高效液相色譜法測定清熱類制劑中有效成分含量的窺探

繆國平

（江蘇省南通大學附屬海安人民醫(yī)院，江蘇 南通 226600）

高效液相色譜法測定清熱類制劑中有效成分含量的窺探

繆國平

（江蘇省南通大學附屬海安人民醫(yī)院，江蘇 南通 226600）

一直以來我國傳統(tǒng)中醫(yī)博大精深并已經(jīng)具有了幾千年的歷史。中藥制劑在中醫(yī)治療中具有十分重要的作用，其藥材基礎(chǔ)主要是傳統(tǒng)中藥材，通過將各種藥材按比例配制從而得到中藥制劑。從中藥類型上來看主要又包括了中成藥、中藥成方制劑、單味制劑等。相對于西藥而言中藥制劑發(fā)揮療效需要一個持續(xù)性的過程，但中藥制劑的不良反應(yīng)較少同時毒副作用低；另外在中藥制劑使用的過程中還能夠發(fā)揮出調(diào)理作用。為了讓中藥試劑充分發(fā)揮其效果就需要對其中的成分進行全面的分析，本文對高效液相色譜法測定清熱類制劑中有效成分含量進行了研究并提出了相關(guān)的觀點，供與參考。

高效液相色譜；清熱類制劑；有效成分

相對于西藥制劑傳統(tǒng)中醫(yī)藥制劑具有一定的優(yōu)勢，首先中藥制劑用量較少、毒副作用小；其次中藥制劑具有高效性與持久性，藥用效率高；再者中藥制劑儲存較為方便，給藥方式較為簡單；另外中藥制劑的穩(wěn)定性較好。近年來我國中藥制劑發(fā)展取得了很大的突破，特別是中藥復(fù)方制劑水平較以往有了很大的提升。事實上在中藥制劑制備過程中由于成分較為復(fù)雜因此在不同成分的提取過程中需要用到不同的工藝，這種技術(shù)限制也造成中藥制劑控制不能做到面面俱到也就使得中藥制劑質(zhì)量良莠不齊了。為了讓中藥制劑的質(zhì)量得到保證就需要對其中的有效成分進行分析、把握，準確得到有效成分的含量，這樣才能夠讓中藥制劑的制備得到更為有效的控制[1]。

1 清熱類制劑簡述

在傳統(tǒng)中藥中清熱類制劑是較為常見的類型，從分型上來看清熱類制劑又被分為清熱涼血藥、清熱燥濕藥、清熱瀉火藥以及清熱解毒藥和清虛熱藥。清熱類制劑在臨床治療中主要用作治療發(fā)熱類疾病，另外對炎癥、感染類疾病都具有一定的功效。在中藥制劑發(fā)展的過程中部分中藥制劑已經(jīng)可以取代西藥，它們不僅僅可以除去抗病原微生物同時能夠調(diào)節(jié)人體機制讓人體免疫力以及新陳代謝得到促進[2]。

2 高效液相色譜簡述

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography）誕生于上世紀60年來，目前該技術(shù)是最為常見的分離檢測技術(shù)之一，常見的高效液相色譜又包括了吸附色譜、分配色譜離子、交換色譜以及凝膠色譜。高效液相色譜在使用過程中需要高壓支持，這主要是由于流動相在經(jīng)過色譜柱時受到的阻力較大。從分離檢測速度上來看高效液相色譜具有高速性以及高效性，且分離較純，靈敏度高，但所需要的成本偏高[3]。在高效液相色譜技術(shù)不斷發(fā)展的情況下其應(yīng)用范圍也得到了擴展。高效液相色譜檢測中藥制劑流程主要如下：對樣品大致情況進行掌握并確定分離目的→考慮藥品如何預(yù)處理以及特殊處理→篩選合適的檢測儀器并設(shè)置相關(guān)參數(shù)→合理篩選液相色譜并進行預(yù)實驗對最佳分離條件進行評估→對分離條件進行優(yōu)化→對分離問題進行檢查→定量校正→論證方法[4]。

3 清熱類制劑中有效成分含量測定分析

以下以小兒解表顆粒測定為例對清熱類制劑中有效成分含量測定進行分析。

小兒解表顆粒是市面上較為常見的清熱類制劑之一，其主要成分包括了牛黃、黃芩、葛根等。以下采取實驗對其中的綠原酸、黃芩苷、連翹苷成分進行測量。實驗儀器：安捷倫高效液相色譜儀、電子天平以及臺式恒溫振蕩器等。實驗試劑：小兒解表顆粒、綠原酸、黃芩苷、連翹苷、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、醋酸（分析純）、蒸餾水。實驗方法：選取規(guī)格為4.6 mm×250 mm，5 μm的色譜柱進行填柱，流動相選取乙腈和0.4%乙酸混合液。采取梯度洗脫，在0～6 min內(nèi)乙腈梯度范圍由10%向30%遞增，在6～12 min內(nèi)乙腈梯度范圍由30%～40%遞增。0～5.5 min波長長度為280 nm，之后1 min內(nèi)波長調(diào)節(jié)為327 nm，在6.5～12 min時波長還原為280 nm。柱溫控制在28 ℃，流速為1 mL/min。

實驗結(jié)果：見圖1。

圖1 標準樣色譜圖與樣品色譜圖比較

取梯度樣品進行測定，通過線性回歸處理得出綠原酸線性方程為y=5.29x-5.39（r=0.9996）、黃芩苷線性方程為y=11.83x+6.27（r=0.9996）、連翹苷線性方程為y=10.98x-1.41（r=0.9997）。對樣本進行精密度試驗，三者峰面積RSD分別為1.1%、0.6%以及1.1%，從RSD情況來看表明檢測儀器的精密度較為理想。對樣本進行穩(wěn)定性實驗得到三者峰面積RSD分別為1.4%、2.4%以及1.3%，這說明樣品在穩(wěn)定程度較好。另進行重復(fù)性實驗得到三者峰面積RSD為1.9%、2.8%以及1.8%，重復(fù)性良好。

以n%=[（C×V）×10-6/W]×100%作為提取率計算公式，其中C為標準曲線得到的濃度；V為溶劑體積；W為樣品質(zhì)量。

實驗過程中分別對萃取溶劑因素、萃取時間因素、溫度因素進行定性分析得出當料液比、溫度和提取時間不變時，甲醇濃度控制在45%～55%區(qū)間內(nèi)提取率較為理想。同理控制其他影響因素，料液比在1∶50～1∶55時組分提取率較為理想；控制其他因素，溫度處于55～65℃時提取率最高；控制其他因素，提取時間控制在50～75 min時提取率較高。綜上對提取工藝進行修正，甲醇濃度為51%，料液比為1∶53，提取時間為70 min，溫度控制在60 ℃，綠原酸、黃芩苷、連翹苷的提取率分別為0.736%、1.92%、0.471%。

4 結(jié) 語

從上述實驗中可以看出不同廠家產(chǎn)的小兒解表顆粒存在著一定程度的成分差異，但是差異性不大。由此可見采取高效液相色譜法測定清熱類制劑中有效成分含量對中藥制劑質(zhì)量控制備可提供可靠的依據(jù)，值得推廣。

[1] 李思維,謝蓉,王梅.中心組合試驗設(shè)計和響應(yīng)面分析優(yōu)化黃芩中黃芩苷提取工藝[J].陜西中醫(yī)學院學報,2012,35(5):114-117.

[2] 王貞.黃芩甙的含量測定研究概況[J].光明中醫(yī),2012,27(8):141-146.

[3] 文國俊.清熱解毒類中成藥中重金屬含量的測定及評價[J].光譜實驗室,2012,29(4):137-139.

[4] 李文烈,曹海芳,魏剛.中藥制劑質(zhì)量控制的研究進展[J].中國執(zhí)業(yè)藥師,2012,9(7):159-161.

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1671-8194（2014）28-0085-02