HPLC測定鹽酸頭孢甲肟含量的方法學驗證

史瑞　　　李金花

摘 要：目的 對建立的HPLC法測定鹽酸頭孢甲肟含量方法，進行方法學驗證。方法 儀器：Agilent 1260，色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料的色譜柱，流動相：乙腈-水-冰醋酸（15：45：1），檢測波長：254nm，進樣量：20μl。結果 線性和范圍0.05522mg/ml～0.14678mg/ml，精密度RSD=0.03%，回收率98.4%～101.6%，耐用性對同一批次本品含量測定結果的RSD%為0.81%（n=13）。結論 建立的方法準確、可靠，能夠滿足實際生產要求。

關鍵詞：鹽酸頭孢甲肟；HPLC；方法學驗證

引言

鹽酸頭孢甲肟屬于第三代頭孢菌素，對革蘭氏陰性和陽性的需氧菌和厭氧菌均有抗菌作用。生產工藝中常利用HPLC測定鹽酸頭孢甲肟含量的方法，目前已經建立的方法是：色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料的色譜柱，流動相乙腈-水-冰醋酸（15：45：1），檢測波長254nm，進樣量20μl。

分析步驟：按外標法以峰面積計算供試品中頭孢甲肟（C16H17N9O5S3）的含量。

計算公式：

式中：RU：供試品溶液中主峰響應值；RS：對照品溶液中主峰響應值；CS：對照品溶液濃度mg/ml；CU：供試品溶液濃度mg/ml。

對該方法進行方法學驗證，證明方法是否準確、可靠，能夠滿足實際生產要求。

1 儀器與試劑

儀器：天平：Mettler XS205、高效液相色譜：Agilent1260。

試劑：冰醋酸（分析純、上海市化學試劑一廠）、磷酸（分析純、天津市科密歐）、乙腈（色譜純、TEDIA）。

2 實驗方法

2.1 進樣精密度驗證

取鹽酸頭孢甲肟對照品適量，按照含量測定項下的方法配制對照品溶液，精密量取10？滋l注入液相色譜儀，連續進樣3次，計算其峰面積測量值的相對標準偏差。

2.2 回收率驗證

取鹽酸頭孢甲肟對照品25.09mg，置25ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH6.6）10ml超聲使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密稱取對照品20.44mg、20.58mg、20.53mg，置25ml量瓶中，同法操作，作為供試品溶液，分別精密量取對照品溶液和供試品溶液20μl進液相色譜儀，計算回收率。

2.3 線性驗證

取鹽酸頭孢甲肟對照品適量，精密稱定，加磷酸鹽緩沖液（pH6.8）適量超聲使溶解，用流動相稀釋至每1ml約含2mg鹽酸頭孢甲肟的溶液，分別精密量取0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml，用流動相稀釋成10ml，搖勻。分別取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行線性回歸。

3 實驗結果

3.1 進樣精密度驗證結果

主峰峰面積的相對標準偏差不大于2.0%，主峰保留時間的相對標準偏差不大于1.0%，主峰的理論板數符合質量標準規定（結果見表1）。

表1 含量測定系統適用性和進樣精密度結果

3.2 回收率驗證結果

試驗結果表明RSD小于2.0%，且回收率在98.4%～101.6%之間，說明該方法測定樣品中頭孢甲肟含量回收率較好（結果見表2）。

3.3 線性驗證結果

試驗結果表明，鹽酸頭孢甲肟在濃度0.05522mg/ml～0.14678mg /ml范圍內與峰面積線性相關性較好（結果見表3，圖1）。

表3 鹽酸頭孢甲肟含量線性試驗結果

圖1 鹽酸頭孢甲肟含量線性試驗

4 實驗結論

綜合以上數據，含量進樣精密度RSD=0.03%；鹽酸頭孢甲肟濃度在0.05522mg/ml～0.14678mg/ml范圍內，線性相關性較好；回收率試驗結果RSD為0.55%小于2.0%，且回收率均在98.4%～101.6%之間，說明該方法測定樣品中頭孢甲肟含量回收率較好；得出如下結論：建立的方法準確、可靠，能夠滿足實際生產要求。

5 結束語

中國藥典自2000版開始對藥品質量標準分析方法驗證提出了明確的要求和指導原則，參考國家食品藥品監督管理局標準YBH12922006、YBH09262006、日本藥典XVI版、《美國藥典》35版鹽酸頭孢甲肟質量標準，其含量測定項下色譜條件基本一致，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-冰醋酸（15：45：1）為流動相，檢測波長254nm。經過方法學的驗證證實本方法的可重復性高，線性范圍較寬，能夠滿足日常生產的對產品含量測定的要求；回收率驗證體現出了較高的回收效果，能夠有效地提該產品投產后的生產效率和經濟效益。

參考文獻

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