信號誘導增殖相關蛋白1與16、18型人乳頭瘤病毒E6蛋白在宮頸癌中的表達和應用價值

王川紅

鄭州市婦幼保健院產科，河南鄭州 450000

宮頸癌屬于比較常見的婦科惡性腫瘤，好發年齡為15～44歲，在近些年來，該病的發病率呈現逐年上升的總體趨勢，而且以局部浸潤與淋巴轉移狀態作為最為主要的轉移方式[1]。相關醫學研究證明，人乳頭瘤病毒(HPV)的感染屬于引發宮頸癌的第一因素，并且還以16型和18型HPV(即HPV16/18型)為最常見。在HPV發病早期，通常蛋白E6和E7是導致宮頸癌癌變的關鍵，而E6蛋白又會造成活化狀態的Rap-GTP水平增高，結果導致腫瘤的最終發生[2]。為了探討SIP A1在正常宮頸組織與宮頸癌組織中的表達，并且深入分析HPV16/18 E6與SIP A1和宮頸癌浸潤轉移等方面的關系和影響，本文進行了深入的研究，取得了較好的研究效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇自2010年10月—2013年9月間本院婦科住院的宮頸癌患者共251例做為研究組，患者的年齡在25～69歲之間，平均年齡為（46.27±5.87）歲。全部的患者都已經完成廣泛子宮切除聯合盆腔淋巴結切除術，經過手術以后的腫瘤病理檢查，明確屬于盆腔淋巴結已轉移的患者共65例，患者共186例。并選取了在同時期內,因為子宮肌瘤進行子宮切除手術的279例患者獲得正常宮頸組織石臘標本做為對照組，該組患者的年齡在26～70歲之間，平均年齡年齡為（45.62±6.45）歲。該兩組患者在年齡方面對比，其差異沒有統計學意義。

1.2 方法

本研究運用三去污劑法來提取在對數生長期內的宮頸癌細胞株的總蛋白，包括HT3、C33A、HeLa和SiHa以及CaSki等，之后則采用Western blot法來檢測SIPA1蛋白與HPV16/18 E6蛋白的水平。以上細胞株運用DMEM培養基，置于37℃環境下的5%CO2培養箱內進行培養。另外運用Envision法來進行正常宮頸組與宮頸癌組織中的SIP A1和HPV16/18 E6的表達的檢測，全部結果均由3位病理學專家進行獨立的判斷并決定。

1.3 觀察指標

通過計算SIPA1與HPV16/18 E6在正常的宮頸組織與宮頸癌組織中所表達的陽性率，以此探討SIP A1的表達和HPV16/18 E6指標的相關性。

1.4 統計學處理

研究資料采用SPSS 18.0軟件包進行處理。計數資料運用χ2檢驗，組間數據的相關性研究則運用Spearman秩和進行相關分析，以P＜0.05為檢驗水準。有之則表示有明顯的差異，具有統計學意義。

2 結果

SIP A1在正常宮頸組織和宮頸癌組織中表達的陽性率分別為86.2%(56/65)和57.8%(145/251)，兩組陽性率之間比較，差異有高度統計學意義(χ2=12.93，P＜0.01)。HPV16/18 E6 在正常宮頸組織和宮頸癌組織中的陽性率分別為27.7%(18/65)和78.9%(198/251)，兩組陽性率之間比較，差異有高度統計學意義(χ2=36.85，P<0.01)。HPV16/18 E6陰性的HT3和C33A細胞株中的SIP A1蛋白呈現陽性表達，而HPV16/18 E6陽性的SiHa和HeLa及CaSki細胞株中沒有SIP A1蛋白表達，表明SIPA1表達與HPV16/18 E6表達呈負相關關系。

3 討論

人乳頭瘤病毒（HPV）感染屬于引發宮頸癌疾病的主要因素，而HPV E6和E7早期蛋白也是導致宮頸癌的關鍵條件，同時，E6蛋白除了能夠明顯抑制P53功能以外，還能夠有效地降解E6 TP1造成活化狀態的Rap水平的升高，從而促使了各類腫瘤的最終發生。SIP A1在近些年來才被發現，和腫瘤浸潤轉移有著密切關系的基因，又屬于Rap1-GTP酶激活蛋白，在長期以來，SIP A1基因一直被認為發揮著抑制癌癥基因的功能[3]。有相關研究[4]證明，Rap1和細胞能黏附與轉移相關的因子，以活化形式Rap1來促進細胞間的黏附連接，并且非活化形式的Rap1-GAP也可以有效地對黏附連接的形成產生阻止作用，甚至能夠讓已經完成的黏附連接受到損害，從而又積極參與到人體腫瘤細胞的浸潤和轉移過程。

本研究結果顯示，運用Western blot方法進行檢驗，在HPV16/18 E6陰性中的HT3和C33A細胞株中，SIP A1蛋白指標呈現為陽性，但是通過Envision方法進行檢測以后，SIP A1在正常的宮頸組織中，其陽性率卻顯著地高于宮頸癌組織陽性率，并且，HPV16/18 E6蛋白在正常的宮頸組織中的陽性率又顯著的低于宮頸癌組織，這種表現從細胞學與組織學上，這充分說明SIP A1和HPV 16/18 E6蛋白的表達呈現著負相關關系，并且表達水平與盆腔淋巴結轉移有關。張莉華研究[5]認為，SIP A1的表達水平和宮頸癌中盆腔淋巴結轉移有著密切關聯，該表達水平如果低下或者是沒有表達，就會提示宮頸癌盆腔淋巴結轉移的風險。

通過本研究結果還可以看出，HPV16/18 E6蛋白在患者宮頸癌的發生與發展過程中發揮著重要的作用，而SIP A1和E6蛋白之間所存在著的負相關關系，又大大拓展了宮頸癌組織對于E6蛋白功能的作用，這又將使其對有關宮頸癌的轉移機制的研究方向更為清晰[6]。因此，可能會成為醫學界對宮頸癌轉移傾向進行預測的一個主要指標，有著較大的臨床研究和應用價值。

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[4]李芳芳,方紅輝,馮志勇,等.高危人乳頭瘤病毒基因型與宮頸癌篩查[J].生物技術通訊，2011,29,35(6):309-310.

[5]張莉華,辛華棟,吳士茜.HPV16-E6蛋白在宮頸病變組織中的表達及臨床應用[J].河北醫藥，2010,18(12):142.

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