CK19、Galectin-3在甲狀腺良惡性腫瘤中的表達及其臨床意義

杜崗 馬艷波

甲狀腺瘤是最為常見的甲狀腺良性腫瘤，包括濾泡狀腺瘤和乳頭狀囊性腺瘤。甲狀腺癌是最為常見的甲狀腺惡性腫瘤，包括有源自于濾泡上皮細胞的乳頭狀癌、濾泡狀腺癌、未分化癌；源自于濾泡旁降鈣素分泌細胞（C細胞）的髓樣癌；未分化癌的預后最差[1]。甲狀腺腺瘤有引起甲亢和惡變的可能，應該早期行患側甲狀腺大部分或者部分切除。甲狀腺癌的手術治療包括甲狀腺本身的手術切除以及頸部淋巴結的清掃，甲狀腺的手術切除范圍大小存在分歧，同時頸部淋巴結的清掃效果固然好，但是對患者的生活質量影響比較大。術前對甲狀腺疾病良惡性質的診斷決定著甲狀腺手術的方式，所以甲狀腺良惡性質的誤診將對患者造成巨大的傷害。目前盡管對CK19、Galectin-3進行了很多的研究，許多的作用環節仍然不夠明確，且在甲狀腺癌與甲狀腺腺瘤中CK19、Galectin-3陽性高表達所具有的鑒別診斷價值受到質疑，為提高甲狀腺癌的診斷正確率、為鑒別甲狀腺良惡性腫瘤提供一種強有力的證據，這就是本課題研究的目的和意義所在。

1 材料與方法

1.1 組織標本來源 病理標本來自2012年1月-2013年12月山西醫科大學第一附屬醫院普外科行外科手術治療且經病理學證實的80例甲狀腺腫瘤患者，包括甲狀腺癌病理組織標本40例、甲狀腺瘤病理組織標本40例，術前均未行放化療。其中甲狀腺癌病理組織標本男8例，女32例，年齡28~56歲，平均43.5歲；甲狀腺癌瘤病理組織標本男5例，女35例，年齡19~38歲，平均26.3歲。病理組織標本均取材于腫瘤原發灶，同時避開炎癥區以及壞死區。

1.2 試劑 兔抗人CK19購自于上海億欣生物科技有限公司、兔抗人Galectin-3購自于武漢博士德生物科技有限公司、鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶復合物（SABC）法免疫組織化學試劑盒購自于北京四柏生物科技有限責任公司、枸櫞酸鈉抗原修復液及聯苯二胺（DAB）顯色劑購自于中國福州邁新生物科技公司。

1.3 免疫組化技術檢測CK19、Galectin-3在甲狀腺良惡性組織中的陽性表達 具體步驟按照試劑盒的操作說明進行，其中兔抗人CK19以1：80進行稀釋、兔抗人Galectin-3同樣以1：80進行稀釋；將制作完成病理標本切片置于光鏡下（200倍）進行觀察，抗原陽性表現為細胞胞漿中出現棕黃色或棕褐色的顆粒；評價依據陽性表達細胞的染色強度和百分比分別計分，然后相加得到總積分，具體標準是：（1）根據陽性表達細胞著色強度評分：沒有染色計0，弱染色（很少量的著色細胞表現為棕黃、或著色細胞表現為淡黃）計1，強染色（著色細胞表現為棕黃）計3，中度染色（介于強染色與弱染色）計2；（2）依據陽性表達細胞百分比計分：低于5%計0，5%~25%計1，25%~50%計2，51%~75% 計 3，大于 75% 計 4；（3）總積分 =（1）+（2），0分為陰性（-）、l~2分為弱陽性（+）、3~5分為陽性（++）、6~7分為強陽性（+++）。

1.4 統計學處理 所有資料均用SPSS 13.0統計軟件進行分析。兩組間樣本率比較采用獨立樣本 字2檢驗（檢驗水準α=0.0167）；采用靈敏度、特異度和診斷符合率來評價CK19、Galectin-3在鑒別診斷甲狀腺良惡性疾病中的價值，其中靈敏度=真陽性數/（真陽性數+假陰性數）×100%、特異度=真陰性數/（真陰性數+假陽性）、診斷符合率=（真陰性數+真陽性數）/總測定數×100%。

2 結果

2.1 CK19、Galectin-3陽性表達為細胞質中出現棕黃色或棕褐色顆粒。細胞角蛋白-19（CK19）在40例甲狀腺癌組織中陽性表達的例數為40例，陽性率為100%；40例甲狀腺瘤組織中陽性表達的例數為15例，陽性率為37.50%，差異具有統計學意義（P<0.001），見表1。半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在40例甲狀腺癌組織中陽性表達的例數為32例，陽性率為80.00%；40例甲狀腺瘤組織中陽性表達的例數為10例，陽性率為25.00%，差異具有統計學意義（P<0.001），見表2。

表1 CK19在甲狀腺癌組織與甲狀腺瘤組織中的陽性表達比較

表2 Galectin-3在甲狀腺癌組織與甲狀腺瘤組織中的陽性表達比較

2.2 CK19在鑒別診斷甲狀腺良惡性疾病中的靈敏度為100%、特異度為62.50%、診斷符合率為81.25%；Galectin-3在鑒別診斷甲狀腺良惡性疾病的靈敏度為80.00%、特異度為75.00%、診斷符合率為77.50%。CK19、Galectin-3在甲狀腺癌中的陽性表達率增強，是甲狀腺良惡性疾病進行鑒別診斷的重要輔助指標，聯合檢測可以提高甲狀腺癌的診斷率。

3 討論

在臨床病理工作中，甲狀腺良惡性病變僅僅憑借HE染色進行診斷有很大的困難，同時由于甲狀腺癌起病隱匿以及生物學特性多變，現有的影像學、病理學、細胞學、免疫學等等均存在著很高的誤診可能性，因此尋找敏感性、特異性更強的腫瘤標志物進行鑒別診斷將很有價值。

CK19是一種分子量約40 KD的低分子量角蛋白，存在于正常上皮以及各種上皮來源的腫瘤中，在單層上皮細胞和間皮、成人皮膚、肝細胞和角膜細胞中呈現陰性表達，在子宮上皮、羊膜上皮細胞和間質細胞中呈現陽性表達[2]。CK19基因具有上皮細胞表達特異性，其符合上皮組織特異性標志物的條件，不同大小的CK代表著不同類型的上皮標志，理論上講，大多數的單層上皮細胞表達著低分子量的CK，CK19單克隆抗體分子量大小為40 KD，主要應用于腺癌的診斷。

Cheung等[3]報告顯示：CK19彌漫性地存在于甲狀腺乳頭癌中（80.00%， 43/54），僅僅很少甲狀腺腺瘤為彌漫性染色（3%，1/35），也有一定比例的甲狀腺腺瘤呈局灶性染色（17% ，6/35）。Rapheal[4]研究發現：CK19是區分乳頭狀和甲狀腺良性病變的一個有用的標記物。Baloch等[5]研究發現：CK19在具有乳頭狀癌核特征的區域呈現強陽性，在小于1 cm的隱匿性乳頭狀癌或者在甲狀腺微小轉移灶也呈現彌漫陽性，而在癌旁甲狀腺組織、腺瘤結節性甲狀腺腫乳頭狀增生呈現陰性或者小灶性陽性。因此CK19有助于PTC與甲狀腺組織、濾泡性腺瘤、結節性甲狀腺腫、乳頭狀增生的鑒別，同樣也可用于隱匿性乳頭狀癌與甲狀腺良性結節的鑒別，同樣也可以判斷甲狀腺組織內是否存在微小轉移灶。

Galectin-3作為半乳糖凝集素家族中的一種蛋白，廣泛存在于人體的多種正常組織細胞和腫瘤細胞中，正常組織細胞如：巨噬細胞、血管上皮細胞、正常的胃腸道黏膜細胞；腫瘤細胞如胃腸道惡性腫瘤細胞、乳腺癌細胞、前列腺癌細胞、垂體瘤細胞等[6-10]。

新近有學者研究報告顯示：Galectin-3mRNA在甲狀腺癌、良性病變、癌旁組織中的陽性表達率為78.12%、26.67%、27.78%，差異具有統計學意義；但是在甲狀腺癌中，在甲狀腺乳頭癌、甲狀腺濾泡癌、甲狀腺髓樣癌的陽性表達率分別為78.26%、80.00%、75.00%，差異無統計學意義，也就是說在甲狀腺癌中，其表達與臨床病理分期無關；通過免疫組化技術進行檢測，其結果與RT-PCR檢測結果基本一致[11]。也就是說，該因子在良惡性的鑒別診斷中具有一定的意義，但是在鑒別診斷甲狀腺癌的亞型中意義不大。

本研究通過檢測細胞角蛋白-19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在甲狀腺良惡性病變中的陽性表達情況，探討其在診斷甲狀腺癌以及在鑒別診斷甲狀腺良惡性病變中的意義。本實驗的研究結果顯示細胞角蛋白 -19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在甲狀腺癌組織中呈現高度的陽性表達，而在甲狀腺瘤組織中沒有表達或者呈現僅有微弱的表達，提示CK19、Galectin-3可能在甲狀腺癌的發生發展過程中發揮著某種重要作用，推測這兩種因子有可能作為甲狀腺良惡性疾病鑒別診斷的重要輔助指標。同時CK19、Galectin-3靈敏度、特異度、診斷符合率均較高，同樣提示可作為甲狀腺癌的輔助診斷指標，聯合檢測可以提高甲狀腺癌的診斷率。

綜上所述，本實驗檢測了CK19、Galectin-3在甲狀腺良惡性腫瘤中的表達情況，探討兩者在甲狀腺癌診斷中的價值以及與良性病變的鑒別診斷價值。結合新近一些學者在甲狀腺腫瘤方面的研究成果，其研究成果顯示了CK19、Galectin-3在甲狀腺癌組織中也有高度的表達，與本實驗的結果無明顯不符。因此CK19、Galectin-3有望作為新的指標診斷甲狀腺癌以及鑒別診斷甲狀腺良惡性組織，且聯合檢測可以提高診斷的準確率。

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