卡他莫拉菌快速鑒定及耐藥性分析

【中圖分類號】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）02-0374-01

MC是人類上呼吸道的常居菌種，為條件致病菌。該菌可引起人類的多種感染。可累及全身[1]。國外資料顯示，MC在成人下呼吸道感染及兒童肺炎、中耳炎等標(biāo)本中的分離率，僅次于流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌列第三位[2]。因此，快速鑒定MC具有重要的臨床意義。我們用3-乙酰吲哚紙片法檢測乙酰酯酶，快速鑒定MC。并測定4種β-內(nèi)酰胺抗生素的復(fù)方制劑及亞胺培南/西司他丁對β-內(nèi)酰胺酶陽性MC的抗菌活性。報告如下。

材料和方法

（1）材料

1.菌株來源：MC（114株）、淋病奈瑟菌（8株）、腦膜炎奈瑟菌（2株）、奈瑟菌屬（76株）、莫拉菌亞屬（12株）、博德特菌屬（3株）、不動桿菌屬（79株）均為臨床分離株。標(biāo)準(zhǔn)菌株MC9602，9707，0101為全國臨床檢驗中心質(zhì)控菌株。

2.培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂培養(yǎng)基（SBA），5%兔血巧克力瓊脂培養(yǎng)基（RChoc），5%羊血巧克力瓊脂培養(yǎng)基（SChoc），含50μg/ml萬古霉素的兔血巧克力瓊脂培養(yǎng)基（Choc—V），淋病奈瑟菌培養(yǎng)基（NGA），MH培養(yǎng)基（MHA），5% 羊血MH培養(yǎng)基（MHB），腦心瓊脂培養(yǎng)基（BCA），營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NUA），中國藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（ZLA），DNA瓊脂培養(yǎng)基均為本室自制。

3.試劑：蛋白胨、DNA 瓊脂粉、MH 瓊脂粉、VlTEK-（NHI和GNI）鑒定試卡購自生物梅里埃公司。萬古霉素為英國BD公司產(chǎn)品，鹽酸四甲基對苯二胺、3一乙酰吲哚購自SIGMA公司，Nitrocefin購自O(shè)XOID公司（英國）。氧化酶紙片（1%鹽酸四甲基對苯二胺溶液浸泡紙片后吹干備用），乙酰酯酶紙片（100 mg/ml 3.乙酰吲哚丙酮溶液浸泡50片紙片后吹干備用）[3]，Nitrocefin紙片（12.5 μg/片，Nitrocefin吹干備用）。

4.抗生素：哌拉西林（PIP）；氨芐西林（AMP），哌拉西林/舒巴坦（PIPC/SBT）（4：1），哌拉西林/他唑巴坦（PIP/TAZ）（8：1），氨芐西林/舒巴坦（AMP/SBT）（2：1），頭孢哌酮/舒巴坦（CFP/SBT）（1：1），亞胺培南/西司他丁（M/CST）（1：1），均購于英國BD公司。

（2）方法

1.菌株分離與鑒定：將可疑標(biāo)本接種于SBA和Choc-V瓊脂平板上，置5%C02孵箱，35℃培養(yǎng)24-72h觀察結(jié)果。細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定按文獻(xiàn)[4]進行，分離到的菌株經(jīng)涂片革蘭染色鏡檢、觸酶、氧化酶試驗后，用VlTEK（NHI和GNI）鑒定試卡鑒定到種。

2.氧化酶試驗：按文獻(xiàn)[4]進行。

3.DNA酶試驗：按文獻(xiàn)[4]進行。

4.乙酰酯酶試驗：用無菌生理鹽水將3-乙酰吲哚紙片沾濕，取待檢菌落涂在紙片上，3min內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)綠色為陽性反應(yīng)。

5.β-內(nèi)酰胺酶試驗：用無菌蒸餾水將Nitrocefin紙片沾濕，取MC菌落涂在紙片上，5min內(nèi)紙片變紅色者判為B內(nèi)酰胺酶陽性。

6.藥敏試驗：根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會2007年版標(biāo)準(zhǔn)，采用瓊脂平皿二倍稀釋法測定最低抑菌濃度（MIC），用多點接種儀定量種菌。

二、結(jié)果

1.氧化酶試驗：114株MC、8株淋病奈瑟菌、2株腦膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌、3株博德特菌氧化酶均為陽性，79株不動桿菌氧化酶為陰性。

2.DNA酶試驗：114株MC、8株淋病奈瑟菌、2株腦膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌、3株博德特菌氧化酶均為陽性，79株不動桿菌DNA酶均為陰性。卡他莫拉菌對DNA酶的敏感性為100%，特異性為100% 。

3.乙酰酯酶試驗：8株淋病奈瑟菌、2株腦膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌亞屬、3株博德特菌乙酰酯酶均為陰性，79株不動桿菌中乙酰酯酶陽性63株（占79.7% ），114株卡他莫拉菌乙酰酯酶全為陽性。卡他莫拉菌對乙酰酯酶的敏感性為100% ，特異性為77.7% 。但與近緣菌（淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、奈瑟菌屬、莫拉菌亞屬）比較特異性為100% 。

4.β-內(nèi)酰胺酶：114株MC中B內(nèi)酰胺酶陽性107株，12株莫拉菌亞屬β-內(nèi)酰胺酶陽性3株，8株淋病奈瑟菌、2株腦膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、3株博德特菌β-內(nèi)酰胺酶均為陰性。

三、討論

MC與許多嚴(yán)重感染性疾病有關(guān)，但由該菌引起的感染發(fā)病率一直難以估計。因為，MC生長較緩慢，在不含血的培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂、MH瓊脂、腦心瓊脂）上生長不良，菌落及菌體形態(tài)與許多近緣菌相似，分離及鑒定較為困難。為此，提高MC分離率已成為臨床診斷和治療MC感染所急需。我們采用3-乙酰吲哚紙片法檢測MC產(chǎn)生的乙酰酯酶快速鑒定MC，此法操作簡便，易于判斷，敏感性為100% ，和近緣菌（淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、奈瑟菌屬、莫拉菌亞屬）比較特異性為100% ，與DNA酶試驗及生化鑒定結(jié)果的相關(guān)性比較均為100% 。雖然不動桿菌的乙酰酯酶陽性率高達(dá)79.7% ，但是不動桿菌的氧化酶陰性，DNA酶試驗陰性，在普通瓊脂及中國藍(lán)瓊脂上生長良好，且菌落較MC濕潤和光滑，稍加注意不難區(qū)別。

對114株MC的β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果分析表明，其陽性率高達(dá)93.0%，應(yīng)引起臨床醫(yī)生的重視。哌拉西林/舒巴坦、氨芐西林/舒巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦及亞胺培南/西司他丁對β-內(nèi)酰胺酶陽性MC有很好的抗菌活性。在MC感染的治療中，應(yīng)選用含β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)方制劑或用對p內(nèi)酰胺酶頭孢菌素進行治療。MC的近緣菌（淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、奈瑟菌屬、莫拉菌亞屬等）中，β-內(nèi)酰胺酶的陽性率非常低，因此，β-內(nèi)酰胺酶試驗也可作為MC與近緣菌的輔助試驗。

參考文獻(xiàn)：

[1]李光輝.卡他布蘭漢菌研究現(xiàn)狀.國外醫(yī)學(xué)微生物學(xué)分冊，199518：20.

[2]繆東幸.小兒呼吸道卡他布蘭漢氏球菌感染.國外醫(yī)學(xué)兒科學(xué)分冊。1994，21：1-4.

[3]楊秀華。劉小蘭，尚彥，等.乙酰吲噪紙片法快速鑒定卡他莫拉菌.中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1999，2 ：152.153.

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第2版.南京：東南大學(xué)出版社，1997.470-489.