蘆薈銀杏制劑對乙醇氧化小鼠的抗氧化研究

白銀花，李曉，劉婧，張立實

（四川大學華西公共衛生學院，四川成都610041）

蘆薈銀杏復合制劑為蘆薈凝膠凍干粉與銀杏葉提取物復合制劑。蘆薈（Aloe）是百合科多年生常綠肉質草本植物，富含多糖、有機酸、蛋白質、多肽、氨基酸以及多種礦物質等營養物質和多酚類還原性物質，被譽為“21世紀最佳保健食品”和純天然抗氧化劑，在食品、化工、醫藥等領域應用十分廣泛[1]。銀杏Ginkgo biloba L.又稱白果樹、公孫樹，屬銀杏科銀杏屬裸子植物，主產中國[2]。其葉、果和外種皮等皆具有藥用價值，被稱為“全身都是寶的活化石”[3]。國內外的一些研究表明，銀杏葉所含的黃酮化合物具有明顯抗氧化活性和抗自由基活性[4-6]?，F擬用大劑量乙醇造小鼠氧化損傷模型，研究蘆薈銀杏復合制劑的抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆薈銀杏復合制劑：XX生物科技有限公司；清潔級雄性昆明種小鼠（50只，體質量25 g～30 g，8周齡）：成都達碩生物科技有限公司，動物合格證號SCXK（川）2008-24。

50%乙醇（分析純）：寶信生物科技有限公司；GSH試劑盒、T-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒、MDA試劑盒、蛋白質羰基含量試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

UV-2800型紫外-可見分光光度計：尤尼柯（上海）儀器有限公司；BIO-RAD680酶標儀：上海普林斯頓生物科技發展有限公司；AU400生化分析儀：奧林巴斯中國有限公司；DY89-IDI電動玻璃勻漿器：寧波新芝科技有限公司；Thermo ST16低溫高速離心機Thermo Scientific；Xiang Yi-L530高速臺式離心機：長沙湘儀離心機儀器公司；HHSYZL-Ni電熱恒溫水浴箱北京長風儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 動物分組

實驗小鼠飼養溫度為18℃～22℃，濕度為55%～75%，自然光照，自由采食和飲水。實驗前將50只小鼠在實驗環境下給予基礎飼料適應性飼養7 d，按體質量隨機分成5組，分別為正常對照組、模型對照組、蘆薈銀杏復合制劑配方二低、中、高劑量組。

1.3.2 造模及給藥方法

低、中、高 3個劑量組分別按 500、1 000、2 000 mg/（kg·bw·d）的劑量灌胃給予不同濃度受試樣品，溶劑對照組和模型對照組給予同體積雙蒸水，連續灌胃30d，末次灌胃后，模型對照組和3個劑量組禁食16 h（過夜），然后1次性灌胃給予50%乙醇12mL/（kg·bw），正常對照組不作處理。

1.3.3 測試樣品的制備和檢測

模型對照組和實驗劑量組灌胃乙醇6 h后，股動脈取血致死，1.5mLEP管收集血液，3000r/min離心10min，取上清液備用。解剖小鼠，取肝臟，稱取0.4 g～0.5 g和0.1 g～0.2 g肝臟組織，分別加入9倍體積的生理鹽水（用于測肝臟GSH、T-SOD、GSH-Px和MDA含量）和蛋白質羰基含量測試盒試劑一（用于測肝臟蛋白質羰基含量），于勻漿器中制成10%的組織勻漿液，2 500 r/min離心10 min，取上清液備用。

采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒檢測血清和肝組織抗氧化物質GSH含量、抗氧化酶TSOD和GSH-Px活力、脂質氧化產物MDA含量以及蛋白質羰基含量；采用全自動生化分析儀測定肝組織蛋白含量。

1.4 數據處理

2 結果與分析

2.1 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠一般情況的影響

蘆薈銀杏復合制劑對小鼠一般情況的影響見表1。

表1 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠體重的影響（±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

表1 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠體重的影響（±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

組別 劑量/（g/kg·bw）動物數/只 0 d體重/g 15 d體重/g 30 d體重/g正常對照 0.00 10 27.70±1.42 39.00±3.16 45.50±2.55模型對照 0.00 10 28.30±1.83 42.30±3.30 46.10±2.96低劑量 0.19 10 28.60±1.37 42.00±2.63 47.00±2.54中劑量 0.38 10 28.70±2.54 39.50±2.91 46.90±1.73高劑量 0.76 10 28.70±1.61 40.60±3.31 47.00±1.83

表1表明，實驗結束時，模型對照組和各受試配方組與正常對照組比較體重均略有增加但無統計學意義（P＞0.05）。各組動物在實驗過程中活動正常，無異常表現，表明各配方對小鼠生長發育和一般健康情況無不良影響。

2.2 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠血清抗氧化能力的影響

蘆薈銀杏復合制劑對小鼠血清抗氧化能力的影響，見表2。

表2 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影響（±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（±S，N=10）

表2 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影響（±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（±S，N=10）

△：*表示與正常對照組比較P＜0.05；**表示與正常對照組比較P＜0.01；○表示與模型對照組比較P＜0.05；○○表示與模型對照組比較P＜0.01。

組別GSH/（mg/L）SOD/（U/mL）GSH-Px/（U/mL）MDA/（nmol/mL）正常對照 12.781±2.385 167.855±25.678 951.429±174.876 11.000±6.416模型對照 6.829±1.490** 95.056±25.277** 782.143±153.031* 39.500±10.659**低劑量 10.839±2.211○○ 143.836±43.387○○ 746.786±178.003 20.000±7.071○○中劑量 14.034±4.393○○ 150.791±35.146○○ 768.214±169.261 17.500±10.607○○高劑量 19.485±3.076○○ 154.501±27.365○○ 981.429±131.533○○ 8.500±4.116○○

表2表明，給予大劑量乙醇造模，模型對照組與溶劑對照組比較，小鼠血清GSH、SOD水平下降（P＜0.01），GSH-Px水平降低（P＜0.05），MDA 水平升高（P＜0.01）。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同劑量的蘆薈銀杏復合制劑30天后，經大劑量乙醇造模，各實驗組與模型對照組比較，小鼠血清GSH、SOD水平隨蘆薈銀杏復合制劑濃度增加升高（P＜0.01）；高劑量組 GSH-Px水平升高（P＜0.05）；MDA水平隨蘆薈銀杏復合制劑濃度增加降低（P＜0.01）。說明蘆薈銀杏復合制劑能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠血清抗氧化物質GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂質氧化產物MDA含量降低。

2.3 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠肝組織抗氧化能力的影響

蘆薈銀杏復合制劑對小鼠肝組織抗氧化能力的影響，見表3。

表3 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠肝組織GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白質羰基的影響（±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the effects of protein carbonyl（±S，N=10）

表3 蘆薈銀杏復合制劑對小鼠肝組織GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白質羰基的影響（±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the effects of protein carbonyl（±S，N=10）

△：*表示與正常對照組比較P＜0.05；**表示與正常對照組比較P＜0.01；○表示與模型對照組比較P＜0.05；○○表示與模型對照組比較P＜0.01。

組別GSH/（mg/gprot）SOD/（U/mgprot）GSH-Px/（U/mgprot）溶劑對照 6.808±1.467 195.843±21.325 365.721±65.858模型對照 5.497±0.809* 166.743±9.030** 311.444±47.389*低劑量 10.275±1.260○○ 180.218±13.822 353.854±38.931中劑量 15.274±1.752○○ 228.315±20.561○○ 541.652±72.063○○高劑量 19.378±1.733○○ 218.276±14.876○○ 471.245±49.828○○MDA/（nmol/mgprot）0.950±0.325 2.462±0.278**0.751±0.348○○0.738±0.114○○0.543±0.263○○蛋白質羰基/（nmol/mgpro）3.554±0.965 6.352±1.031**4.550±0.913○○2.552±0.918○○2.220±0.607○○

表3表明，給予大劑量乙醇造模，模型對照組與溶劑對照組比較，小鼠肝組織GSH和GSH-Px水平下降（P＜0.05），SOD 水平下降（P＜0.01），MDA 和蛋白質羰基水平升高（P＜0.01）。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同劑量的蘆薈銀杏復合制劑30天后，經大劑量乙醇造模，各實驗組與模型對照組比較，小鼠肝組織GSH水平隨蘆薈銀杏復合制劑濃度增加升高（P＜0.01）；蘆薈銀杏復合制劑中、高劑量組SOD和GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA和蛋白質羰基水平隨蘆薈銀杏復合制劑濃度增加降低（P＜0.01）。說明隨蘆薈銀杏復合制劑能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠肝組織抗氧化物質GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂質氧化產物MDA含量降低，蛋白質氧化產物蛋白質羰基含量降低。

3 結論

乙醇大量攝入，可激活氧分子產生自由基，導致組織細胞過氧化效應及體內還原性谷胱甘肽的耗竭[7]。灌胃大劑量乙醇是目前最新的衰老造模法。灌胃大劑量乙醇后，SOD活性下降，MDA含量升高[8-9]。本實驗中，給予50%乙醇12 mL/（kg·bw）造模，模型對照組與溶劑對照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSHPx水平均降低，MDA和蛋白質羰基水平均升高。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

機體防御體系的抗氧化能力的強弱與健康程度存在著密切聯系[10-11]。GSH的主要生理作用是清除體內的自由基，做為體內一種重要的抗氧化劑，保護蛋白質和酶等分子中的巰基。GSH-Px和SOD是機體內兩種重要的抗氧化酶。GSH-Px能催化過氧化氫的分解，SOD能夠清除超氧陰離子自由基，這兩種酶活力的變化能反映機體氧化損傷的程度；MDA和蛋白質羰基分別是脂質和蛋白質過氧化的產物，它們的變化可以反映細胞損傷的程度[12-13]。大量研究表明，當機體遭受自由基攻擊而被氧化時，抗氧化劑的注入和使用，使抗氧化物質GSH含量增加，血清和肝組織中抗氧化酶類SOD和GSH-Px活性等酶活性提高，MDA和蛋白質羰基含量下降，從而使機體的抗氧化能力增強[14-15]。

本實驗中，給予不同劑量的蘆薈銀杏復合制劑30天后，經大劑量乙醇造模，實驗劑量組與模型對照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSH-Px水平升高，MDA和蛋白質羰基水平降低。說明蘆薈銀杏復合制劑能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠血清和肝組織抗氧化物質GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂質氧化產物MDA含量降低，蛋白質氧化產物蛋白質羰基含量降低。

由于蘆薈凝膠中的多糖、酚類化合物和銀杏葉中的黃酮類化合物可以捕捉和清除 O2-·、·OH、H2O2、烷類自由基和脂類自由基等，通過對這些自由基起一種氫原子供體的作用而終止自由基連鎖反應鏈，從而阻止和抑制氧自由基反應和脂質、蛋白質過氧化反應，抑制LPO及其代謝產物丙二醛、共軛二烯等活性毒副物質的生成，抑制蛋白質羰基生成[4-6]。同時，酚類、黃酮類化合物還可參與調節和提高SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性[16-17]，從而發揮抗氧化功效。

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