免疫比濁法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白方法的方法學比較

徐活成黃惠芳賴玉琴

（1 廣州市中西醫結合醫院檢驗科，廣東 廣州 510800；2 廣州市花都區婦幼保健院（胡忠醫院）檢驗科，廣東 廣州 510800）

免疫比濁法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白方法的方法學比較

徐活成1黃惠芳2賴玉琴2

（1 廣州市中西醫結合醫院檢驗科，廣東 廣州 510800；2 廣州市花都區婦幼保健院（胡忠醫院）檢驗科，廣東 廣州 510800）

目的探討免疫比濁法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白（HbAlc）結果的差異并評價其偏倚。方法選取我院2013年5月至2013年9月收集的120例常規標本，采用免疫比濁法和高效液相色譜法對標本進行HbAlc檢測，評價兩種檢測結果的相關性及偏倚。結果HbAlc濃度在0～14.0%范圍內，免疫比濁法和高效液相色譜法均有良好的重復性，數據統計分析，t值分別為0.332、0.281、0.554，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論通過方法學評價，免疫比濁法和高效液相色譜法測定HbAlc精密度符合臨床要求，結果具有可比性，均適合臨床的治療監測。

糖化血紅蛋白；免疫比濁法；高效液相色譜法；精密度

糖尿病是一種慢性疾病，近年來此病在很多國家和地區的患者呈逐年遞增的趨勢，糖化血紅蛋白是糖類與血紅蛋白經非酶促反應結合而成，其合成是緩慢和不可逆的[1]。糖化血紅蛋白（HbAlc）是診斷糖尿病和監測糖尿病治療效果的重要指標，其可反映患者3個月內的血糖水平，對于評估當前血糖濃度有重要意義。目前HbAlc的監測方法有：離子交換高效液相色譜法、離子交換層析法、免疫抑制比濁法等。高效液相色譜法是國際標準化檢測方法，臨床實驗結果表明，免疫比濁法和高效液相色譜法對患者標本檢測的基本性能可滿足患者的監測要求[2]，為研究兩種檢測方法的差異程度，特進行以下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標本來源于門診血糖糖尿病患者和內分泌科住院患者全血標本120份，均采用EDTA-K2抗凝。患者年齡在26～78歲，平均（48.5±4.3）歲。

1.2 方法

儀器采用東芝120全自動生化儀，儀器定期校準，每日用各儀器制定或提供的高、低值指控品進行質量控制。采用NCCLS-EP5進行精密度評價，選擇有醫學決定水平的異常和正常濃度樣品，校準后隔1 h對樣本測定一次，連續測定10次，每種方法可得到20個數據，計算標準差、均值作為批內精密度。嚴格按照說明書，肝素鋰標本取10μL＋1000 μL溶血素處理，免疫比濁法和高效液相色譜法檢測HbAlc結果，計算HbAlc結果。有關數據進行統計分析。

1.3 數據處理

使用SPSS19.0軟件包對本次實驗數據進行處理，以95%為可信區間，計算結果顯示P＜0.05時，表示樣本差異明顯且有統計學意義。診斷準確率為計數資料，組間比較方法為χ2檢驗。

2 結 果

兩種方法測試的HbAlc結果，低高濃度均值比較，見表1。

表1 兩種方法測試的HbAlc結果，低高濃度均值比較

HbAlc濃度在0～14.0%范圍內，免疫比濁法和高效液相色譜法均有良好的重復性，數據統計分析，t值分別為0.332、0.281、0.554，差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討 論

大量研究表明，長期監測、控制血糖能減少糖尿病相關并發癥的發生，HbAlc是糖尿病患者血糖控制指標，可作為血糖代謝情況的手段，對早期發現糖尿病、指導糖尿病治療有積極意義。HbAlc在糖尿病的篩查中有早期提示的價值，可作為輕癥[3]、隱形糖尿病的早期診斷，在治療過程中，是評價血糖控制好壞的重要標準，血糖控制效果欠佳時，濃度可升高，此外HbAlc可評估糖尿病慢性并發癥的發生與發展，其檢測越來越受到重視[4]。HbAlc是血液中與葡萄糖結合的部分血紅蛋白，血壓中葡萄糖濃度升高時，HbAlc含量也會升高。HbAlc是檢測120 d內平均血糖水平，與空腹及胰島素使用無關。

目前HbAlc的檢測方法包括高效液相色譜法、電泳法、微柱法、親和層析法等，隨著技術不斷進步[5]，先進儀器不斷進入檢驗領域，免疫比濁法和高效液相色譜法成為臨床最常用的方法。

美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP）推薦高效液相色譜法是檢測HbAlc的金標準，在本組資料中, HbAlc濃度在0～14%范圍時，兩種檢測方法都有良好的重復性[6]，兩組數據沒有顯著性差異，精密度均符合臨床要求，結果具有可比性，適合臨床用于糖尿病治療監測。

隨著自動生化分析儀的普及，免疫比濁法已經廣泛應用于基層醫院，但試劑的選擇，溶血劑和血細胞的比例，加入時間等都影響檢測結果的準確性[7]，單克隆抗體不可識別的希夫堿，因Hb變異體的普遍存在對免疫比濁法的重復性及準確性造成巨大挑戰，為了提高其準確性和可重復性，免疫比濁法在操作上力求標準化，在工作人員、試劑選擇、血細胞比例等方面做到標準化。高效液相色譜法使HbAlc的準確性及可重復性得到很大提高，免疫比濁法應與高效液相色譜法進行校正或設立參考區間[8]，對檢測方法進行比較，臨床醫師在分析結果時也要了解方法學造成的檢測差異，這對病情的診斷、控制都有重要作用。

兩種檢測方法在操作環節嚴格控制下，檢測結果均有較好的吻合性。通過方法學評價，免疫比濁法和高效液相色譜法測定HbAlc精密度符合臨床要求，結果具有可比性，均適合臨床的治療監測。

[1] 周丹秋,王東明,馮仁豐.免疫抑制比濁法測定HbAlc的可靠性評價[J].臨床檢驗雜志,2012,21(5):291.

[2] 托馬斯,朱漢民,沈霞,等.糖化血紅蛋白[J].臨床實驗診斷學,2011, 5(1):112-113.

[3] 姚雪琴.空腹血糖和糖化血紅蛋白的相關性分析[J].檢驗醫學與臨床,2012,3(6):280.

[4] Weber M,Harem C.Role of Prtype natriuretic peptide(BNP)and HbAlc in clinical routine[J].Heart,2009,92(6):843-849.

[5] De Lemos JA,Morrow DA,Bentley JH,et a1.The prog-nostic Value of B-type natriuretic peptide in patients withacute coronary syndromes[J]. N Engl J Med,2011,345(14):1014-1021.

[6] 郭世春,吳蕊,黃昭喧,等.糖尿病醫院感染患者糖化血紅蛋白的監測意義[J].中國感染控制雜志,2012,5(2):148-149.

[7] Inoue T,Sakuma M ,Yaguchi I,et a1.Early recanalizationand plasma brain natriuretic peptide as an indicator of leftventricular function after acute myocardial infarction[J].Am Heart J,2012,143(5):790-796.

[8] 紀立農.用糖化血紅蛋白診斷糖尿病[J].中國糖尿病雜志,2010,17 (8):561-562.

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1671-8194（2014）24-0072-02