微波提取高效液相色譜法測定花菜中的VC

吳海燕

（1.南通農業職業技術學院，江蘇南通226000；2.南通市農副產品加工技術協會，江蘇南通226000）

微波提取高效液相色譜法測定花菜中的VC

吳海燕1，2

（1.南通農業職業技術學院，江蘇南通226000；2.南通市農副產品加工技術協會，江蘇南通226000）

研究微波輔助提取，反相高效液相色譜測定花菜中VC含量的方法。花菜勻漿后，以1%草酸溶液為提取溶劑，微波提取、固相萃取小柱凈化后，采用恒流的方法進行液相色譜定量檢測，以0.1%草酸溶液為流動相，流速1.0mL/min，采用C-18反相色譜柱分離，在254 nm波長下檢測。結果表明VC濃度在0.02mg/mL~0.12mg/mL范圍內線性良好，相關系數為0.999 6，檢測限0.02mg/kg，回收率在99.9%~104.6%之間，相對標準偏差為1.20%。該方法能有效提取蔬菜中Vc，測定結果穩定，準確度高，重現性好，可以用于蔬菜中VC的檢測。

微波提取；高效液相色譜法；花菜；VC

VC又名抗壞血酸，是人體正常生理代謝不可缺少的一類有機化合物，人體自身不能合成，必須依靠膳食供給。VC廣泛存在于新鮮的水果、蔬菜中[1]。

花菜是十字花科蕓薹屬植物，營養豐富，富含膳食纖維、維生素等。根據研究，花菜中含有豐富的VC，長期食用，能提高人體免疫功能，促進肝臟解毒；同時也能起到阻止癌前病變細胞形成的作用，預防癌癥[2]。

VC含量測定方法常以氧化還原為基礎的比色法或衍生反應為基礎的熒光法[3]，如2，6-二氯靛酚不適應于深色樣品；熒光分析法所需試劑多而且操作復雜；而且VC有較強的還原作用，在樣品處理時容易使樣品中的VC損失，從而影響測定的準確度和精確度。

近年來用高效液相色譜法測定VC含量已有一些報道[4-6]，但是在樣品制備過程中存在提取率低，操作繁瑣，萃取劑用量大等問題。微波提取法，與傳統的提取法相比，其最大優點是提取的產品雜質含量低、有效成分高且提取效率高[7]，這種新的微波提取技術已逐漸應用于天然植物有效成分、生物活性成分的提取研究中[8-10]。利用微波輔助提取能保護VC不受氧化，高效液相色譜法具有高效、穩定、可靠等特點，能快速準確測定VC的含量。

本文建立了微波提取、反相高效液相色譜測定花菜中VC的含量的方法，為花菜的VC的含量測定提供實驗資料。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料

花菜：市售。

甲醇（色譜純），VC、草酸等試劑均為國產分析純，所有試驗用水均為超純水；0.45μm濾膜：國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 主要儀器與設備

Waters高效液相色譜儀，Waters1525泵，Waters 2487雙通道紫外檢測器；Breeze色譜系統管理工作站，色譜柱：Symetry—C18柱（100mm×4.6mm，5.0μm）；液相平頭微量進樣器（25μL）Eppendorf；HR2084食品制樣器：飛利浦；CW-2000A型超聲-微波協同萃取儀：上海新拓分析儀器科技有限公司；Millipore超純水機；隔膜真空泵：天津市騰達過濾器件廠；TU-1901紫外可見分光光度計：北京通用普析儀器有限責任公司；KQ3200超聲脫氣機：昆山市超聲儀器有限公司。

2 方法

2.1 色譜條件

Symetry—C18反相色譜柱（100 mm×4.6 mm，5.0μm），檢測波長：254 nm，流動相：0.1%（體積分數）的草酸溶液，流速：1mL/min，進樣量25μL，柱溫25℃；以保留時間定性，待液相色譜穩定后進樣分析，以峰面積外標法定量。

2.2 樣品處理

將100mL的2%草酸溶液放入食品制樣器中，稱取100 g花菜樣品迅速切碎后放入食品制樣器中，制成勻漿。準確稱取5.00g勻漿樣品，以1%草酸30mL為萃取溶劑，微波功率設為200W，萃取時間為15min，萃取溫度設定為45℃，平行萃取2次[6]。萃取液過濾后，用1%草酸溶液定容至50mL棕色容量瓶中，制成待測液。待測液用0.45μm濾膜過濾后按2.1色譜條件進行HPLC測定。

2.3 線性關系分析

VC標準溶液的制備：準確稱取VC對照品20.0mg，用0.1%的草酸溶解，轉移至100mL棕色容量瓶中，定容，制成VC標準儲備液。再分別準確量取1、2、3、4、5、6mLVC標準儲備液于10mL棕色容量瓶中，用0.1%的草酸溶解定容，制成濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12mg/mL系列標準VC標準溶液，溶液用0.45μm濾膜過濾后按2.1色譜條件進行HPLC測定。每個濃度進樣3次，以平均峰面積積分值，對進樣濃度（mg/mL）進行直線回歸。

2.4 精密度試驗

取所制得樣品，按照2.1的色譜條件重復進樣6次，測定檢測方法的精密度。

2.5 回收率試驗

采用加樣回收法，精密稱取勻漿樣品適量，加入VC標準品，按2.2方法進行處理，按含量測定方法測定VC的回收率。

2.6 最低檢測限計算

以產生三倍儀器噪聲水平的進樣量為檢出限[11]。

3 結果與分析

3.1 色譜分離結果

液相色譜分離效果的主要影響因素：色譜柱的類別、流動相、流速。在2.1色譜條件下，VC標準品溶液、花菜樣品的色譜圖如圖1、2所示。

圖1 VC標準品色譜圖（0.06mg/m L）Fig.1 Chromatogram of vitam in C in standard sampleby HPLC（0.06m g/m L）

圖2 花菜提取液色譜圖Fig.2 Chrom atogram of cauliflower extractby HPLC

VC樣品均能實現基線分離，而且峰形能滿足測定要求，VC的保留時間為2.868min，檢測限為0.02mg/kg。

3.2 標準工作曲線

以3次進樣的峰面積的平均值為響應值，以VC標準品的進樣濃度（mg/mL）為自變量，求直線回歸方程為：y=876 060x+2 750.9，相關系數R2=0.999 6，標準曲線在0.02mg/mL~0.12mg/mL范圍內線性良好，VC的標準曲線見圖3。

圖3 VC的標準曲線Fig.3 Thestandard curveof VC

3.3 精密度試驗結果

對同一花菜樣品，按照2.1的色譜條件重復進樣6次，測定結果見表1。

表1 精密度試驗結果Table1 Resultof precision test

精密度試驗相對標準偏差為1.20%，表明該方法重現性較好。

3.4 回收率試驗結果

稱取3份勻漿花菜樣品5.00 g，分別加入VC標準液（20mg/100mL）1、2、5mL，按2.2方法進行提取處理，按2.1的色譜條件測定VC的含量，每個混合樣品測定3次，取其平均值。

表2 回收率試驗結果Table2 Resultof recovery test

回收率試驗結果表明，3個不同添加量的試樣，回收率在99.9%~104.6%之間，平均回收率102.4%，表明采用微波提取、反相高效液相色譜法測定花菜中VC的含量的方法的準確度好，符合色譜定量分析的準確度的要求。

4 結論

本試驗采用微波輔助提取，過濾、凈化后用液相測定方法來測定花菜中的VC的含量。該方法的線性范圍為0.02mg/mL~0.12mg/mL，檢測限0.02mg/kg，回收率在99.9%~104.6%之間，平均回收率為102.4%，相對標準偏差為1.20%。VC性質不穩定，易氧化，采用微波來輔助提取，加快了提取進程，縮短了樣品制備時間，避免VC的損失；同時使樣品中的VC能有效提取，高效液相色譜測定VC的準確度和精密度好，可以用于蔬菜中VC含量的定量測定。

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Determ ination of Vitam in C in Cauliflower by M icrowave Extraction and HPLC

WUHai-yan1，2

（1.Nantong Agricultural Vocational Technology College，Nantong 226000，Jiangsu，China 2.Nantong Agricultural Product Processing Technology Association，Nantong 226000，Jiangsu，China）

The content of vitamin C in cauliflower was determined by microwave and HPLC.Vitamin C was extracted bymicrowave-assisted extraction ofwith 1%oxalic acid，then analyzed with HPLC by controlling the speed ofmobilephase.Mobilephasewas0.1%oxalic acidwith flow rate1.0mL/min，vitamin Cwasseparated by C-18 reversed column and detected by UV detectorat254 nm.Itwasshowed thatvitamin C in cauliflower could be separated.The linear ranges were 0.02 mg/mL-0.12 mg/mL，and the obtained correlation coefficient was 0.999 6.The recovery for the vitamin C ranged from 99.9%to 104.6%，with the relative standard deviation（RSD）was1.20%.The detection limitswas0.02mg/kg.Thismethod had good precision and high accuracy.This method can determinevitamin C in vegetables.

microwaveextraction；HPLC（high performance liquid chromatography）；cauliflower；vitamin C

2013-12-02

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.023

南通市農村科技創新及產業化項目（HL2012025）

吳海燕（1978—），女（漢），講師，碩士研究生，研究方向：食品綜合利用、食品安全檢測。