12月15日，衛(wèi)生部印發(fā)《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用食品添加劑品種名單（第一批）》。名單明確指出：硫氰酸鈉嚴(yán)禁用于乳與乳制品中。硫氰酸根的檢測方法有分光光度法[2]、點位滴定法[3]和離子色譜-質(zhì)譜分析法[4]，但是沒有形成統(tǒng)一的國家標(biāo)準(zhǔn)。本人在硫氰酸根的日常檢測中，對檢測方法的一些細(xì)節(jié)進(jìn)行了調(diào)整和優(yōu)化，從而達(dá)到適應(yīng)本單位儀器設(shè)備的目的。

1 材料方法

1.1儀器和試劑

瑞士萬通離子色譜883型；超純水；乙腈（色譜純）；硫氰酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品，純度99%，天津元力化工有限公司；冷凍離心機(jī)；固相萃取小柱（RP柱 3mL）電子天平；鼓風(fēng)干燥箱。

1.2上機(jī)條件

色譜柱：Metrosep A supp 4 250/4.0

保護(hù)住：Metrosep RP 2 Guard/3.5

流動相：5 mmol/L Na2CO3以及5%的丙酮

流速：1.0 mL/min

定量環(huán)體積：100 μL

1.3標(biāo)準(zhǔn)品的制備

將硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)品于80℃烘箱內(nèi)烘干2 h。準(zhǔn)確稱取干燥后的硫氰酸鉀1.673 2 g于1 000 mL容量瓶中，定容，混勻。即得1 mg/mL硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL。

1.4樣品的制備

移取8.0 mL生鮮乳樣品，加入10.0 mL乙腈沉淀蛋白5 min，冷凍離心，移取上清液過RP柱上機(jī)待測。

1.5計算公式

C —樣品中硫氰酸根的濃度（μg/mL）

C1—上機(jī)液體中硫氰酸根的濃度（μg/mL）

2 結(jié)果與分析

2.1碳酸鈉和碳酸氫鈉比例

緩沖液中碳酸鈉和碳酸氫鈉的濃度主要由所用色譜柱的型號決定，Metrosep A supp 4 250/4.0型色譜柱的通用的流動相比例為1.7 mmol/L 碳酸鈉，1.8 mmol/L碳酸氫鈉，然而在實際檢測過程中會有雜峰的干擾，分離度不好，通過配置不濃度配比的碳酸鈉和碳酸氫鈉，檢測同一有雜峰的牛奶樣品，其對分離度結(jié)果見表1。可見碳酸鈉和碳酸氫鈉的濃度配比是分離度主要影響因素，當(dāng)只加5.0 mmol/L碳酸鈉時分離度最好，R=5.57。

2.2有機(jī)相的選擇

有機(jī)相文本選用5%丙酮，丙酮主要作用是改善峰型，提高了準(zhǔn)確性，縮短出峰時間，提高工作效率。圖1 為檢測不同濃度5個標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰型圖，觀察保留時間，結(jié)果見表2，平均保留時間為12.64 min。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線線性

測定標(biāo)準(zhǔn)系列為y = 0.195 1x - 0.000 7； y：峰面積，x：濃度；相關(guān)系數(shù)為0.999 86。

2.4加標(biāo)回收

按樣品處理方法制備了0.75、0.52和0.80 μg/mL 三種不同牛奶樣品溶液，用優(yōu)化后的方法分別測定樣品中的硫氰酸鈉根的含量回收率結(jié)果見表4，加標(biāo)回收在94.51%～104.21%之間。

2.5精密度

對硫氰酸根濃度為1.15μg/mL的樣品進(jìn)行精密度的測定，9次測定結(jié)果見表7精密度為1.99%。

2.6檢出限

依據(jù)儀器設(shè)定的檢出限程序，連續(xù)測定空白溶液20次，選用3倍的空白樣品噪音的響應(yīng)值計算儀器的檢出限，計算出本方法的檢出限為0.02 μg/mL。

3 小結(jié)

本文優(yōu)化了緩沖液中丙酮、碳酸鈉和碳酸氫鈉的濃度配比，解決了當(dāng)有雜峰分離不清的問題，緩沖液成分為5%的丙酮和5.0 mmol/L的碳酸鈉時，分離度和保留時間為最佳，分離度為5.36，保留時間為12.5 min左右，提高了檢測效率，回收率在94.51%～104.21%之間，RSD為1.95%，檢出限為0.02 μg/mL，其結(jié)果表明方法準(zhǔn)確可靠，適用于碳酸體系離子色譜檢測牛奶中的硫氰酸根。（編輯：何芳）

參考文獻(xiàn)：

[1] GB/T 15550-1995 活化乳中乳過氧化物酶體系保存生鮮牛乳實施規(guī)范.

[2] 李衛(wèi)群，單勝艷，朱慧 分光光度法測定乳與乳制品中硫氰酸鈉的含量[J].中國食品添加劑，2010（03），240-243.

[3] 曾云龍，唐春然 直接電位法測定工業(yè)廢水的硫氰酸根的含量[J].分析測試實驗室，2001，20（3）：66-68.

[4] Martinelango P K， Gumus G， Dasgupta P K. Matrix interference free determination of perchlorate in urine by ion association–ion chromatography–mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta， 2006， 567（ 1 ）： 79-86.