鹽酸頭孢甲肟雜質測定的方法學驗證

摘 要：對建立的鹽酸頭孢甲肟有關物質測定的方法，進行方法學驗證。色譜柱：球狀蛋白色譜用親水硅膠為填料的色譜柱，流動相：pH6.5磷酸鹽緩沖液（55：45），檢測波長：231nm，進樣量：20μl。經過實驗證明系統適用性：頭孢甲肟峰與其前雜質峰分離度為1.95；對照溶液線性和范圍：頭孢甲肟在濃度1.66？滋g/ml～7.92？滋g/ml；檢測限與定量限：檢測限為0.21ng，定量限為0.55ng；溶液進樣精密度：連續進樣5次，峰面積值的相對標準偏差不大于2.0%，F值測定重現性：F值的日內、日間的相對標準偏差均在5%以內。綜上，建立的方法準確、可靠，能夠滿足實際生產要求。

關鍵詞：鹽酸頭孢甲肟；雜質；方法學驗證

1 概述

鹽酸頭孢甲肟是第三代頭孢菌素，對革蘭氏陰性和陽性需氧菌和厭氧菌有抗菌作用。

MMT是由工藝引入的工藝雜質，參考JP XVI中關于MMT的控制方法及限度，采用外標法對MMT進行定量控制，并將限度制訂為1.0%，列入質量標準。在前期的實驗中已經建立了相關的檢測方法如下：

儀器：Agilent 1200；色譜柱：球狀蛋白色譜用親水硅膠填料；流動相：pH6.5磷酸鹽緩沖液；檢測波長：231nm；流速：1.0ml/min；進樣量：20μl；分析步驟：精密量取供試品溶液與對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，以保留時間小于頭孢甲肟峰的各雜質峰面積的和與對照溶液主峰面積做比較。

2 儀器與試劑

儀器：天平：Mettler XS205、高效液相色譜：Agilent1200。

試劑：磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉（分析純、天津市科密歐）。

3 實驗方法

3.1 系統適用性

取本品5.0mg，置于10ml量瓶中，加0.5mol/L的氫氧化鈉溶液1.0ml室溫放置5分鐘，再加0.5mol/L的鹽酸溶液1ml，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄結果。

3.2 對照溶液進樣精密度試驗

精密量取對照溶液20μl，連續進樣5次，記錄結果。

3.3 F值重現性考察

F值為對照溶液中的鹽酸頭孢甲肟濃度（mg/ml）與測得的峰面積的比值，每天稱取3份對照品（批號1296661），測定兩天結果。

3.4 檢測限與定量限

在本實驗條件下，以信噪比S/N=10計算定量限；以信噪比S/N=3計算檢測限。

3.5 有關物質MMT低濃度線性

取鹽酸頭孢甲肟對照品（1296661）25.50mg，置50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml至10ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取20μl注入液相色譜儀。

4 實驗結果

4.1 系統適用性

頭孢甲肟峰與其前相鄰降解雜質峰的分離度為1.95，分離度達到要求。

4.2 對照溶液進樣精密度試驗

對照溶液重復進樣峰面積的相對標準偏差不大于2.0%，進樣精密度較好（結果見表1）。

表1 對照溶液進樣精密度

4.3 F值重現性考察

F值的日內、日間的相對標準偏差均在5%以內，重現性較好（結果見表2）。

4.4 檢測限與定量限

在本實驗條件下，以信噪比S/N=10計算，定量限為0.55ng；以信噪比S/N=3計算，檢測限為0.21ng。

4.5 有關物質MMT低濃度線性

試驗結果表明，鹽酸頭孢甲肟在濃度1.66？滋g/ml～7.92？滋g/ml范圍內與峰面積線性相關性良好（結果見表3，圖1）。

表3 對照溶液濃度與峰面積線性試驗

圖1 有關物質MMT低濃度線性

5 實驗結論

以上數據說明建立的相關物質檢測方法，系統適用性、對照溶液線性和范圍、檢測限與定量限、溶液進樣精密度、F值測定重現性符合相關指標和要求，得出如下結論：建立的方法準確、可靠，能夠滿足實際生產要求。

6 結束語

鹽酸頭孢甲肟等β-內酰胺類抗生素易降解產生雜質，本實驗對制定了有關物質MMT的檢測方法進行了系統驗證。經典檢測聚合物的方法是采用葡聚糖凝膠G-10為色譜柱，檢測時間長，聚合物與樣品峰分離度差，柱效低，參考中國藥典2010年版二部頭孢地嗪鈉有關物質MMT的檢測方法，以球狀蛋白色譜用親水硅膠為填充劑，主峰前雜質與主峰的分離度較好，符合要求，且檢測靈敏度高，準確度好，可用于有關物質的檢測。參考以上實驗，對前期建立的相關物質檢測方法，經過方法學的驗證證實方法的可重復性高，線性范圍較寬，能夠滿足日常生產的對產品含量測定的要求；回收率驗證體現出了較高的回收效果，能夠有效地提高該產品投產后的生產效率和經濟效益。

參考文獻

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