金釵石斛的快速繁殖研究

李靜婷+牛磊+侯玉杰++

摘要：以野生金釵石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｄｅ Ｌｉｎｄｌ．）莖段為試驗材料，篩選啟動培養時的最佳取材部位、最適基本培養基、生根培養基與栽培基質，研究金釵石斛快速繁殖的途徑。結果表明，啟動培養時用金釵石斛幼莖基部接種，在ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１００ ｍＬ／Ｌ椰乳＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂的培養基上效果最好，誘芽率可達９３．００％。生根用ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋１００ ｇ／Ｌ香蕉＋２．０ ｇ／Ｌ活性炭＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂的培養基效果最好，生根率高達９５％。最優的組培苗栽培基質是水苔＋蛭石（３∶２，V∶V），成活率高達９０％。

關鍵詞：金釵石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｄｅ Ｌｉｎｄｌ．）；快速繁殖；培養基；栽培基質

中國分類號：Ｓ５６７．２３；R282文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０14）09－2181-03

ｔｈｅ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｄｅ Ｌｉｎｄｌ．

ＬＩ Ｊｉｎｇ－ｔｉｎｇ１， ＮＩＵ Ｌｅｉ２ａ， ＨＯＵ Ｙｕ－ｊｉｅ２ｂ

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｐｉｎｇｄｉｎｇｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｐｉｎｇｄｉｎｇｓｈａｎ ４６７０００， Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ； ２． ａ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｓｕｒｖｅｙｉｎｇ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ； ｂ． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｕｒｂａｎ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ， Ｐｉｎｇｄｉｎｇｓｈａｎ ４６７０３６， Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ｏｆ ｗｉｌｄ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｌｅ Ｌｉｎｄｌ． ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ ｍｅｄｉｕｍ for ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｒｏｏｔ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ for inducing ｂａｓａｌ ｐａｒｔ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｓｔｅｍｓ ｗａｓ ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ６-ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１００ ｍＬ／Ｌ ｃｏｃｏｎｕｔ ｍｉｌｋ＋２５ ｇ／Ｌ ｃａｎｅ ｓｕｇａｒ ＋６．３ ｇ／Ｌ ａｇａｒ，with ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ of ９３.00％. Tｈｅ ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋１００ ｇ／Ｌ ｂａｎａｎａ＋２．０ ｇ／Ｌ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃａｒｂｏｎ＋２５ ｇ／Ｌ ｃａｎｅ ｓｕｇａｒ＋６．３ ｇ／Ｌ ａｇａｒ， with ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ of ９５％． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｓｐｈａｇｎａ＋ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ（３∶２，V∶V）， with ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ of more than ９０％．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｌｅ Ｌｉｎｄｌ．； ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ； ｍｅｄｉｕｍ； ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ

金釵石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｄｅ Ｌｉｎｄｌ．）屬于蘭科石斛屬，是珍稀瀕危植物［１］，具有生津益胃、潤肺止咳、滋陰清熱、明目強身等功效。現代藥理研究表明，金釵石斛的水溶性多糖還具有抗輻射、防癌、抗腫瘤、減緩衰老、增強人體免疫力的作用，因而金釵石斛在治療、預防疾病及保健食品中被廣泛利用［２］。但是由于金釵石斛在野外對生境要求苛刻、分布狹窄、生長緩慢、繁殖系數極低、授粉率低、種子既小又無胚乳等原因［３］，在自然條件下正常發芽成苗率極低，加之長期過度采挖利用，使市場上金釵石斛貨源極其短缺，導致其價格高昂。為了滿足人們對金釵石斛的需求，迫切需要利用植物組織培養技術快速大量培育出優質組培苗，有效地解決種苗的需求；同時需要探索出一套成熟的金釵石斛栽培技術，大幅度提高金釵石斛的產量，這樣既能滿足中藥材市場和保健食品領域的需求，又可達到對金釵石斛資源的保護、野生資源的可持續發展及推動農業、種植業經濟發展的目的［４，５］。因此，近年來，許多學者對金釵石斛種子、莖尖、莖段組織培養技術進行了研究［５－７］，但大多數試管苗增殖系數低，試管苗莖細小、細弱，移栽成活率不高，影響了金釵石斛種苗快繁和大規模的工廠化生產。本試驗對金釵石斛的幼莖組織培養進行研究，對基本培養基進行優化和改進，篩選最適啟動培養基、生根培養基及栽培基質，探索金釵石斛快速繁殖的途徑。

１材料與方法

１．１試驗材料

供試材料為野生金釵石斛植株，來源于貴州省遵義市石筍鄉山區，在平頂山學院低山丘陵區修復重點實驗室的組織培養室人工栽入花盆中，栽培基質為珍珠巖：樹皮：鋸末=１∶１∶１（V∶V∶V，下同），栽培１０周后剪取幼莖作為試驗材料，進行組織培養研究。

１．２試驗方法

１．２．１啟動培養在金釵石斛的啟動培養中，對外植體的最佳取材部位、最合適的基本培養基和最理想的激素配比進行研究。

改良ＭＳ１和改良Ｂ５１兩種基本培養基的制備：改良ＭＳ１配方為ＭＳ＋１００ ｍＬ／Ｌ椰乳＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂，ｐＨ ５．６～５．８；改良Ｂ５１配方為Ｂ５＋１００ ｍＬ／Ｌ椰乳＋２５ ｇ／L蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂，ｐＨ ５．６～５．８。

以改良ＭＳ１和改良Ｂ５１為基礎培養基，添加不同濃度的６－ＢＡ和ＮＡＡ，接種不同取材部位，設計１８個試驗處理（表１），每個處理接種１０瓶。

１．２．２外植體滅菌和培養在生長健壯的盆栽金釵石斛母株上選擇肥壯的當年生幼莖［８］，去掉葉和根，先用自來水沖洗１０ ｍｉｎ后，在超凈工作臺上用無菌水漂洗３遍。將清洗干凈的幼莖放入滅過菌的小燒杯中，倒入７５％乙醇使之剛好淹沒外植體，并不斷輕晃燒杯，以利于增強滅菌效果，１５～２０ ｓ后快速倒掉乙醇，用無菌水重復沖洗４遍，再用０．１％的氯化汞對外植體消毒６～８ ｍｉｎ，滅菌結束后倒出消毒液，倒入適量的無菌水重復沖洗３～４遍。把消毒后的金釵石斛幼莖放在無菌紙上或無菌容器里，用無菌刀片切割成含１～２個節的莖段，接種在相應的培養基上，每瓶接８個莖段。在２３～２７ ℃，光照１２ ｈ／ｄ，光照度２ ０００ ｌｘ的條件下培養。

１．２．３生根培養改良ＭＳ２基本培養基的制備：ＭＳ＋１００ ｇ／Ｌ香蕉＋２．０ ｇ／Ｌ活性炭＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂，ｐＨ ５．６～５．８。

以改良ＭＳ２為基礎培養基，添加不同濃度的ＮＡＡ和ＩＢＡ。將啟動培養獲得的無菌叢生芽，在無菌條件下切成單芽，轉接到生根培養基上，共設３個處理（表２），每個處理接種１０瓶，每瓶接種１０個芽，培養２８～３５ ｄ。

endprint

１．２．４移栽組培瓶中的金釵石斛苗一直處于無菌、高濕和弱光照的環境中［９，１０］，因此，葉片缺乏角質層、蠟質層，加之細胞間隙大，氣孔多而開張大，根部根毛不發達，有些根由愈傷組織發育而來，因此其輸導組織與芽內的輸導組織銜接不好，雖外觀上肉質根粗壯，實際上其吸水能力較弱，既喜潮濕、又怕漚根。剛出瓶移栽的金釵石斛苗，生長條件在多個方面均有很大的改變，雜菌增加、濕度降低、光照增強、溫度升高、溫差變大［１１，１２］。在此環境中，植株易感染菌，葉片失水嚴重，根系吸水能力不足，吸水量小于蒸騰量，造成吸水與蒸騰失衡，最后導致萎蔫死亡。

要想解決這些問題，首先要為出瓶苗消毒，同時保證空氣濕度、適當遮光并選擇合適的栽培基質。當組培瓶中的苗高度達到６～８ ｃｍ時，敞開瓶口放置３～４ ｄ（時間過長培養基易發霉變質）［１３，１４］，讓小苗葉片初步接觸大環境以加速角質層的產生。然后挑選根系發育良好、粗壯的苗，洗凈培養基，經代森錳鋅消毒后，放置于陰涼處晾干，移栽到基質中，每個處理６０株苗，每６株叢植在１６ ｃｍ×１４ ｃｍ的營養缽中，合理地保濕、遮光。

２結果與分析

２．１啟動培養中取材部位、基本培養基和激素配比的篩選結果

將消毒接種后的莖段啟動培養５６ ｄ，統計結果見表１。從表１可以看出，根據金釵石斛的誘芽率分析，啟動培養的最佳部位是幼莖基部，最適基本培養基為改良ＭＳ１，６-ＢＡ：ＮＡＡ最理想的配比為６．０ ｍｇ／Ｌ：０．２ ｍｇ／Ｌ，此時誘芽率可達９３.00％（圖１Ａ）。

２．２改良ＭＳ２與不同激素配比對金釵石斛生根的影響

金釵石斛生根培養時，改良ＭＳ２與不同激素配比對其生根的影響結果見表２。從表２可以看出，處理３培養基培養的金釵石斛無論是生根率、根數，還是根的生長性狀都優于處理１、處理２。結果表明，金釵石斛生根培養基以改良ＭＳ２＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ為最佳，生根率高達９５％（圖１Ｂ）。

２．３不同基質對金釵石斛組培苗移栽成活率的影響

金釵石斛組培苗移栽３０ ｄ后計算幼苗成活率，統計結果見表３。從表３可以看出，金釵石斛組培苗以處理４即水苔＋蛭石（３∶２）調配的基質移栽成活率最高，達到９０％（圖１Ｃ）。

３結論與討論

目前，金釵石斛組培快繁主要通過原球莖途徑和叢生芽途徑。原球莖途徑是利用各種外植體誘導愈傷組織形成原球莖，進而誘導分化產生幼苗。叢生芽途徑是利用外植體不經愈傷組織直接誘導叢生芽，是一條“芽繁芽”的途徑，具有技術難度低、保證遺傳穩定性、誘導時間短、誘導率較高等優點。本試驗利用叢生芽途徑進行金釵石斛組培快繁，結果表明，金釵石斛啟動培養的最佳部位是幼莖基部，最適培養基為MS+6.0 ｍｇ／Ｌ 6-BA+0.2 ｍｇ／Ｌ NAA+100 ｍL／Ｌ椰乳+25 ｇ／Ｌ蔗糖+6.3 ｇ／Ｌ瓊脂，誘芽率可達93.00%；最適生根培養基為ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋１００ ｇ／Ｌ香蕉＋２．０ ｇ／Ｌ活性炭＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂，生根率高達９５％。通過試驗發現，活性碳對金釵石斛生根有顯著的作用，主要因為活性碳給植物造成了生根的暗環境，同時可以吸附植物代謝產生的一些生長抑制劑。活性碳對生根的顯著作用在其他植物的組織培養中也有報道［１５］。同時試驗發現，香蕉對金釵石斛叢生芽的生根有較好的促進作用，有利于培育壯苗，這與在蝴蝶蘭叢生芽的組織培養研究中的試驗結果一致［１６］。金釵石斛最優的組培苗栽培基質是水苔＋蛭石（３∶２），移栽成活率高達９０％。因為水苔吸水性和保水性強，蛭石透氣性強，二者搭配效果良好。而處理３即珍珠巖＋蛭石（２∶１）混合的基質成活率最低，只有３０％，可能是金釵石斛的根系生長需要偏酸性的環境，珍珠巖占的比例大又偏堿性，導致基質酸度不夠。

在今后的工作中還需要進一步研究金釵石斛在中原地區野外大面積栽植的途徑，以及野生金釵石斛與人工栽培的金釵石斛在生物堿成分、含量及其藥用價值等方面的差異。

參考文獻：

［１］ 李振堅，于耀，王雁，等．四種石斛蘭種胚發育進程研究［Ｊ］．廣西植物，２０１０，３０（３）：３３４－３３８．

［２］ 劉莉，李智敏，李晚誼．金釵石斛的研究進展［Ｊ］．云南大學學報（自然科學版），２００９，３１（Ｓ１）：５０９－５１２．

［３］ 吳輝，趙俊，宋錫全．四種不同培養基對誘導金釵石斛幼苗生根的影響［Ｊ］．貴州科學，２００７，２５（２）：６５－６７．

［４］ 宋錫全，宋琴曲．金釵石斛莖段培養再生綠色植株［Ｊ］．貴州師范大學學報（自然科學版），２００３，２１（３）：８０－８２．

［５］ 唐金剛，盧文蕓，乙引，等．藥用金釵石斛快速繁殖的研究［Ｊ］．貴州科學，２００７，２５（１）：５９－６２．

［６］ 孫廷，楊玉珍，胡如善．金釵石斛的組織培養和快繁技術［Ｊ］．山東農業大學學報（自然科學版），２００５，３６（１）：４７－５０．

［７］ 李慶宏，宋常美．金釵石斛愈傷組織培養［Ｊ］．貴陽學院學報（自然科學版），２０１１，６（３）：７６－７９.

［８］ 張艷，范俊安，李泉森，等．金釵石斛培養初步研究［Ｊ］．時珍國醫國藥，２００１，１２（２）：１８９－１９０．

［９］ 鄭永娟，湯春梅．植物組織培養［Ｍ］．北京：中國水利水電出版社，２０１２．

［１０］ 陳世昌．植物組織培養［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２０１１．

［１１］ 葛勝娟．植物組織培養［Ｍ］．北京：中國農業出版社，２００８．

［１２］ 彭星元．植物組織培養技術［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００６．

［１３］ 張鳳銀，張萍，張靜，等．金釵石斛蘭組培苗的生根培養和移栽［Ｊ］．江漢大學學報（自然科學版），２００９，３７（２）：９８－１００．

［１４］ 唐德英，王云強，段立勝．金釵石斛種苗繁育技術［Ｊ］．時珍國醫國藥，２００７，１８（４）：１０２０．

［１５］ 徐莉莉，聶世現，黃文靜，等．冬凌草組織培養及其愈傷組織誘導研究［Ｊ］．生物學雜志，２０１０，２７（３）：２４－２６．

［１６］ 李金麗，洪麗萍．蝴蝶蘭叢生芽途徑的組織培養技術［Ｊ］．熱帶作物學報，２０１０，３１（４），６１０－６１３．

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１．２．４移栽組培瓶中的金釵石斛苗一直處于無菌、高濕和弱光照的環境中［９，１０］，因此，葉片缺乏角質層、蠟質層，加之細胞間隙大，氣孔多而開張大，根部根毛不發達，有些根由愈傷組織發育而來，因此其輸導組織與芽內的輸導組織銜接不好，雖外觀上肉質根粗壯，實際上其吸水能力較弱，既喜潮濕、又怕漚根。剛出瓶移栽的金釵石斛苗，生長條件在多個方面均有很大的改變，雜菌增加、濕度降低、光照增強、溫度升高、溫差變大［１１，１２］。在此環境中，植株易感染菌，葉片失水嚴重，根系吸水能力不足，吸水量小于蒸騰量，造成吸水與蒸騰失衡，最后導致萎蔫死亡。

要想解決這些問題，首先要為出瓶苗消毒，同時保證空氣濕度、適當遮光并選擇合適的栽培基質。當組培瓶中的苗高度達到６～８ ｃｍ時，敞開瓶口放置３～４ ｄ（時間過長培養基易發霉變質）［１３，１４］，讓小苗葉片初步接觸大環境以加速角質層的產生。然后挑選根系發育良好、粗壯的苗，洗凈培養基，經代森錳鋅消毒后，放置于陰涼處晾干，移栽到基質中，每個處理６０株苗，每６株叢植在１６ ｃｍ×１４ ｃｍ的營養缽中，合理地保濕、遮光。

２結果與分析

２．１啟動培養中取材部位、基本培養基和激素配比的篩選結果

將消毒接種后的莖段啟動培養５６ ｄ，統計結果見表１。從表１可以看出，根據金釵石斛的誘芽率分析，啟動培養的最佳部位是幼莖基部，最適基本培養基為改良ＭＳ１，６-ＢＡ：ＮＡＡ最理想的配比為６．０ ｍｇ／Ｌ：０．２ ｍｇ／Ｌ，此時誘芽率可達９３.00％（圖１Ａ）。

２．２改良ＭＳ２與不同激素配比對金釵石斛生根的影響

金釵石斛生根培養時，改良ＭＳ２與不同激素配比對其生根的影響結果見表２。從表２可以看出，處理３培養基培養的金釵石斛無論是生根率、根數，還是根的生長性狀都優于處理１、處理２。結果表明，金釵石斛生根培養基以改良ＭＳ２＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ為最佳，生根率高達９５％（圖１Ｂ）。

２．３不同基質對金釵石斛組培苗移栽成活率的影響

金釵石斛組培苗移栽３０ ｄ后計算幼苗成活率，統計結果見表３。從表３可以看出，金釵石斛組培苗以處理４即水苔＋蛭石（３∶２）調配的基質移栽成活率最高，達到９０％（圖１Ｃ）。

３結論與討論

目前，金釵石斛組培快繁主要通過原球莖途徑和叢生芽途徑。原球莖途徑是利用各種外植體誘導愈傷組織形成原球莖，進而誘導分化產生幼苗。叢生芽途徑是利用外植體不經愈傷組織直接誘導叢生芽，是一條“芽繁芽”的途徑，具有技術難度低、保證遺傳穩定性、誘導時間短、誘導率較高等優點。本試驗利用叢生芽途徑進行金釵石斛組培快繁，結果表明，金釵石斛啟動培養的最佳部位是幼莖基部，最適培養基為MS+6.0 ｍｇ／Ｌ 6-BA+0.2 ｍｇ／Ｌ NAA+100 ｍL／Ｌ椰乳+25 ｇ／Ｌ蔗糖+6.3 ｇ／Ｌ瓊脂，誘芽率可達93.00%；最適生根培養基為ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋１００ ｇ／Ｌ香蕉＋２．０ ｇ／Ｌ活性炭＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂，生根率高達９５％。通過試驗發現，活性碳對金釵石斛生根有顯著的作用，主要因為活性碳給植物造成了生根的暗環境，同時可以吸附植物代謝產生的一些生長抑制劑。活性碳對生根的顯著作用在其他植物的組織培養中也有報道［１５］。同時試驗發現，香蕉對金釵石斛叢生芽的生根有較好的促進作用，有利于培育壯苗，這與在蝴蝶蘭叢生芽的組織培養研究中的試驗結果一致［１６］。金釵石斛最優的組培苗栽培基質是水苔＋蛭石（３∶２），移栽成活率高達９０％。因為水苔吸水性和保水性強，蛭石透氣性強，二者搭配效果良好。而處理３即珍珠巖＋蛭石（２∶１）混合的基質成活率最低，只有３０％，可能是金釵石斛的根系生長需要偏酸性的環境，珍珠巖占的比例大又偏堿性，導致基質酸度不夠。

在今后的工作中還需要進一步研究金釵石斛在中原地區野外大面積栽植的途徑，以及野生金釵石斛與人工栽培的金釵石斛在生物堿成分、含量及其藥用價值等方面的差異。

參考文獻：

［１］ 李振堅，于耀，王雁，等．四種石斛蘭種胚發育進程研究［Ｊ］．廣西植物，２０１０，３０（３）：３３４－３３８．

［２］ 劉莉，李智敏，李晚誼．金釵石斛的研究進展［Ｊ］．云南大學學報（自然科學版），２００９，３１（Ｓ１）：５０９－５１２．

［３］ 吳輝，趙俊，宋錫全．四種不同培養基對誘導金釵石斛幼苗生根的影響［Ｊ］．貴州科學，２００７，２５（２）：６５－６７．

［４］ 宋錫全，宋琴曲．金釵石斛莖段培養再生綠色植株［Ｊ］．貴州師范大學學報（自然科學版），２００３，２１（３）：８０－８２．

［５］ 唐金剛，盧文蕓，乙引，等．藥用金釵石斛快速繁殖的研究［Ｊ］．貴州科學，２００７，２５（１）：５９－６２．

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［７］ 李慶宏，宋常美．金釵石斛愈傷組織培養［Ｊ］．貴陽學院學報（自然科學版），２０１１，６（３）：７６－７９.

［８］ 張艷，范俊安，李泉森，等．金釵石斛培養初步研究［Ｊ］．時珍國醫國藥，２００１，１２（２）：１８９－１９０．

［９］ 鄭永娟，湯春梅．植物組織培養［Ｍ］．北京：中國水利水電出版社，２０１２．

［１０］ 陳世昌．植物組織培養［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２０１１．

［１１］ 葛勝娟．植物組織培養［Ｍ］．北京：中國農業出版社，２００８．

［１２］ 彭星元．植物組織培養技術［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００６．

［１３］ 張鳳銀，張萍，張靜，等．金釵石斛蘭組培苗的生根培養和移栽［Ｊ］．江漢大學學報（自然科學版），２００９，３７（２）：９８－１００．

［１４］ 唐德英，王云強，段立勝．金釵石斛種苗繁育技術［Ｊ］．時珍國醫國藥，２００７，１８（４）：１０２０．

［１５］ 徐莉莉，聶世現，黃文靜，等．冬凌草組織培養及其愈傷組織誘導研究［Ｊ］．生物學雜志，２０１０，２７（３）：２４－２６．

［１６］ 李金麗，洪麗萍．蝴蝶蘭叢生芽途徑的組織培養技術［Ｊ］．熱帶作物學報，２０１０，３１（４），６１０－６１３．

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１．２．４移栽組培瓶中的金釵石斛苗一直處于無菌、高濕和弱光照的環境中［９，１０］，因此，葉片缺乏角質層、蠟質層，加之細胞間隙大，氣孔多而開張大，根部根毛不發達，有些根由愈傷組織發育而來，因此其輸導組織與芽內的輸導組織銜接不好，雖外觀上肉質根粗壯，實際上其吸水能力較弱，既喜潮濕、又怕漚根。剛出瓶移栽的金釵石斛苗，生長條件在多個方面均有很大的改變，雜菌增加、濕度降低、光照增強、溫度升高、溫差變大［１１，１２］。在此環境中，植株易感染菌，葉片失水嚴重，根系吸水能力不足，吸水量小于蒸騰量，造成吸水與蒸騰失衡，最后導致萎蔫死亡。

要想解決這些問題，首先要為出瓶苗消毒，同時保證空氣濕度、適當遮光并選擇合適的栽培基質。當組培瓶中的苗高度達到６～８ ｃｍ時，敞開瓶口放置３～４ ｄ（時間過長培養基易發霉變質）［１３，１４］，讓小苗葉片初步接觸大環境以加速角質層的產生。然后挑選根系發育良好、粗壯的苗，洗凈培養基，經代森錳鋅消毒后，放置于陰涼處晾干，移栽到基質中，每個處理６０株苗，每６株叢植在１６ ｃｍ×１４ ｃｍ的營養缽中，合理地保濕、遮光。

２結果與分析

２．１啟動培養中取材部位、基本培養基和激素配比的篩選結果

將消毒接種后的莖段啟動培養５６ ｄ，統計結果見表１。從表１可以看出，根據金釵石斛的誘芽率分析，啟動培養的最佳部位是幼莖基部，最適基本培養基為改良ＭＳ１，６-ＢＡ：ＮＡＡ最理想的配比為６．０ ｍｇ／Ｌ：０．２ ｍｇ／Ｌ，此時誘芽率可達９３.00％（圖１Ａ）。

２．２改良ＭＳ２與不同激素配比對金釵石斛生根的影響

金釵石斛生根培養時，改良ＭＳ２與不同激素配比對其生根的影響結果見表２。從表２可以看出，處理３培養基培養的金釵石斛無論是生根率、根數，還是根的生長性狀都優于處理１、處理２。結果表明，金釵石斛生根培養基以改良ＭＳ２＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ為最佳，生根率高達９５％（圖１Ｂ）。

２．３不同基質對金釵石斛組培苗移栽成活率的影響

金釵石斛組培苗移栽３０ ｄ后計算幼苗成活率，統計結果見表３。從表３可以看出，金釵石斛組培苗以處理４即水苔＋蛭石（３∶２）調配的基質移栽成活率最高，達到９０％（圖１Ｃ）。

３結論與討論

目前，金釵石斛組培快繁主要通過原球莖途徑和叢生芽途徑。原球莖途徑是利用各種外植體誘導愈傷組織形成原球莖，進而誘導分化產生幼苗。叢生芽途徑是利用外植體不經愈傷組織直接誘導叢生芽，是一條“芽繁芽”的途徑，具有技術難度低、保證遺傳穩定性、誘導時間短、誘導率較高等優點。本試驗利用叢生芽途徑進行金釵石斛組培快繁，結果表明，金釵石斛啟動培養的最佳部位是幼莖基部，最適培養基為MS+6.0 ｍｇ／Ｌ 6-BA+0.2 ｍｇ／Ｌ NAA+100 ｍL／Ｌ椰乳+25 ｇ／Ｌ蔗糖+6.3 ｇ／Ｌ瓊脂，誘芽率可達93.00%；最適生根培養基為ＭＳ＋６．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋１００ ｇ／Ｌ香蕉＋２．０ ｇ／Ｌ活性炭＋２５ ｇ／Ｌ蔗糖＋６．３ ｇ／Ｌ瓊脂，生根率高達９５％。通過試驗發現，活性碳對金釵石斛生根有顯著的作用，主要因為活性碳給植物造成了生根的暗環境，同時可以吸附植物代謝產生的一些生長抑制劑。活性碳對生根的顯著作用在其他植物的組織培養中也有報道［１５］。同時試驗發現，香蕉對金釵石斛叢生芽的生根有較好的促進作用，有利于培育壯苗，這與在蝴蝶蘭叢生芽的組織培養研究中的試驗結果一致［１６］。金釵石斛最優的組培苗栽培基質是水苔＋蛭石（３∶２），移栽成活率高達９０％。因為水苔吸水性和保水性強，蛭石透氣性強，二者搭配效果良好。而處理３即珍珠巖＋蛭石（２∶１）混合的基質成活率最低，只有３０％，可能是金釵石斛的根系生長需要偏酸性的環境，珍珠巖占的比例大又偏堿性，導致基質酸度不夠。

在今后的工作中還需要進一步研究金釵石斛在中原地區野外大面積栽植的途徑，以及野生金釵石斛與人工栽培的金釵石斛在生物堿成分、含量及其藥用價值等方面的差異。

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