冷凝集致血常規(guī)多項(xiàng)參數(shù)失真一例及處理分析

鹿紅梅，張振惠，嚴(yán)乃富，趙存英，楊桐

（中國人民解放軍第513醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅 蘭州 732750）

·短篇報(bào)道·

冷凝集致血常規(guī)多項(xiàng)參數(shù)失真一例及處理分析

鹿紅梅，張振惠，嚴(yán)乃富，趙存英，楊桐

（中國人民解放軍第513醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅 蘭州 732750）

目的探討冷凝集對(duì)血常規(guī)各項(xiàng)參數(shù)的影響及消除方法。方法對(duì)一冷凝集標(biāo)本分別在37℃水浴30 min和置換血漿的方案處理后上機(jī)測試，觀察血常規(guī)各項(xiàng)參數(shù)的變化。結(jié)果冷凝集標(biāo)本直接檢測時(shí)紅細(xì)胞(RBC)和紅細(xì)胞比容(HCT)顯著降低，平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)和平均血紅蛋白濃度(MCHC)異常升高，血紅蛋白(Hb)與RBC比例明顯異常。37℃水浴30 min RBC、HCT有所上升，但MCH、MCHC仍超出檢測范圍，出現(xiàn)極度偏離。血漿置換法白細(xì)胞(WBC)、RBC、HCT、MCH、MCHC恢復(fù)正常，但血小板(PLT)明顯下降。結(jié)論血常規(guī)檢驗(yàn)中冷凝集標(biāo)本獲取正確結(jié)果的最佳處理方案是將上述方法結(jié)合起來進(jìn)行報(bào)告，除PLT采用水浴后或直接測試的檢測結(jié)果外，其他均采用血漿置換的檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確。

冷凝集；血常規(guī)；水浴；置換血漿

大多數(shù)由肺炎支原體引起的原發(fā)性非典型性肺炎患者，其血清中常含有較高滴度的寒冷紅細(xì)胞凝集素(簡稱冷凝集素)，它能與患者自身紅細(xì)胞或“O”型人紅細(xì)胞于0℃～4℃條件下起凝集反應(yīng)，在37℃時(shí)已凝集的紅細(xì)胞呈可逆性的完全散開，冷凝集試驗(yàn)有助于支原體肺炎的診斷。現(xiàn)將我院遇到的1例冷凝集標(biāo)本導(dǎo)致血液分析儀測定結(jié)果異常的情況進(jìn)行分析，并對(duì)消除方法進(jìn)行探討：

1 資料與方法

1.1 一般資料患者，男，22歲，2013年2月因“咳嗽、咳痰2周”入院。患者呈刺激性咳嗽，夜間加重，劇烈咳嗽時(shí)伴左側(cè)胸痛，胸部X線示：左下肺片狀模糊影，考慮左下肺炎。出現(xiàn)發(fā)熱、寒顫，高達(dá)38.9℃。查體：咽部充血，雙側(cè)扁桃體Ⅰ°腫大，雙肺叩診清音，雙肺呼吸音清，未聞及干、濕性啰音及胸膜摩擦音，心律齊，未聞及雜音，腹軟，無壓痛、反跳痛，肝、脾肋下未觸及，肝區(qū)、腎區(qū)無叩痛，雙下肢無水腫。血常規(guī)檢查：白細(xì)胞(WBC)16.0×109/L，紅細(xì)胞(RBC) 1.25×1012/L，血紅蛋白(Hb)156 g/L，紅細(xì)胞比容(HCT)17.0，平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)和平均血紅蛋白濃度(MCHC)均超出檢測范圍，未顯示結(jié)果。肉眼觀察：EDTA-K2抗凝的靜脈血約1 ml，顛倒混勻試管內(nèi)血液，可見管壁上RBC呈肉眼可見細(xì)小顆粒狀凝集，疑為冷凝集所致。于是重新采末稍血20μl，加入稀釋液中，混勻后發(fā)現(xiàn)稀釋液中出現(xiàn)大量明顯肉眼可見小凝塊。用生理鹽水進(jìn)行手工計(jì)數(shù)，EDTA-K2的抗凝血在生理鹽水中呈強(qiáng)凝集狀態(tài)，無法計(jì)數(shù)。血涂片自然晾干后經(jīng)瑞特染色，油鏡下觀察RBC形態(tài)，大部分RBC呈凝集狀，僅有少量散在分布的RBC。

1.2 儀器及試劑日本光電NEK-822K血細(xì)胞分析儀，試劑應(yīng)用相應(yīng)配套的試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法將冷凝集樣本采用下述兩種方法處理后上機(jī)進(jìn)行測定：①37℃水浴30 min保溫立即測試；②血漿置換法：將標(biāo)本500 g離心5 min，棄上清后加入等量生理鹽水混勻，反復(fù)洗滌3次，測試后觀察WBC、RBC、HCT、Hb、MCH、MCHC和血小板(PLT)的結(jié)果變化。

2 結(jié)果

對(duì)于出現(xiàn)冷凝集的血常規(guī)標(biāo)本，由表1在三種不同條件下檢測結(jié)果可知，冷凝集素對(duì)于PLT和Hb影響不大，符合CLIA能力驗(yàn)證計(jì)劃的分析質(zhì)量要求[1]；對(duì)血液分析儀的WBC結(jié)果影響較大，且冷凝集素效價(jià)越高影響越大；在直接檢測法和37℃水浴法中冷凝集素對(duì)RBC、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、MCH、MCHC的檢測造成嚴(yán)重干擾，且效價(jià)越高影響越嚴(yán)重。凝集素經(jīng)37℃水浴法，不能有效消除冷凝集素的干擾。置換血漿法可以有效排除這些干擾，使除PLT外所有參數(shù)均恢復(fù)到正常范圍，計(jì)數(shù)結(jié)果得到明顯改善。由于置換過程會(huì)造成PLT的丟失，故可采用37℃水浴法或者直接上機(jī)檢測的PLT結(jié)果報(bào)告。

表1 三種方法檢測冷凝集血液的血常規(guī)檢測結(jié)果

3 討論

冷凝集素是自身抗體的一種，多數(shù)為IgM型，少數(shù)為IgG、IgA或它們的混合型，血液離體后溫度降低，較高效價(jià)的冷凝集素與自身的紅細(xì)胞抗原發(fā)生一種可逆性的凝集，從而阻塞了微血管循環(huán)引起紫紺等表現(xiàn)，病情嚴(yán)重者可以引起自身溶血反應(yīng)[2]。大部分人都有一定的冷凝素抗體，但其滴度一般在1：16以下，且在20℃以上不易發(fā)生凝集反應(yīng)，其凝集常見于支原體肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、瘧疾、肝硬化、多發(fā)性骨髓瘤、中度貧血及淋巴瘤等[3]。本例為支原體肺炎患者，冷凝集實(shí)驗(yàn)1:512。

實(shí)驗(yàn)中我們對(duì)各種冷凝集處理方案進(jìn)行了比對(duì)研究，發(fā)現(xiàn)37℃水浴30 min進(jìn)行測定，RBC數(shù)值已略顯升高，但MCH和MCHC仍超出檢測范圍。考慮其原因可能為單純樣本加溫時(shí)紅細(xì)胞仍存在冷凝集現(xiàn)象，在測試過程中血液遇冷試劑后，冷凝集再次發(fā)揮作用促使紅細(xì)胞凝集，導(dǎo)致紅細(xì)胞假性減少，MCV假性增大。故考慮樣本試劑雙重加溫法以保證整個(gè)檢測過程中血液各種成分的溫度接近37℃，使結(jié)果較單純樣本加溫檢測更準(zhǔn)確。但樣本試劑雙重加溫亦存在弊端：①血細(xì)胞分析儀系統(tǒng)測試對(duì)溫度的要求是15℃～30℃，超出此溫度范圍可能對(duì)儀器性能造成影響；②冬季室溫低，即使加溫在測試循環(huán)的過程中也會(huì)很快冷卻；③溶血?jiǎng)┖拖♂屢后w積大，加溫不方便。而血漿置換法，除因置換過程中造成血小板部分丟失外，其他所有參數(shù)恢復(fù)到正常范圍，可見置換血漿法是有效消除冷凝集干擾血常規(guī)檢測的好方法，但此法亦存在操作繁瑣、費(fèi)時(shí)較長的問題，故遇此情況應(yīng)與臨床及時(shí)溝通，以免在發(fā)放報(bào)告的時(shí)效性方面產(chǎn)生分歧。

本實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)冷凝集對(duì)血液分析儀的WBC結(jié)果影響較大，其原因可能為冷凝集發(fā)生時(shí)，紅細(xì)胞聚集成團(tuán)導(dǎo)致檢測時(shí)RBC計(jì)數(shù)明顯下降和體積增大，采用電阻抗法檢測白細(xì)胞的儀器，可能因?yàn)槟募t細(xì)胞在儀器特定的時(shí)間內(nèi)不能被溶血?jiǎng)┩耆芙猓瑱z測時(shí)被認(rèn)為是白細(xì)胞而導(dǎo)致WBC計(jì)數(shù)假性升高[4]。

對(duì)于肉眼觀察無明顯顆粒的冷凝集標(biāo)本，可利用下述規(guī)律：一般正常人Hb/RBC的比值約為30：1，Hb單位為g/L，RBC的單位為1012/L[5]。若Hb/RBC的比值比30大很多，且MCH、MCHC異常升高，則提示有可能是冷凝集現(xiàn)象。

近年來，支原體感染引起的冷凝集病例在臨床上日益增多。由于支原體無細(xì)胞壁，部分常用抗生素(如頭孢菌素類和青霉素類)對(duì)支原體感染的治療往往無效；同時(shí)，由于缺乏特異性的癥狀，加之支原體培養(yǎng)十分困難，血清支原體抗體檢測也部分存在假陽性和假陰性等諸多因素，使其診斷十分棘手。而血液標(biāo)本在體外出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象不失為輔助診斷支原體感染廉價(jià)、方便和快捷的診斷方法。故檢驗(yàn)人員應(yīng)準(zhǔn)確識(shí)別和處理冷凝集標(biāo)本，發(fā)出準(zhǔn)確報(bào)告，并及時(shí)與臨床溝通，為解決臨床問題和消除患者痛苦提供依據(jù)。

[1]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:80,193.

[2]孫寶旗,張慶.冷凝集素對(duì)2例血常規(guī)檢測1l多項(xiàng)參數(shù)干擾分析[J].河北醫(yī)藥,2010,8(32):1124-1126.

[3]洪玲珍.室溫下冷凝集素干擾血液分析儀多項(xiàng)檢測參數(shù)1例[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(8):1347-1348.

[4]樂家新,馬俊龍,徐菡,等.紅細(xì)胞冷凝集對(duì)不同類型血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果的影響探討[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備,2009,30(2):69-71.

[5]曾令軍,李莉,吳慶,等.高效價(jià)冷凝集對(duì)血常規(guī)檢測結(jié)果的影響及消除方法探討[J].罕少疾病雜志,2011,18(5):2-6.

R446.11+1

D

1003—6350（2014）13—2012—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0783

2013-12-15)

鹿紅梅。E-mail：deer0818@sina.com