血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測對深部真菌感染的診斷價值

吳玲玲，陳國敏，許會彬，王化芬，田玉靜，楊豐梅，沈 雨

（1-3）-β-D葡聚糖是由D-葡聚糖合成的細胞壁多聚糖，占真菌細胞壁成分的50%以上[1]。研究表明，除結合菌外，所有真菌的細胞壁均含有（1-3）-β-D葡聚糖，而其他微生物、動物及人的細胞成分和細胞外液均不含有這種成分，因此在機體的體液或血液中檢測（1-3）-β-D葡聚糖水平可以作為診斷深部真菌感染的依據[2]。本研究對98例疑似深部真菌感染患者血漿（1-3）-β-D葡聚糖含量進行檢測，同時對患者痰標本進行培養，探討血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測對深部真菌感染的診斷價值，以期對臨床抗真菌感染提供依據。

1 資料與方法

1.1 標本來源 2012年01月—2013年01月筆者所在醫院疑似深部真菌感染的患者98例，同時行血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測和痰培養。

1.2 儀器與試劑 MB-80微生物動態快速檢測系統，GKT-1M Set動態真菌檢測試劑盒，T02智能恒溫儀以及冰浴槽均購自北京金山川科技發展公司，血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板及麥康凱瓊脂平板均購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測 ①血漿制備：無菌操作，用專用無熱源真空采血管取靜脈血4 ml輕輕混勻，3000 r/min離心1 min獲得富含血小板血漿；②樣品處理：取上述富含血小板血漿0.1 ml，加入樣品處理液中，搖勻后插入恒溫加熱區中進行70℃干熱10 min，取出后立刻放入冰浴槽中3 min冷卻至30℃ 以下，即為待測血漿樣品；③樣品測定：取待測血漿樣品0.2 ml加入反應主劑中，輕輕混勻，待完全溶解后，全部移液至平底試管中，立刻插入MB-80微生物快速動態檢測系統中進行檢測，反應結束后儀器自動計算結果。

1.3.2 真菌培養 采用傳統固體平板培養法。

1.3.3 統計學處理 采用SPSS 12.0進行分析。檢測數據以均數±標準差（±s）表示，計量資料組間比較采用t檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩種方法陽性檢出率比較 對98例疑似真菌感染的患者檢測血漿（1-3）-β-D葡聚糖，51例標本檢測陽性，陽性率為52.04%。同時對患者行痰培養，培養出真菌標本32例，陽性率為32.65%。其中，28例標本的血漿（1-3）-β-D葡聚糖陽性，另有4例標本血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測陰性而真菌培養陽性。血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測陽性檢出率明顯高于痰培養法（P<0.05）。

2.2 痰培養陽性組與痰培養陰性組血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測結果 28例痰培養陽性組血漿（1-3）-β-D葡聚糖含量為（249.44±30.22） pg/ml，70 例痰培養陰性組含量為（119.55±15.11）pg/ml，兩組間比較差異具有統計學意義（P<0.05）。

3 討 論

近年來，隨著廣譜抗生素和免疫抑制劑的應用，深部真菌感染的發病率逐年上升。目前最常用的真菌檢測方法是真菌涂片鏡檢和真菌培養鑒定。但真菌涂片鏡檢人工操作誤差大，易漏檢；而真菌培養鑒定雖可靠性強，可作為臨床真菌感染的診斷依據，但所需時間長，延誤了最佳診療時機。因此急需一種診斷患者深部真菌感染的快速敏感的方法，以便及早用藥及時治療。

（1-3）-β-D葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中，當人體發生深部真菌感染時，真菌經吞噬細胞的吞噬處理后，（1-3）-β-D葡聚糖可從胞壁中釋放出來，使其在血液及其他體液中含量升高。有文獻報道通過檢測血漿（1-3）-β-D葡聚糖，發現其對早期診斷深部真菌感染具有指導作用[3]。李波等[4]發現血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測法對兒童深部真菌感染的診斷陽性率明顯高于傳統真菌培養法。

本文結果表明98例疑似深部真菌感染患者血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測法的陽性檢出率為52.04%，明顯高于痰培養陽性率（32.65%）。痰培養陽性患者的血漿（1-3）-β-D葡聚糖濃度為（249.44±30.22）pg/ml明顯高于痰培養陰性組的（119.55±15.11）pg/ml。本文中尚有4例標本痰真菌培養陽性而血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測陰性，原因可能為只是上呼吸道感染，即淺部真菌感染。

血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測法取材方便，獲得結果時間短，因此大大提高了診斷效率，能迅速提示有無深部真菌感染。但是有些干擾因素如抗腫瘤藥物及磺胺類藥物等的使用，手術中使用的紗布和血液透析中的某些類型纖維素膜等均可導致該檢測出現假陽性。因此，對于血漿（1-3）-β-D葡聚糖陽性的患者也要結合影像學及臨床癥狀綜合診斷。

總之，通過血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測輔助診斷深部真菌感染簡便快捷，可作為檢測深部真菌感染的早期診斷方法。

[1]Miyazaki T，Kohno S， Mitsutake K， et al.Plasma（1-3）-β-D glucan and fungal antigenemia in patients with candidemia，aspergillosis， and cryptococcosis[J].J Clin Microbiol， 1995，33（12）：3115-3118.

[2]Karageorgopoulos DE， Vouloumanou EK， Ntziora F， et al.Beta－D－glucan assay for the diagnosis of invasive fungal infections：a meta-analysis[J].Clin Infect Dis， 2011，52（6）：750-770.

[3]Einsele H，Loeffler J.Contribution of new diagnostic approaches to antifungal treatment plans in high-risk haematology patients[J].Clin Microbiol Infect， 2008，14（Suppl 4）：37-45.

[4]李 波.血漿（1-3）-β-D-葡聚糖檢測兒童深部真菌感染診斷的臨床研究[J]. 四川醫學， 2011，32（4）：475-476.