乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因功能區單核苷酸多態性與宮頸癌的相關性研究

周史思 陳麗平 周海仙 浙江省溫州市中西醫結合醫院 溫州 325000

乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因功能區單核苷酸多態性與宮頸癌的相關性研究

周史思 陳麗平 周海仙 浙江省溫州市中西醫結合醫院 溫州 325000

目的 探討乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因（BRIP1）功能區5個單核苷酸多態性（SNP）位點與宮頸癌的相關性。方法 嚴格按照診斷標準，采集無親緣關系宮頸癌患者309例（病例組）及健康體檢者（對照組）315名靜脈血，提取基因組DNA，采用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術檢測5個SNP的基因型，采用SPSS11.5及Haploview4.2軟件分析各基因型、等位基因及單倍型頻率在兩組中的差異。結果 宮頸癌組與正常對照組的BRIP1基因rs4986764（外顯子18）及rs7213430（3'非翻譯區）位點基因型及等位基因頻率分布差異有統計學意義（P＜0.05）。宮頸癌組rs4986764位點C等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.036，OR=1.294，95%=1.017～1.647）；宮頸癌組rs7213430位點A等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.003，OR=1.435，95%CI=1.133～1.818）。連鎖不平衡分析發現一個單倍型（rs11079454-rs7213430-rs4986763）高度連鎖（D'＞0.9），宮頸癌組T-A-C單倍型頻率顯著高于對照組（P=0.018）。結論 BRIP1基因功能區rs4986764及rs7213430 SNP位點可能與宮頸癌有關，攜帶有rs4986764 C等位基因及rs7213430 A等位的個體可能更容易患宮頸癌。

宮頸癌；乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因；單核苷酸多態性

宮頸癌是全球婦女中最常見的惡性腫瘤之一，僅次于乳腺癌而居于第二位，在發展中國家尤為常見，位居各種惡性腫瘤之首[1]。宮頸癌受遺傳與環境因素共同作用。家系、雙生子及寄養子研究表明宮頸癌的遺傳度為30%～50%[2]。最近研究發現宮頸癌與乳腺癌易感基因相互作用蛋白1（BRCA1-interacting protein 1，BRIP1）基因關系密切[3-4]。為了系統研究BRIP1基因與中國漢族群體宮頸癌的相關性，筆者收集了309名宮頸癌患者及315名健康對照樣本，對BRIP1基因功能區5個單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）位點進行系統研究。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年3月—2013年12月于我院收集宮頸癌患者309例，均為漢族，年齡35～61歲，平均（42.16±5.38）歲。符合宮頸癌診斷標準：所有患者均經活檢或切除組織病理檢查確診為宮頸癌。同期從我院體檢中心收集無親緣關系的健康女性體檢者315名作為對照組，均為漢族，年齡32～62歲，平均（43.57±4.74）歲。兩組均有正常生育史，排除習慣性流產、其他軀體疾病、遺傳病及可能影響血液系統疾病者。所有參與者簽署知情同意書，并經我院倫理委員會批準。

1.2 方 法 EDTA抗凝真空采血管收集外周靜脈血3～5mL，采用TIANamp Blood DNA Kit全血基因組DNA提取試劑盒（天根，中國北京）提取基因組DNA，-20℃儲存備用。SNP分型是由上海邃志生物科技有限公司利用美國Sequenom公司的MassARRAY系統完成，該系統是基于基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術（MALDI-TOF）。PCR反應條件：94°C 15min；94°C 20s，56°C30秒，72°C 1min，共45個循環；最終72°C 3min。PCR擴增后，剩余的dNTP將被去磷酸消化掉，反應體系包括 1.53μL水、0.17μLSAP緩沖液、0.3單位堿性磷酸酶（Sequenom）。37°C 40min，后85°C 5min使酶失活。單堿基延伸反應在下列條件下進行：94°C 30s；94°C 5s，52°C 5s，80°C 5s 5個循環，共40個循環；最后72°C延伸 3min。使用 MassARRAY Nanodispenser（Sequenom）將最終的分型產物點樣到一塊384孔的spectroCHIP（Sequenom）上，并用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜進行分析。

1.3 統計學方法 應用GENEPOP v4.0行兩組基因型哈迪溫伯格（Hard-Weinberg）平衡檢驗。SPSS13.0軟件計算兩組等位基因頻率和基因型頻率；確切概率法（fisher exact test，FET）或Pearson's卡方檢驗兩組間等位基因頻率和基因型頻率分布差異。block根據D'＞0.9以及r2＞0.8進行定義。單倍型構建應用Haploview 4.0軟件進行構建。頻率＜5%單倍型被排除不再進行統計學檢驗。Pearson's卡方檢驗兩組間單倍型頻率及群體間差異分布。

2 結果

BRIP1基因5個多態性位點的基因型及等位基因頻率分布均符合Hard-Weinberg平衡定律。連鎖不平衡分析發現一個單倍型（rs11079454-rs7213430 -rs4986763）高度連鎖（D'＞0.9），見圖1。兩組基因型及等位基因頻率分布及統計學結果見表1。兩組單倍型頻率分布及統計學結果見表2。

兩組 BRIP1基因 rs4986764（外顯子 18）及rs7213430（3'非翻譯區）位點基因型及等位基因頻率分布差異有統計學意義（P＜0.05）。病例組rs4986764位點C等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.036，OR=1.294，95%CI=1.017～1.647）；病例組rs7213430位點A等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.003，OR=1.435，95%CI=1.133～1.818）。

表1 BRIP1基因功能區5個SNPs位點基因型及等位基因頻率分布 例（%）

連鎖不平衡分析發現有rs11079454-rs7213430-rs4986763構建的T-A-C單倍型頻率顯著高于正常對照組（P=0.018）。病例組中未發現T-G-T單倍型。

表2 BRIP1基因功能區5個SNPs位點單倍型頻率分布

圖1 BRIP1基因5個SNP位點連鎖不平衡結果

3 討論

BRIP1為一種DNA解旋酶，與乳腺癌易感基因1（breast cancer 1，BRCA1）相互作用，從而調節DNA修復和基因組穩定性[5]。BRIP1基因位于染色體17q22，編碼1249個氨基酸。含19個外顯子及18個內含子，基因長度為184-kb[6]。研究表明，BRIP1基因SNP與多種癌癥的發病相關[3-4，7]。然而，BRIP1基因對宮頸癌易感性的研究鮮有報道。

盡管本結果確切的分子機制尚不清楚，可能的解釋為BRIP1基因多態性可能會導致子宮頸BRIP1基因表達發生改變。我們推測基因變異可能在數量、性狀和疾病易感性兩個方面造成個體差異[8]。先前報道Arg173Cys（rs4988345）位點影響了BRIP1蛋白從細胞質向細胞核轉移及胞核定位，并且有可能改變乳腺癌的易感性，表明BRIP1遺傳變異可能造成的BRIP1基因潛在功能性變化[9-10]。本研究中，編碼區rs4986764（外顯子18中）也許會改變BRIP1的基因表達，導致宮頸癌的遺傳易感性增強。rs4986764及rs7213430功能性SNPs可能的具體作用尚待進一步探究。BRIP1基因的遺傳變異與多種癌癥的發病有關。根據報道[11-13]，rs4986764位點C等位基因與乳腺癌的風險增加相關。本研究發現 3’UTR中的rs7213430與宮頸癌的遺傳易感性相關，而與乳腺癌的遺傳易感性不相關[14]。越來越多的證據表明，3’UTR中的SNPs可能會改變與3’UTR結合的miRNA，從而對mRNA的表達進行調控[15]。BRIP1基因的3’UTR中的SNPs可能會影響mRNA的穩定性，并調控mRNA的表達[16]，從而影響宮頸癌的遺傳易感性。宮頸癌與乳腺癌的遺傳易感性中rs7213430的不一致性亟待更深入的研究。本研究表明，BRIP1基因功能區rs4986764及rs7213430 SNP位點可能與宮頸癌有關，攜帶有 rs4986764 C等位基因及rs7213430 A等位的個體可能更容易患宮頸癌。

我們進一步深入研究了功能區這5個多態性之間的相互關系。連鎖不平衡分析發現有rs11079454-rs7213430-rs4986763構建的單倍型存在強連鎖不平衡。單倍型分析顯示，宮頸癌病例組T-A-C單倍型頻率顯著高于正常對照組，進一步支持了先前報道的宮頸癌患者T-A-C-A單倍型頻率顯著增加[4]這一結果。這些結果表明，攜帶BRIP1基因的T-A-C單倍型的患者更容易罹患宮頸癌。

遺傳學研究有助于更好地理解宮頸癌的潛在發病機制。本研究表明BRIP1基因SNPs及其相關的單倍型在宮頸癌的遺傳易感性中可能發揮潛在作用。但這些SNPs如何影響BRIP1/FANCJ的功能尚待進一步的探討研究。

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修回日期：2014-06-16

Association of the Single Nucleotide Polymorphism in Functional Region of BRCA1-interacting Protein 1(BRIP1)with Cervical Cancer

ZHOU Shisi,CHEN Liping,ZHOU Haixian. Integrative Medicine Hospital of Wenzhou,Wenzhou(325000),China

Objective To investigate the association between 5 single nucleotide polymorphisms（SNP）of the BRCA1-interacting protein 1（BRIP1）and the risk of cervical cancer.Methods The participants enrolled in this study included 309 patients with cervical cancer and 315 healthy women as healthy controls.Blood samples were drawn from theseparticipants tocollect BRIP1 gene DNA;then 5 SNPs（rs2048718,rs4986764,rs4986763, rs11079454,rs7213430）of the BRIP1 gene was analyzed by using the MassARRAY system and compared by SPSS11.5 and Haploview 4.2 software.Results The genotype and allele frequency of rs4986764（exon 18）and rs7213430（3'UTR）were significantly different between patients with cervical cancer and healthy controls（P＜0.05）. Compared with healthy controls,patients with cervical cancer had higher frequency of rs4986764 C allele（P=0.036, OR=1.294,95%CI:1.017-1.647）and rs7213430 A allele（P=0.003,OR=1.435,95%CI:1.133-1.818）.Strong linkage disequilibrium was observed in one block（D'＞0.9）,and more T-A-C haplotypes（block 1）were found in patients with cervicalcancer（P=0.018）.Conclusion ThesefindingsindicatesthattheBRIP1 genepolymorphisms（rs4986764 and rs7213430）may be related to cervical cancer.The rs4986764 C allele and rs7213430 A allele may be the risk factor for cervical cancer.

cervical cancer；BRCA1-interacting protein 1；single nucleotide polymorphisms

2014-03-30