三七有效成分對免疫性肝損傷的保護作用

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三七有效成分對免疫性肝損傷的保護作用

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目的 研究三七有效成分三七總皂苷、總黃酮及多糖對小鼠免疫性肝損傷的保護作用。方法昆明種小鼠60只隨機分為正常組（A組）、模型組（B組）、三七總皂苷組（C組）、三七總黃酮組（D組）、三七多糖組（E組）。C、D、E組分別給予三七總皂苷、三七總黃酮、三七多糖灌胃，1次/d，14 d后B、C、D和E組于尾靜脈注射卡介苗，26 d于尾靜脈注射脂多糖，禁食12 h后于眼球靜脈叢采血，檢測血清中丙氨酸轉氨酶（ALT）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、白細胞介素-4（IL-4）的含量；取肝、脾、胸腺計算臟器指數；另取肝臟做病理學檢查。結果與B組比較，C、D、E組小鼠肝、脾、胸腺指數、血清ALT水平明顯降低（P＜0.01），IL-4、T-SOD顯著升高（P＜0.01）；病理學示C、D、E組肝臟炎癥細胞浸潤、水腫和點狀、片狀壞死程度均比B組明顯減輕。結論三七總皂苷、總黃酮及多糖對免疫性肝損傷均有明顯的保護作用。

三七皂甙；卡介苗；脂多糖類；三七總黃酮；三七多糖；免疫性肝損傷

三七為五加科植物參三七的根，含皂苷類、黃酮類、多糖類、醇類及三七素等有效成分。三七的藥理作用非常廣泛，具有止血、活血化瘀、降血脂、降血壓、抗衰老、抗炎、抗腫瘤及調節免疫等作用。實驗表明，三七總皂苷具有增強細胞免疫、體液免疫和自然殺傷（NK）細胞功能的作用[1]。研究發現三七提取活性成分Rh2、Rg3能夠保護荷瘤小鼠的免疫器官并增強免疫功能，提高荷瘤小鼠的免疫應答，調節細胞因子的分泌[2]。而有關三七的其他活性成分對肝組織細胞的免疫損傷作用尚少見相關報道。本研究通過卡介苗（BCG）聯合脂多糖（LPS）誘導小鼠免疫性肝損傷模型，觀察三七有效成分三七總皂苷、總黃酮及多糖對小鼠免疫性肝損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料 昆明種小鼠60只，體質量20～25 g，雌性，清潔級，購自右江民族醫學院動物房，動物許可證號：syxk桂2011-0010。三七粉（云南向輝生物科技有限公司），按文獻[3-5]分別醇提三七總皂苷、醇提三七總黃酮、水提三七多糖。BCG購于成都生物制品研究所有限責任公司，LPS購于美國sigma公司，白細胞介素（IL）-4試劑盒（96T）購于美國R＆D公司，血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑購于南京建成生物工程研究所，丙氨酸轉氨酶（ALT）試劑購于四川邁克生物科技股份有限公司。722可見光分光光度計（上海精密科學儀器有限公司），Tristar-LB941多功能酶標儀（德國伯托公司），HH·W21·600S數顯電熱恒溫水溫箱（上海躍進醫療器械廠），TGL-18G-C高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠），組織包埋機（德國美康公司），Primo star生物顯微鏡（德國卡爾·蔡司公司）。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 將60只雌性小鼠用數字表隨機分為正常組（A組）、模型組（B組）、三七總皂苷組（C組）、三七總黃酮組（D組）和三七多糖組（E組），每組12只。C、D、E組分別給予三七總皂苷、三七總黃酮、三七多糖（400 mg·kg-1·d-1）灌胃，A組和B組給予等量生理鹽水灌胃。

1.2.2 造模及處理 給藥14 d后，B、C、D和E組于尾靜脈注射BCG 0.2 mL（12.5 mg/kg，約含5×107個活菌）。26 d后再于尾靜脈注射LPS 7.5 μg/只（0.2 mL）。禁食不禁水12 h后稱體質量，經眼眶后靜脈叢采血，脫臼處死，立即取肝臟、脾臟和胸腺。計算臟器指數=臟器質量(mg)/體質量(g)×100％。取相同部位及大小的肝組織小塊，放入10％福爾馬林溶液中固定，常規HE染色，光鏡下觀察組織病理學變化。采血后室溫放置30 min，3 500 r/min離心5 min，取血清測定ALT、IL-4和T-SOD含量，按試劑盒說明書操作。

1.3 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件進行處理，數據以±s表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，LSD-t法進一步做兩兩比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠臟器指數比較 B組體質量低于A組，而肝臟指數、脾臟指數和胸腺指數明顯高于A組；且C、D及E組的肝臟指數、脾臟指數和胸腺指數明顯低于B組（均P＜0.01），見表1。

Tab.1 Comparison of organ index between five groups of mice表1 各組小鼠臟器指數比較 （n=12，±s）

Tab.1 Comparison of organ index between five groups of mice表1 各組小鼠臟器指數比較 （n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a與A組比較，b與B組比較，P＜0.01

組別A組B組C組D組E組F體質量（g）32.870±2.250 30.508±2.094a32.975±2.525 33.950±3.274 28.373±1.505 10.529＊＊肝臟指數（mg/g）4.591±0.382 5.246±0.095a4.729±0.192b4.636±0.120b4.702±0.313b9.027＊＊組別A組B組C組D組E組F脾臟指數（mg/g）0.371±0.177 0.506±0.121a0.410±0.059b0.424±0.051b0.425±0.041b17.648＊＊胸腺指數（mg/g）0.328±0.072 0.392±0.075a0.281±0.093b0.288±0.081b0.301±0.082b16.604＊＊

2.2 各組小鼠血清ALT、IL-4、T-SOD含量比較 B組的ALT高于A組，IL-4、T-SOD低于A組；C、D、E組的血清ALT低于B組，IL-4、T-SOD水平高于B組（均P＜0.01），見表2。

Tab.2 Comparison of serum levels of ALT,IL-4 and T-SOD between five groups of mice表2 各組小鼠血清ALT、IL-4和T-SOD水平比較（n=12，±s）

Tab.2 Comparison of serum levels of ALT,IL-4 and T-SOD between five groups of mice表2 各組小鼠血清ALT、IL-4和T-SOD水平比較（n=12，±s）

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2.3 小鼠肝臟肉眼觀察 B組肝臟腫大，表面有大小不等的壞死斑點。C、D及E組肝臟腫大較輕，壞死斑較B組輕。A組肝臟表面光滑未見腫大和壞死斑點。

2.4 肝組織病理學檢查 與B組相比，C、D和E組肝組織炎癥細胞浸潤、水腫、壞死程度及纖維增生均明顯減輕，見圖1。

3 討論

目前BCG+LPS聯合誘導小鼠產生免疫性肝損傷的動物模型是研究臨床肝炎發病和治療較理想的動物模型[6]，BCG與LPS聯合誘導小鼠產生的免疫性肝損，其病理改變與肝細胞損傷機制和乙型病毒性肝炎相類似，其病理組織學的特征損傷是肝壞死和大量的單核細胞浸潤[7]。本實驗采用小鼠尾靜脈注射BCG+LPS造模后，病理組織觀察肝細胞嚴重水腫、壞死，匯管區及周圍大量炎性細胞浸潤，證明BCG+LPS所造成的小鼠免疫性肝炎模型獲得成功。采用三七總皂苷、三七總黃酮和三七多糖灌胃后，肝組織病理觀察顯示肝細胞腫脹、壞死，匯管區及周圍大量炎性細胞浸潤現象明顯減輕，說明三七總皂苷、三七總黃酮和三七多糖均可對小鼠免疫性肝損傷具有保護作用。

免疫器官指數是衡量機體免疫功能的初歩指標，在一定程度上可反映免疫器官內淋巴細胞的數量，肝臟指數可反映肝臟的損傷及炎癥程度。本實驗結果顯示給予三七總皂苷、三七總黃酮和三七多糖灌胃后能明顯降低小鼠肝、脾、胸腺指數，說明三七能抑制炎性介質的分泌。

IL-4是Th2細胞自身分泌的生長因子，對于B細胞、T細胞、肥大細胞、巨噬細胞和造血細胞都有免疫調節作用[8]。本實驗中B組血清IL-4水平較A組明顯降低，說明Th2細胞活性受到抑制，而C、D、E組給藥后IL-4含量顯著增高，說明Th2細胞活性受抑制得到緩解，結果表明三七總皂苷、三七總黃酮和三七多糖具有不同程度的調節Th2細胞分泌的功能。

活性氧自由基引發的氧化應激是肝病發病的共同病理生理基礎，因此，對氧化應激導致肝細胞損傷的研究便成為治療肝臟疾病的一個重要途徑[9]，SOD對氧自由基有清除作用，可保護細胞免受損傷。BCG+LPS所致的小鼠免疫性肝損傷過程中可誘導免疫反應產生大量氧自由基，本實驗結果顯示，B組T-SOD活性比A組顯著降低，而C、D、E組用藥后血清T-SOD活性顯著升高，表明機體抗氧化能力增強，加速自由基的清除。此外，B組血清ALT含量明顯升高，而C、D、E組血清ALT含量顯著降低，說明給藥組肝臟受損傷程度減輕。

綜上，三七總皂苷、三七總黃酮和三七多糖對免疫性肝損傷均有不同程度的保護作用，三者作用無明顯差異。

Fig.1 Pathological images of liver tissues in five groups of mice（HE，×200）圖1 各組小鼠肝組織病理學觀察（HE，×200）

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（2014-02-17收稿 2014-04-20修回）

（本文編輯 閆娟）

Protective Effects of Active Ingredients of Notoginseng on Immunological Liver Injury

WEI Wei1,HUANG Yongzhi2,LIANG Liudan1,NONG Fengying1,NONG Chaopeng1,LI Tao1△
1 Youjiang Medical College for Nantionalities,Guangxi 533000,China;2 Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities
△

E-mail:lili0841@qq.com

ObjectiveTo investigate the protective effects of active components of notoginseng on immunological liver injury in mice.MethodsSixty Kunming mice were randomly divided into normal group(group A),model group (Group B),PNS group(Group C),total flavonoids group(Group D),and polysaccharide group(group E).C,D and E groups were given PNS,total flavonoids and polysaccharide orally,1/day for 14 days.Then BCG was intravenous injected in B,C,D and E groups,and after 26 days lipopolysaccharide(LPS)was intravenous injected.Samples of eye venous plexus blood were collected,and serum levels of alanine aminotransferase(ALT),total superoxide dismutase(T-SOD)and Interleukin-4(IL-4) were detected.Organs index was calculated by checking pathological resultsof liver,spleen and thymus.ResultsCompared with group B,the thymus index and serum ALT levels were significantly decreased in C,D and E groups(P＜0.01), but the levels of IL-4 and T-SOD increased significantly(P＜0.01).Pathological resultsshowed that there were more serious inflammatory cell infiltration in liver,edema and necrosis of dot in C,D and E groups than those in group B.ConclusionThe active components of notoginseng showed a significant protective effect on immunological liver injury.

sanchinoside；BCG vaccine；lipopolysaccharides；total flavonoids；polysaccharide；immune liver injury

R285.5

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.011

廣西壯族自治區2013年度自治區級大學生創新訓練項目（QJCX201347）

1右江民族醫學院臨床學院（郵編533000）；2右江民族醫學院附屬醫院

△通訊作者 E-mail:lili0841@qq.com