血漿uPA、uPAR與鼻咽癌臨床分期的相關(guān)性研究

朱俊秀周理想李相鴻梁大虎陳艾東*

（1 蕪湖市弋江區(qū)醫(yī)院，安徽 蕪湖241001；2 皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院臨床藥學(xué)部， 安徽 蕪湖 241001）

血漿uPA、uPAR與鼻咽癌臨床分期的相關(guān)性研究

朱俊秀1周理想2李相鴻2梁大虎2陳艾東2*

（1 蕪湖市弋江區(qū)醫(yī)院，安徽 蕪湖241001；2 皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院臨床藥學(xué)部， 安徽 蕪湖 241001）

目的探討尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）及其受體（uPAR）的血漿濃度與鼻咽癌臨床分期和惡性程度的相關(guān)性。方法收集86例鼻咽癌患者血液標(biāo)本，35例健康人血液標(biāo)本作對(duì)照。用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）分別檢測(cè)uPA和uPAR的血漿濃度。結(jié)果與健康對(duì)照患者比較，鼻咽癌組血漿uPA濃度明顯升高（P＜0.05），且鼻咽癌組血漿uPA、uPAR在鼻咽癌各期之間均有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論鼻咽癌的臨床分期和惡性程度與血漿uPA濃度高度正相關(guān)，可作為鼻咽癌診斷和預(yù)后估計(jì)的指標(biāo)及治療的新靶點(diǎn)。

尿激酶型纖溶酶原激活物；尿激酶型纖溶酶原激活物受體；鼻咽癌

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）好發(fā)于中國南方各省及東南亞地區(qū)，其病因涉及EB病毒、遺傳因素（遺傳易感性）、多種癌基因和抑癌基因的相互作用以及環(huán)境和飲食因素。近年來人們通過對(duì)腫瘤的深入研究，認(rèn)識(shí)到癌變是一個(gè)涉及多重基因事件的復(fù)雜過程。鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展及其生物學(xué)行為的研究也已進(jìn)入基因水平。在已知的蛋白酶中，尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）是一種絲氨酸蛋白酶類[1]，uPAR是uPA的特異性受體，它們與抑制劑相互作用，為腫瘤細(xì)胞提供局限在細(xì)胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移[2]。本研究分析鼻咽癌與健康者之間的uPA，uPAR血漿濃度，分析以上各項(xiàng)指標(biāo)與鼻咽癌的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源：皖南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2009年7月至2011年7月收治的鼻咽癌患者86例，年齡22～69歲，其中男67例，女19例，均未接受放化療治療，所有患者均經(jīng)鼻咽腔組織病理活檢確診，中國鼻咽癌2008臨床分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期。健康對(duì)照組為皖南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院體檢的正常人35例，年齡22～66歲，其中男27例，女8例。健康對(duì)照組均經(jīng)病史、體檢、血常規(guī)、血生化、心電圖、胸透及五官、眼科等專科檢查確定為健康人群，且2周內(nèi)均未接受抗凝及溶栓治療。

1.2 主要儀器：Q/FTH008-2000 PCR擴(kuò)增儀（日本株式會(huì)社）；

DU640核酸定量分析儀（美國Bio-Rad）；UVP-8000凝膠紫外光成像儀（美國UVP）；超低溫冰箱（丹麥Harris）；雙蒸水儀（美國Millipore）。

1.3 主要試劑：人尿激酶型纖溶酶原激活因子ELISA試劑盒為美國原裝生產(chǎn)，大連信邦生物試劑公司分裝。

1.4 方法：清晨抽空腹靜脈血2 mL于EDTA-K2抗凝管中，立即顛倒混勻，6 h內(nèi)4000 rpm離心10 min，分離血漿和白細(xì)胞層，分裝Epp管中，-80 ℃保存待用。采用ELISA試劑盒測(cè)定。在全自動(dòng)酶標(biāo)儀上測(cè)出A450的值和濃度，最后乘以稀釋倍數(shù)，計(jì)算出uPA的血漿濃度（ng/mL）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

鼻咽癌組血漿uPA、uPAR濃度與正常對(duì)照組之間均有顯著性差異（P＜0.05）；uPA、uPAR在鼻咽癌各期之間均有顯著性差異（P＜0.05）。見表1。

表1 86例鼻咽癌患者各臨床分期uPA血漿濃度與正常對(duì)照組比較

3 討 論

鼻咽癌是一種具有明顯的地區(qū)聚集性的上皮起源性的惡性腫瘤，可在疾病早期原發(fā)病灶不明顯時(shí)便發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。然而，鼻咽癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的確切分子機(jī)制仍不很清楚。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移與其自身分泌蛋白酶密切相關(guān)，在人類惡性腫瘤組織中，已知有絲氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶可能參與腫瘤的浸潤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，絲氨酸蛋白酶是參與這一復(fù)雜過程蛋白酶中的關(guān)鍵酶之一[3]。尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在乳腺癌，胃癌，軟組織肉瘤，肝細(xì)胞癌等均發(fā)現(xiàn)高水平[4]，且與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、短生存期等呈正相關(guān)。

尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）屬于一種絲氨酸蛋白酶類，有兩條二硫鍵相連的多肽鏈，一個(gè)C端的絲氨酸蛋白區(qū)和一個(gè)N端A鏈。最初分泌出來的uPA為單鏈的酶原形式（prouPA），在一些酶的作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈有活性的uPA，它激活無活性的纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶。uPAR是uPA的特異性受體，當(dāng)N端122個(gè)氨基酸切去后，以糖基化磷酸肌醇（GPI）的形式錨泊在胞膜上。它們與抑制劑相互作用，為腫瘤細(xì)胞提供局限在細(xì)胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。本研究顯示，鼻咽癌患者血漿中uPA明顯升高，與健康對(duì)照組比較具有顯著性差異。此外，鼻咽癌患者血漿中的uPA血漿濃度隨著臨床分期的增加而升高，且各分期間均有顯著性差異，提示uPA的持續(xù)升高與疾病的分期有關(guān)，與鼻咽癌的病程進(jìn)程相關(guān)。本資料所得結(jié)論與黃濤等[5]用ELISA法檢測(cè)鼻咽癌患者血漿uPA的結(jié)論相一致。

uPAR是uPA的特異性受體，它們與抑制劑相互作用，為腫瘤細(xì)胞提供局限在細(xì)胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，鼻咽癌患者血漿中uPAR的血漿濃度明顯升高，同樣，鼻咽癌患者血漿中uPAR隨著臨床分期的增加而增高，提示血漿中uPAR血漿濃度與鼻咽癌的病程進(jìn)展呈正相關(guān)，其可能是促進(jìn)鼻咽癌發(fā)生發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移的原因之一，同時(shí)也提示鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移可能是uPA、uPAR共同作用的結(jié)果。

綜上所述，uPA及uPAR在鼻咽癌的生長(zhǎng)、浸潤和轉(zhuǎn)移的過程中起著重要作用。隨著研究的逐漸深入，機(jī)制的闡明，以及大量臨床試驗(yàn)的進(jìn)行，uPA、uPAR可在臨床上為鼻咽癌的診斷及預(yù)后評(píng)估提供參考，并可能成為鼻咽癌治療的靶向目標(biāo)。

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[5] 黃濤,符生苗,梁茱,等.鼻咽癌組織中UPA及UPAR蛋白的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床耳鼻喉頭頸外科雜志,2009,23(11):517-519.

R739.63

B

1671-8194（2014）24-0075-02

皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院引進(jìn)人才基金（2010621）安徽省高等學(xué)校省級(jí)自然科學(xué)基金（KJ2012B202）

*通訊作者