高效液相色譜蒸發光散射檢測器測定虛汗停顆粒中黃芪甲苷的含量

鄭 琰王雅靜

（1 朝陽市食品藥品檢驗所，遼寧 朝陽 12200；2 朝陽市食品藥品安全監督所，遼寧 朝陽 122000）

高效液相色譜蒸發光散射檢測器測定虛汗停顆粒中黃芪甲苷的含量

鄭 琰1王雅靜2

（1 朝陽市食品藥品檢驗所，遼寧 朝陽 12200；2 朝陽市食品藥品安全監督所，遼寧 朝陽 122000）

目的探討利用高效液相色譜蒸發光散射檢測器測定虛汗停顆粒中黃芪甲苷含量的方法。方法采用KromasilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動相為乙腈-水（32∶68），流速1.0 mL/min。結果黃芪甲苷進樣量在0.1950～4.8750 μg(r=0.9998)線性范圍內，線性關系良好，平均回收率99.44%，RSD=1.2%(n=6)。結論利用高效液相色譜蒸發光散射檢測器測定方法準確，重復性好，可用于虛汗停顆粒中的質量控制。

虛汗停顆粒；黃芪甲苷；蒸發光散射檢測器

虛汗停顆粒由黃芪、浮小麥、大棗、糯稻根和牡蠣（煅）制備而成，收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十四冊，具有益氣，養陰，固表斂汗功效，用于氣陰不足之自汗、盜汗及小兒盜汗。由于原標準只有薄層色譜法對黃芪的定性分析，無定量分析，達不到對黃芪的質量控制及藥品本身的療效控制，故建立HPLC法對黃芪進行含量測定[1]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Waters e2695型高效液相色譜儀；Waters2424型蒸發光散射檢測器；Waters Empower色譜工作站。

1.2 試藥：黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110781-200613）；虛汗停顆粒（批號：120501，120801，121002）乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）；流動相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0 mL/min；柱溫：28 ℃；ELSD檢測器參數：漂移管溫度：50 ℃；氣流（壓縮空氣）壓力：400 Pa；理論板數：按黃芪甲苷計算不低于4000[2]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備：經減壓干燥的黃芪甲苷精密稱取適量作為對照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取虛汗停顆粒，研細，取粉末1.6 g，精密稱定，精密加入甲醇100 mL，稱定重量，密塞，冷浸過夜，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液50 mL，蒸干，殘渣加水10 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，把提取液合并，取40 mL用濃氨試液洗滌，充分洗滌3次后棄去洗滌液，蒸干提取液，用5 mL量瓶收集殘渣，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液[3]。

2.2.3 陰性對照溶液的制備：取缺黃芪的以外的其他藥工材，按所確定的工藝生產陰性樣品，方法同2.2.2項制備，即得陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性實驗：分別精密吸取按照以上方法制備的對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，依法測定。在黃芪甲苷對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液在此峰位無吸收。見圖1。

2.3.2 線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25 μL注入液相色譜儀，測定黃芪甲苷的峰面積。根據測定結果繪制標準曲線，橫坐標取對照品進樣量，縱坐標取峰面積積分值，經計算回歸方程為：Y=124511X-308431，r=0.9998，結果顯示：黃芪甲苷對照品進樣量在0.1950～4.8750 μg范圍內線性關系良好。

2.3.3 精密度試驗：取供試品（批號120501），精密稱取1.6 g，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液。精密量取20 μL，連續進樣6次，色譜峰面積的RSD為0.18%，結果顯示，儀器的精密度良好。

2.3.4 重復性試驗：取同一批號（120501）樣品6份，分別精密稱取1.6 g，按”2.2.2”項下方法制備供試品溶液，每次進樣20 μL，記錄峰面積，經測定黃芪甲苷的平均含量為0.2164 mg/g，RSD為1.3%，結果顯示，利用高效液相色譜蒸發光散射檢測器測定方法重復性良好[4]。

2.3.5 穩定性試驗：取同一供試品溶液，于0、2、4、8、12 h分別進樣20 μL，分別進樣分析，測定黃芪甲苷峰面積的RSD為0.28%，結果顯示，供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.3.6 加樣回收率試驗：取已知含量的同批樣品（批號120501，黃芪甲苷含量為0.2164 mg/g）6份，每份0.8 g，精密稱定，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液(0.1950 mg/mL)2 mL，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，計算平均回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗測定結果

表2 樣品中黃芪甲苷的測定結果（n=5）

圖1 HPLC色譜圖（a 陰性對照；b 對照品；c供試品）

2.3.7 樣品測定：分別取以上3批樣品，按上述方法制備供試品溶液，進樣20 μL，測定樣品中黃芪甲苷的含量，結果見表2。

3 討 論

黃芪甲苷屬于四環三萜類皂苷，僅有微弱的紫外末端吸收，檢測靈敏度低，干擾因素多，尤其是溶液噪音比較大，故現在多采用HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷的含量[5]。本文在文獻的流動相的基礎上，優化了漂移管的溫度和載氣壓力。為了提高測定的靈敏度，在保證溶劑完全揮發的前提下，應選擇較低的載氣壓力。本方法所用流動相簡單，結果重現性好，故可作為虛汗停顆粒中黃芪甲苷含量測定的參考標準。

[1] 施法,侯峰,隋添爽,等.虛寒胃痛顆粒質量標準研究[J].中國藥品標準,2013,13(3):184-188.

[2] 丁如賢,李霞,李一珺,等.黃芪藥材、飲片中黃芪甲苷含量測定方法的改進[J].世界中醫藥,2013,8(6):669-671.

[3] 王慧森,劉明,李更生.高效液相色譜-蒸發光散射檢測法在中藥研究中的應用[J].中醫研究,2008,21(8):61-64.

[4] 吳清華.反相高效液相色譜法測定復方黃芪口服液中黃芪甲苷的含量[J].空軍醫學雜志,2012,28(4):187-189.

[5] 邢婕,秦雪梅,張麗增.HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷含量供試品溶液制備方法改進[J].山西大學學報(自然科學版),2008,31(4): 577-579.

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B

1671-8194（2014）35-0071-02