甘肅道地中藥大黃、黃芩對多重耐藥菌的抑菌活性

梁 勤，喬登嫣，馬小明，羅向霞，李喜香，周思彤，竇嬌瑩

甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730050

方 藥·道地藥材

甘肅道地中藥大黃、黃芩對多重耐藥菌的抑菌活性

梁 勤，喬登嫣△，馬小明，羅向霞，李喜香，周思彤，竇嬌瑩

甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730050

目的：觀察甘肅道地中藥材大黃、黃芩的體外抑菌活性，為臨床中藥治療耐藥菌感染提供參考。方法：采用煎煮法制備大黃、黃芩中藥原液，用肉湯稀釋法測定兩種藥液對產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌濃度。結果：大黃對產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）大腸桿菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌濃度分別為250mg/mL和125mg/mL。黃芩對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（M RSA）的最小抑菌濃度為250 mg/mL；對產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）大腸桿菌未見明顯抑菌作用。結論：大黃、黃芩對臨床常見的多重耐藥菌有不同程度的抑菌活性，且大黃的抑菌活性優于黃芩；大黃對金黃色葡萄球菌抑菌活性優于大腸埃希菌。

大黃；黃芩；多重耐藥菌；抑菌

多重耐藥細菌感染的治療是臨床棘手問題，而細菌的耐藥性多來自于耐藥質粒的傳播。中藥不易產生藥物殘留，可避免產生耐藥性，也不會造成環境污染，且種類繁多，資源豐富，屬天然植物藥，具有毒副作用小、應用安全、價格低廉等優點。相關研究顯示，中草藥對耐藥（R）質粒有消除作用［1-6］，本研究選取甘肅省道地中藥中的大黃和黃芩，檢測二者對產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌及耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的抑菌活性，以期為中藥治療耐藥菌感染提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株 本組產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株均由甘肅省中醫院檢驗科微生物室依照CLS I文件要求從臨床標本中分離并鑒定。

1.2 器材 M-H（Muellle r-Hinton）瓊脂平板（麥迪公司提供）；M-H肉湯、營養肉湯、營養瓊脂干粉（均由杭州微生物有限公司生產）；XK96-A快速混勻器（姜堰市新康醫療器械有限公司生產）；7 2 1分光光度計（山東高密彩虹分析儀器有限公司生產）。

1.3 中藥的選擇與提取 兩種中藥制劑均由甘肅省中醫院藥劑科用煎煮法制備。大黃、黃芩濃縮提取，濃度均為1g/m L，經121℃下滅菌2 0分鐘，-2 0℃保存備用。

1.4 藥液制備 排列無菌試管10支，于第2～10管中各加無菌營養肉湯5mL，取大黃10mL，于第一管中加入5mL，第2管中加入5mL，將第2管中溶液混合后取出5mL，加入第3管，再混合后取出5mL，加入第4管，如此連續稀釋至第9管，取出5mL棄掉，第10管僅為無菌營養肉湯做對照，則第1～10管為不同濃度藥液5mL。黃芩制備方法同大黃。最終每支試管的藥物濃度為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.82、3.91、0mg/m L。

1.5 菌液制備 將兩種菌株分別用M-H肉湯35℃培養2～6小時，用M-H肉湯稀釋菌液到0.5麥氏比濁管濁度（721分光光度計625 n m吸光度為0.08～0.10），約含菌1～2×108cfu/m L。

1.6 抑菌實驗 將“1.4”項下配好的菌液分別加入“1.5”項下稀釋的兩種藥液中，每管加菌液1mL，置3 5℃孵廂培養24～48小時，于24、48小時時分別吸取0.1mL轉種營養瓊脂平板一次，置35℃孵廂培養4 8小時觀察細菌生長情況，判斷中藥的最小抑菌濃度。

2 結果

大黃對產超廣譜β-內酰胺酶大腸桿菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌濃度分別為25 0mg/mL和125m g/m L；黃芩對MRSA的最小抑菌濃度為250mg/m L；對ESBLs大腸桿菌未見明顯抑菌作用，見表1。

表1 大黃、黃芩對產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的M ICmg/mL

3 討論

相關報告數據顯示引起醫院感染的病原菌分離率最高的革蘭氏陰性菌是大腸埃希菌，陽性菌為金黃色葡萄球菌，且高耐抗生素的產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和MRSA分離率高達70.4%和56.5%［7］。所以尋求有良好抑菌作用的中藥成為目前研究的熱點。

本研究結果表明，大黃對產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和MRSA有較好的抑制作用，與費娜等［8］研究結果相符。黃芩對MRSA有抑制作用，與蘇廣珠等［9］的研究結果類似；對產超廣譜β-內酰胺酶大腸桿菌未見明顯抑菌作用，說明不同藥物在MRSA最小抑菌濃度方面差異明顯；同一種藥物對MRSA和產超廣譜β-內酰胺酶大腸桿菌可表現出不同的抑菌濃度；經稀釋的黃芩沒有表現出明顯抑菌濃度，其原因可能是本實驗采用的煎煮方法不利于提取其有效抑菌成分。需要強調的是，中藥對厭氧菌的藥物敏感性實驗還沒有制定統一標準，且需要進一步規范中藥的品種、產地、炮制方法，以便為中藥治療厭氧菌感染提供更科學的實驗依據［10］。近年來隨著抗生素的廣泛使用，由金黃色葡萄球菌導致的院內感染的發生率也逐年升高，臨床多可出現對多種抗菌藥物耐藥，且此細菌分布廣、傳播快，故臨床對其感染者的治療較為困難。本研究結果表明黃芩、大黃對常見院內感染細菌具有抑制作用。

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［3］黃金珠，雍剛，廖菁，等.土茯苓加減方對淋病奈瑟菌耐藥質粒的消除作用［J］.實用醫院臨床雜志，2010，7（6）：35-37.

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［6］陳世彪.3種中藥對產β-內酰胺酶金黃色葡萄球菌R質粒的消除作用［J］.畜牧與獸醫，2010，42（1）：81-83.

［7］陳曉，楊青，張偉麗，等.Mohnarin 2010年報告：西北地區細菌耐藥監測［J］.中華醫院感染學雜志，2011，21（23）：4933-4938.

［8］費娜，楊俊杰.大黃等四種中草藥體外抑菌活性比較［J］.黑龍江醫藥科學，2010，33（1）：18-19.

［9］蘇廣珠，賀坤，裴鳳艷.6種中草藥抑菌活性的研究［J］.中國臨床研究，2012，25（8）：801-802.

［10］史躍杰.黃芩黃連水煎劑對厭氧菌的體外抑菌活性［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（17）：226-227.

Antibacterial Activity of Gansu Genuine Herbs DaHuang and HuangQin on Multiple Resistant Bacteria

LIANG Qin，QIAO Dengyan△，MA Xiaoming，LUO Xiangxia，LI Xixiang，ZHOU Sitong，DOU Jiaoying
Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China

Objective：To provide reference for herbs in treating drug resistant bacteria infection by observing antibacterial activity of Gansu genuine herbs DaHuang（Rheum palmatum L.）and HuangQin（Scutellaria Baicalensis）in vitro.Methods：The decoctions of DaHuang and HuangQin were prepared，the minimum antibacterial concentrations of two kinds of decoctions for extended spectrum β lactamases（ESBLs）E.coli and methicillin-resistant staphylococcus aureus（MRSA）were detected with broth dilution method.Results：The minimum antibacterial concentrations of DaHuang for producting ESBLs E.coli and MRSA were 250mg/mL and 125 mg/mL.The minimum antibacterial concentrations of HuangQin for producting MRSA were 250mg/mL，and it didn′t show notable antibacterial function to ESBLs E.coli.Conclusion：DaHuang and HuangQin show different degrees of antibacterial activity to common multiple resistant bacteria，and antibacterial activity of DaHuang is superior to that of HuangQin；antibacterial activity of DaHuang to MRSA is superior to that of ESBLs E.coli.

DaHuang；HuangQin；multiple resistant bacteria；antibacterial Activity

R284

A

1004-6852（2014）05-0005-03

2014-01-10

梁勤（1972—），女，副主任檢驗師。研究方向：臨床檢驗及微生物學檢驗。

△通訊作者：喬登嫣（1973—），女，副主任檢驗師。研究方向：臨床微生物學檢驗。