聚肌胞、阿比朵爾誘導產生干擾素最短時效研究

王洪波，樊鳳艷，祁術元，劉娟

（空軍總醫院輸血科，北京 100142）

·論著·

聚肌胞、阿比朵爾誘導產生干擾素最短時效研究

王洪波，樊鳳艷，祁術元，劉娟

（空軍總醫院輸血科，北京 100142）

目的探討干擾素(IFNs)誘導劑聚肌胞、阿比朵爾從鼻腔給藥，分別誘導呼吸道局部黏膜產生足量干擾素的最短時間和達到平臺期的時間。方法用聚肌胞溶液(A組)、阿比朵爾溶液(B組)和注射用水溶液(C組)分別從鼻腔滴入，連續給藥1～6 d、于第2天開始分別采集各組實驗動物鼻腔分泌物，檢測干擾素含量，各小組間進行比較分析。實驗動物為昆明種小鼠，實驗組156只，其中A組(聚肌胞組)、B組(阿比朵爾組)各78只；C組(對照組)13只，共計169只。結果(1)聚肌胞、阿比朵爾通過鼻腔給藥，1 d就可以誘導呼吸道黏膜產生足量IFNs。(2)持續通過鼻腔給予聚肌胞、阿比朵爾，隨著給藥時間的延長，呼吸道分泌物中的干擾素的含量呈增長趨勢，逐步達到平臺期。(3)通過鼻腔滴入適量聚肌胞溶液從第5天開始，誘導呼吸道黏膜產生的干擾素達到平臺期。(4)通過鼻腔滴入適量阿比朵爾溶液從第4天開始，誘導呼吸道黏膜產生的干擾素達到平臺期。(5)整個實驗過程中，動物對鼻腔滴入上述制劑，都有較好的適應性。結論聚肌胞、阿比朵爾通過鼻腔給藥，1 d均可誘導呼吸道局部黏膜產生足量干擾素，逐步增多達到較高水平的平臺期的時間分別為5 d和4 d。

干擾素；誘導劑；呼吸道；最短實效

為了探討高效干擾素(IFNs)誘導劑聚肌胞、阿比朵爾從鼻腔給藥，誘導呼吸道局部黏膜產生足量干擾素的最短時間和達到平臺期的時間，筆者進行了動物實驗研究，現將結果報道如下：

1 材料與方法

1.1 干擾素誘導劑 0.1%聚肌胞溶液(A液)，由濟南維爾康生化制藥有限公司生產，國藥準字H20003566，生產批號1212301，有效期兩年；0.1%鹽酸阿比朵爾溶液(B液)，由江蘇吳中醫藥集團有限公司蘇州制藥廠饋贈；鹽酸阿比朵爾原料粉劑，批號Y1111209R，取樣時間2013年3月；硝酸毛果蕓香堿滴眼液(匹羅卡品)，沈陽興齊制藥有限公司生產，批號120701，有效期兩年，規格8 ml：80 mg。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠，雄性，5～8周齡，質量25～30 g，SPF級。購于北京大學醫學部實驗動物中心。試驗動物共計169只，分為實驗組和對照組。實驗組分A組(聚肌胞組)、B組（阿比朵爾組）兩大組，每大組再分為1 d組(24 h，A1組、B1組)、2 d組(48 h，A2組、B2組)、3 d組(72 h、A3組、B3組)、4 d組(96 h，A4組、B4組）、5 d組(120 h、A5組、B5組)、6 d組(144 h、A6組、B6組)共六個小組，每小組小鼠13只。共計156只。對照組(C組)給予注射用水(C液)，小鼠13只。

1.3 試驗方法 A組和B組按每只小鼠30 μl/次(每側鼻腔各15 μl/次)，鼻腔點滴的方式給藥[1]，A組為每日上、下午各一次，給予A液；B組為每日上午給藥一次，給予B液。按照分組分別連續給藥1 d、2 d、3 d、4 d、5 d和6 d，同時觀察實驗動物的用藥反應（有無活動弱、倦縮、食量減少、毛色差、嘶咬等）。并分別于給藥后的第2天、3天、4天、5天、6天和7天上午，采集各組小鼠呼吸道分泌液。C組按每只小鼠30 μl/次(每側鼻腔各15 μl/次)，鼻腔點滴的方式給予注射用水(C液)，每日上午一次，連續給藥6 d，于給藥后的第7天上午，采集小鼠呼吸道分泌液。

1.4 采集呼吸道及鼻腔分泌液方法 腹腔注射0.01%匹羅卡品60 μl/只·次，1 min后采集呼吸道及鼻腔分泌液，置于0.5 ml EP管中，-20℃保存[1]。分別檢測干擾素。干擾素檢測試劑購于北京中尚博奧生物技術有限公司，分裝eBioscience試劑，貨號ME020，批號140206。檢測儀器全自動多功能酶標儀(MULTISKAN MK3，Thermo，USA)。

1.5 統計學方法 應用SPSS17統計軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差()表示，組間兩兩比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 A組INFs檢測結果 A組內各小組鼻腔分泌物中檢測的干擾素，呈逐步增多趨勢，其中A5組達到峰值，各小組與對照組比較差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)。A組內A1組分別與其他各組間進行比較分析，A1組與A2組、A1組與A3組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，A1組與A4組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，A1組與A5組、A1組與A6組比較差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表1和圖1。

表1 A組與C組INFs檢測結果比較()

表1 A組與C組INFs檢測結果比較()

注：A1組與C組比較，t=3.244、P=0.004；A1組與A2組比較，t=-0.962、P=0.346；A1組與A3組比較，t=-1.834、P=0.079；A1組與A4組比較，t=-2.276、P=0.032；A1組與A 5組比較，t=-5.522、P=1.12×10-5；A1組與A6組比較，t=-3.697、P=0.001。

圖1 A組干擾素產生的動態變化

2.2 B組INFs檢測結果 B組內各小組鼻腔分泌物中檢測的干擾素呈逐步增多趨勢，其中B5組達到峰值，各小組與對照組比較，除B1組與對照組比較差異有統計學意義(P=0.037)，其他各組與對照組比較差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)。除B1組與B2組比較差異無統計學意義(P=0.155)，B1組與B3組比較差異有統計學意義外(P=0.032)，B1組與組內其他各組比較差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表2和圖2。

表2 B組INFs檢測結果及小組間比較

圖2 B組干擾素產生的動態變化

3 討論

IFNs誘導劑可誘導機體呼吸道黏膜上皮細胞產生IFNs，使局部形成抗病毒狀態，從而可以應用于呼吸道病毒感染性疾病的預防和治療。目前，國內外對IFNs誘導劑作為抗病毒藥物的研究和應用報道越來越多[2-6]，給藥方式包括涂(軟膏)于鼻腔、滴鼻和口服，研究涉及的呼吸道感染性病毒包括：流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒等[7]。

本研究是在證實了多種高效IFNs誘導劑通過呼吸道給藥，可以有效誘導小鼠呼吸道產生IFNs[8]，又證實了聚肌胞、阿比朵爾誘導小鼠呼吸道產生IFNs達到峰值的時間，以及持續給藥可以持續誘導產生足量IFNs的基礎之上[9]，進一步對比觀察了聚肌胞、阿比朵爾從鼻腔給藥，誘導小鼠呼吸道產生足量IFNs的最短時間，和達到平臺期（是指該期各組的數值與同組初始期數值比較，差異非常顯著）的時間。結果表明：(1)聚肌胞、阿比朵爾通過鼻腔給藥，1 d(24 h)就可以誘導呼吸道黏膜產生足量IFNs。(2)持續通過鼻腔給予聚肌胞、阿比朵爾，隨著給藥時間的延長，呼吸道分泌物中的干擾素含量呈增長趨勢，逐步達到平臺期。(3)通過鼻腔滴入適量聚肌胞溶液從第5天開始，誘導呼吸道黏膜產生的干擾素達到平臺期。(4)通過鼻腔滴入適量阿比朵爾溶液從第4天開始，誘導呼吸道黏膜產生的干擾素達到平臺期。動物在整個實驗過程中都有較好的適應性。

此次實驗證明：聚肌胞、阿比朵爾制劑通過呼吸道局部給藥，可以在較短時間(24 h)誘導呼吸道局部黏膜產生足量干擾素，分別于第5天、第4天在呼吸道分泌物中達到較高水平的平臺期，在呼吸道局部形成廣譜抗病毒狀態。高效干擾素誘導劑溶液呼吸道給藥，比其他途徑給藥以及注射疫苗產生作用時間（一般為14 d[10]左右)短、抗病毒范圍寬，尤其是對于應急預防對干擾素敏感的呼吸道病毒感染性疾病，特別是對未知的呼吸道病毒感染性疾病暴發流行的預防有重要意義，應用前景廣闊。

(志謝：江蘇吳中醫藥集團有限公司蘇州制藥廠饋贈鹽酸阿比朵爾原料粉劑，特此感謝！)

[1]沈富兵,鄭崛村,程曦,等.新城疫病毒合用中藥黃芪誘生內源性干擾素的研究[J].成都醫學院學報,2008,3(1):24-60.

[2]曹悅群,孫乃玲.鹽酸阿比朵爾對呼吸道合胞病毒活性抑制作用[J].中國公共衛生,2013,29(12):1838-1840.

[3]田兆興,任乃剛,閆崴,等.鹽酸阿比朵爾干混亂懸劑治療病毒性上呼吸道感染的臨床研究[J].中國臨床藥理學雜志,2013,29 (2):104-105.

[4]Wu QF,Wang W,Dai XY,et al.Chemical compositions and anti-influenza activities of essential oils from Mosla dianthera[J].J Ethnopharm,2012,139(2):668-671.

[5]Masycheva VI,Danilenko ED,Sergeev AN.The influence of interferon inducer,a stimulator of innate immunity,on influenza[J].Eur J Immuno,2009,39(1):S250.

[6]Romantsov MG,Golofeevskiǐ SV.Cycloferon efficacy in the treatment of acute respiratory tract viral infection and influenza during the morbidity outbreak in 2009-2010[J].Antibiot Khimioter,2010, 55(1-2):30-35.

[7]Kumaki YL,Day CW,Bailey,et al.Induction of interferon-gamma-inducible protein 10 by SARS-CoV infection，interferon alfacon 1 and interferon inducer in human bronchial epithelial Calu-3 celland BAL B/c mice[J].Antivir Chem Chemother,2010,20 (4):169-177.

[8]王洪波,樊鳳艷,劉娟,等.呼吸道給藥誘導產生干擾素的實驗研究[J].海南醫學,2012,23(19):16-18.

[9]王洪波,樊鳳艷,李景琦,等.聚肌胞、阿比朵爾呼吸道給藥誘導產生干擾素時效性研究[J].海南醫學,2013,24(21):3133-3135.

[10]金奇.醫學分子病毒學[M].北京:科學出版社,2001:656.

Study on the shortest time of interferon production induced by Poly I:C and Arbidol.

WANG Hong-bo,FAN Feng-yan,QI Shu-yuan,LIU Juan.
Department of Blood Transfusion,General Hospital of Air Force,Beijing 100142, CHINA

ObjectiveTo discuss the shortest time for the interferon inducers Poly(I:C)and Arbidol to produce enough interferon in the local respiratory tract mucosa and the time to reach a plateau by administration. MethodsWe respectively gave experimental animals poly(I:C)(group A),Arbidol(group B)and water for injection(group C,control group)for nasal adminstration for 1～6 days,and then collected the nasal secretions since one day after the drug administration,detected the contents of interferon and compared the difference between two groups. There were a total of 169 Kunming mice,as experimental animals,with 78 in groupAand 78 in group B,13 in group C..Results(1)Poly(I:C)and Arbidol can induce adequate IFNs in the respiratory tract mucosa since the first day of nasal administration.(2)After the continuous stimulation of Poly(I:C)and Arbidol,we found that contents of interferonin respiratory tract secretions increased gradually,and finally reached to the plateau.(3)Poly(I:C)can induce respiratory tract mucosa to produce interferon to reach a plateau since the fifth day of nasal administation.(4)Arbidol can induce respiratory tract mucosa to produce interferon to reach a plateau since the fourth day of nasal administation.(5)All experimental animals had good adaptability to the above inducers during the whole experiment process..ConclusionNasal administration of both Poly(I:C)and Arbidol can induce respiratory tract mucosa to produce enough interferon from the first day while their times of reaching to a plateau were respectively 5 days(Polyinosinic) and 4 days(Arbidol).

Interferon(IFNs);Inducer;Pespiratory;Time

R-332

A

1003—6350（2014）22—3280—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1288

2014-05-15)

王洪波。E-mail：15611161158@163.com